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滴水珠组培快繁的实验研究



全 文 :2012 年 8 月
第 26 卷第 3 期总 89 期
北京联合大学学报(自然科学版)
Journal of Beijing Union University(Natural Sciences)
Aug. 2012
Vol. 26 No. 3 Sum No. 89
[收稿日期] 2011 - 10 - 25
[基金项目] 浙江省重点创新团队(中医内科临床创新团队)科研基金项目(2009R50042)。
[作者简介] 李伟平(1988—) ,男,浙江建德人,浙江中医药大学药学院硕士,研究方向为中药生物技术。
滴水珠组培快繁的实验研究
李伟平,马丹丹,蒋福升,陈铌铍,丁志山
(浙江中医药大学,浙江 杭州,310053)
[摘 要] 目的:通过滴水珠组织培养及快速繁殖,解决滴水珠的资源匮乏问题。方法:以滴水
珠的珠芽和叶片及叶柄为外植体,进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化、丛生芽的增殖、生根诱导及
组培苗的移栽研究。采用酸性染料比色法测定滴水珠愈伤组织中总生物碱的含量。结果:滴水
珠组织培养的最佳外植体为叶片,在 MS + 6 - BA 2. 0 mg /L + NAA 0. 2 mg /L 的培养基上可以较
好地诱导出滴水珠的愈伤组织,滴水珠愈伤分化及丛生芽增殖的最适培养基为 MS + 6 - BA 0. 5
mg /L + NAA 0. 25 mg /L,生根诱导最适培养基为 1 /2MS + NAA 0. 25 mg /L。在培养基中添加 100
g /L 的香蕉汁具有促进滴水珠丛芽增殖及生根的作用。滴水珠愈伤组织中的总生物碱含量为
0. 784 8%。结论:初步建立了完整的滴水珠的组织培养体系,并成功移栽。
[关键词] 滴水珠;组织培养;总生物碱
[中图分类号] Q 13 [文献标志码] A [文章编号] 1005-0310(2012)03-0046-06
A Study on Rapid Propagation Technology
of Cordate Pinellia Tuber
LI Wei-ping,MA Dan-dan,JIANG Fu-sheng,CHENG Ni-pi,DING Zhi-shan
(Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,China)
Abstract:Objective:To solve the lack of resoures of Cordate Pinellia Tuber through tissue culture and rapid
propagation technology. Method:Using the bulbule,leaves and leafstalk of Cordate Pinellia Tuber as explants to
study the technology of callus induction,callus differentiation,Clustered buds proliferation,root induction and
transplantation of tissue culture seedlings;to determine the total alkaloid content in Cordate Pinellia Tuber callus
using Acid dye colorimetry. Results:Leaves were the best tissue culture explants of Cordate Pinellia Tuber,MS +
6 - BA 2. 0 mg /L + NAA 0. 2 mg /L is a good medium to induce callus of Cordate Pinellia Tuber. The best callus
differentiation and Clustered buds proliferation medium is MS + 6 - BA 0. 5 mg /L + NAA 0. 25 mg /L,and the
best roots induce medium is 1 /2MS + NAA 0. 25 mg /L. It can promote the Clustered buds proliferation and root
grows when added 100 g /L to the medium. The total alkaloid in Cordate Pinellia Tuber callus is 0. 784 8% .
Conclusion:a rapid propagation technology of Cordate Pinellia Tuber is established in this study,and the
transplantation was successful.
Key words:Cordate Pinellia Tuber;tissue culture;total alkaloid
0 引言
滴水珠(Plnellia cordata N. B. Br.)为天南星科
植物滴水珠的干燥块茎,性温、味辛、有小毒,具有
解毒消肿、散瘀止痛等功效,临床上广泛用于治疗
头痛、神经痛、胃病和腹痛等疾病。此外,滴水珠在
DOI:10.16255/j.cnki.ldxbz.2012.03.011
第 26 卷第 3 期 李伟平等:滴水珠组培快繁的实验研究
治疗毒蛇咬伤方面有较好效果,对蝮蛇、五步蛇、竹
叶青、眼镜蛇等毒蛇的咬伤,滴水珠均有一定疗效。
由于滴水珠良好的药理作用,使滴水珠在临床上得
到广泛使用,但由于滴水珠对生长环境的要求较
高,加上药农的不断采挖,滴水珠资源已接近枯竭,
因此,采用现代生物技术快速繁殖滴水珠势在必
行。本研究对滴水珠组培快繁技术进行了系统研
究,并对所诱导的滴水珠愈伤组织中总生物碱的含
量进行了测定。
1 实验材料和试剂
1. 1 实验材料和试剂
KNO3(AR,上海化专实验二厂,批号 100401) ;
琼脂粉(BR,国药集团化学试剂有限公司,批号
F20091119) ;MS 培养基(BR,上海宇涵生物科技有
限公司,批号 110412) ;抗坏血酸(AR,广东光华化
学有限公司,批号 20050830) ;无水氯化钙(AR,杭
州高晶细化工有限公司,批号 20060228) ;6-苄基嘌
呤(AR,上 海 伯 奥 生 物 科 技 有 限 公 司,批 号
080116) ;1-萘乙酸(AR,中国医药(集团)上海化学
试剂公司,批号 F20020528) ;2,4-二氯苯氧乙酸
(AR,上海试四赫维化工有限公司,批号 080401) ;
盐酸麻黄碱对照品 (中国药品生物制品检定所,批
号 171241-201007) ;溴甲酚绿(AR,上海三爱思试
剂有限公司,批号 20071219) ;柠檬酸(AR,宜兴第
二化学试剂厂,批号 920709) ;柠檬酸钠(AR,浙江
杭州萧山化学试剂厂,批号 020704)。
1. 2 实验仪器设备
LDZX-75KBS 立式压力蒸汽灭菌器(上海申安
医疗器械厂) ;SW-CJ-2FD 超净工作台(苏州安泰空
气技术有限公司) ;DK-S24 电热恒温水浴锅 (上海
森信实验仪器有限公司) ;LDZ5-2 低速自动平衡离
心机 (北京医用离心机厂) ;AR2130 电子精密天平
(Ohaus Corp. Pine Brook,NJ,USA) ;D180C 自动双
重纯水蒸馏器(上海申胜生物技术有限公司) ;
UV8500 紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限
公司)。
2 实验方法步骤
2. 1 外植体的接种培养
取野生临安滴水珠,先用自来水洗去滴水珠上
的泥土,再用洗衣粉水浸泡 30 min,然后用自来水
冲洗 20 min。外植体冲洗干净后,进行消毒处理。
消毒方法:先用 75%酒精消毒 30 s,用无菌水冲洗 2
次,再用 0. 1%升汞消毒 10 min,再用无菌水冲洗 5
~ 6 次[1],取出后放在含有无菌滤纸的平皿中,吸
取多余水分。
2. 2 滴水珠愈伤组织的诱导及分化
将已消毒的滴水珠的珠芽、嫩叶片切成 1 × 1
cm2、新鲜叶柄切成长 1 cm 左右,接种于 MS + 6-BA
2 mg /L + NAA 0. 2 mg /L 培养基中,珠芽、嫩叶片与
叶柄均接种 50 个。接种过程在无菌超净台中完
成。培养期间观察外植体的变化,并在 4 周后计算
诱导率及污染率。由嫩叶片、叶柄在 MS + 6-BA
2. 0 mg /L + NAA 0. 2 mg /L 培养基中诱导出的愈伤
组织,切成小块接种到分化培养基中。此处所采用
的分化培养基有以下 7 种,pH 值均为 5. 8: (1)MS
+ 6-BA 2 mg /L + NAA 0. 2 mg /L; (2)MS + 6-BA
0. 5 mg /L + NAA 0. 25 mg /L; (3)MS + 6-BA 0. 5
mg / L + IBA 0. 25 mg /L;(4)1 /2MS + NAA 0. 25 mg /
L;(5)1 /2MS + IBA 0. 25 mg /L;(6)MS + NAA 0. 25
mg /L;(7)MS + IBA 0. 25 mg /L。培养 20 d 后,观
察各培养基中愈伤组织的分化情况。
2. 3 滴水珠丛生芽的增殖培养
将在培养瓶中已形成的丛生芽切成小块,放在
培养基(2)MS + 6-BA 0. 5 mg /L + NAA 0. 25 mg /L
中培养,就能产生许多丛生芽(或苗)。20 d 后观察
丛芽的生长情况。如此重复,可以达到大量增殖的
目的。
2. 4 有机添加物对滴水珠幼芽及胚性愈伤生长的
影响
将滴水珠幼芽及胚性愈伤分别接种到含有 100
g /L 土豆汁、100 g /L 香蕉汁、100 g /L 番茄汁和 100
g /L 胡萝卜汁的 MS + 6-BA 0. 5 mg /L + NAA 0. 25
mg /L 的培养基中生长。滴水珠幼芽及胚性愈伤每
种培养基各接种 10 瓶。培养 2 周后观察滴水珠幼
芽及胚性愈伤的生长情况。
2. 5 滴水珠生根培养基的筛选
将生长健壮的组培苗尽量去除培养基,接种到
生根培养基中培养。所采用的培养基为以下 5 种:
(8)1 /2MS + KT1. 0 mg /L + NAA 2. 0 mg /L; (9)1 /
2MS 培养基; (10)1 /2MS + NAA0. 25 mg /L; (11)
1 /2MS + NAA0. 5 mg /L; (12)1 /2MS + 1. 0 mg /L
NAA。每种培养基接种 10 瓶组培苗,19 d 后,观察
统计其生根情况。
2. 6 滴水珠的炼苗与移栽
当试管苗长出健壮根后,将培养苗拿出培养
室,打开培养盖,炼苗 2 ~ 3 天后取出小苗,洗去附
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北京联合大学学报(自然科学版) 2012 年 8 月
着在苗上的培养基,将其移栽到沙子中,共移栽 35
株,2 周后统计其成活情况。
2. 7 培养条件与测量方法
将接种的培养材料放在无菌室植物培养架上
培养,培养条件为温度 25 ± 2 ℃,每日光照 10 ~ 12
h,光照强度为2 500 lx。测量与测定方法:
污染率 =(被污染的外植体数 /外植体总数)×
100%;
出愈率 =(出现愈伤的外植体数 /外植体总数)
× 100%;
芽分化率 = (出现芽的愈伤组织块数 /接种的
愈伤组织块数)× 100%;
每块愈伤平均芽数 = (分化出的芽总数 /接种
愈伤组织总块数)× 100%;
增殖倍数 = (丛生芽总数 /接种总苗数)×
100%;
有效芽:> 0. 5 cm 的芽;
芽高:用直尺测量;
每株平均根数 =(分化出根的总数 /接种芽数)
× 100%;
发根率 = (有根形成的株数 /接种株树)×
100%;
移栽成活率 = (移栽成活的试管苗总数 /移栽
的试管苗总数)× 100%。
2. 8 滴水珠愈伤组织中总生物碱含量的测定
2. 8. 1 供试品溶液的制备
称取干燥至恒重的滴水珠愈伤组织样品 0. 5
g,平行称取 3 份,精密称定,加 1 mL 氨水湿润后,
分别加 50 mL 的氯仿浸泡过夜,超生提取 30 min,
过滤,滤渣用氯仿洗涤后,将洗涤液与滤液混合,减
压蒸馏回收氯仿,然后用氯仿定容至 10 mL,即得
供试品溶液,4℃冰箱保存备用。
2. 8. 2 测定波长的选择
取供试品溶液 200 uL,每个供试品取平行 3
份,加入 1 300 μL 的氯仿后加 0. 2 mL 0. 1%的溴甲
酚绿,再加入 0. 5 mL pH5. 4 的柠檬酸—柠檬酸钠
缓冲溶液,在涡旋振荡器上振摇,静置取下层液;同
时取 200 μL 的空白溶剂,加入1 300 μL 的氯仿后
加 0. 2 mL 0. 1%的溴甲酚绿,再加入 0. 5 mL pH5. 4
的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液,分取下层为空白,
紫外全波长扫描,结果发现 416 nm 处有最大吸收
峰,故选择 416 nm 为测定波长。
2. 8. 3 标准曲线的制备
取 0. 05 mg /mL 的盐酸麻黄碱标准品溶液,分
别取 50、100、200、300、400、500、600 μL,挥干甲醇
后,加入 1. 5 mL 氯仿,再加入 0. 2 mL 0. 1%的溴甲
酚绿显色剂和 0. 5 mL pH5. 4 的柠檬酸—柠檬酸钠
缓冲溶液,在涡旋振荡器上振荡、静置,取下层液。
同时取 1. 5 mL 氯仿,再加入 0. 2 mL 0. 1% 的溴甲
酚绿显色剂和 0. 5 mL pH5. 4 的柠檬酸—柠檬酸钠
缓冲溶液,在涡旋振荡器上振摇,静置取下层液,为
空白。416 nm 测定吸光度值,以吸光度为纵坐标,
盐酸麻黄碱的量(μg)为横坐标,制备标准曲线。
2. 8. 4 滴水珠愈伤组织中总生物碱含量的测定
取供试品溶液 200 μL,每个供试品溶液平行取
3 份,加入 1 300 μL 的氯仿后加 0. 2 mL 0. 1%的溴
甲酚绿,再加入 0. 5 mL pH5. 4 的柠檬酸—柠檬酸
钠缓冲溶液,在涡旋振荡器上振摇,静置取下层液,
同时取 200 μL 空白溶剂,加入 1 300 μL 的氯仿后
加入 0. 2 mL 0. 1%的溴甲酚绿和 0. 5 mL pH5. 4 的
柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液,分取下层为空白,416
nm 测定吸光度,根据标准曲线方程计算滴水珠愈
伤组织中总生物碱的含量。
3 实验结果与分析
3. 1 滴水珠愈伤诱导结果
对滴水珠 3 个不同部位进行取材:叶片、叶柄
和珠芽进行消毒处理后在培养基(1)中进行培养。
一周后,珠芽萌发形成幼苗,叶柄的两端开始膨大,
组织变得松散,颜色变淡,叶片的边缘也开始变得
膨大,颜色由绿色变成黄白色。培养到第 9 d,叶
柄、叶片开始有愈伤形成。培养 30 d 后,结果如表
1 所示。
表 1 滴水珠愈伤组织诱导结果
代号 有效外植体数 出愈数 出愈率 污染率 愈伤质量 其他情况
A1 16 16. 25% 20% + 其余珠芽萌发成幼苗
A2 25 2 080. 00% 16. 70% + + + 个别已分化出根
A3 41 3 278. 04% 18. 00% + + 个别已分化出芽
注:“ +”越多,表示愈伤组织质量越好。A1 表示珠芽,A2 表示叶片,A3 表示叶柄。
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第 26 卷第 3 期 李伟平等:滴水珠组培快繁的实验研究
由表 1 可得,滴水珠的不同部位在诱导培养基
(1) :MS + 6-BA 2 mg /L + NAA 0. 2 mg /L 中诱导愈
伤的能力是不同的。A1(珠芽)在诱导培养基(1)
中易萌发形成幼苗,不易形成愈伤,且形成的愈伤
组织较小,颜色呈淡黄白色,结构疏松(如图 1 - a
所示)。A2(叶片)的愈伤组织出愈率高,形成的愈
伤组织较大且质量较好,愈伤组织呈淡黄色透明
状,有些愈伤组织还形成了小丛芽(如图 1 - b 所
示)。A3(叶柄)相对 A1、A2,出愈率最高,形成的
愈伤组织大小一般,但质量较好,呈黄绿色透明状,
结构疏松,且会有绿色颗粒出现(如图 1 - c 所示)。
所以,滴水珠的叶片是诱导愈伤组织的最佳外植
体,叶柄次之,而珠芽更容易直接成苗。
图 1 滴水珠愈伤组织
3. 2 滴水珠愈伤组织的诱导分化
愈伤组织接种到分化培养基中培养,愈伤由黄
白色逐渐变成黄绿色,表面出现绿色芽点。20 d
后,观察愈伤组织在 6 种培养基中的分化情况,结
果如表 2 所示。
由表 2 可知,(2)号培养基丛芽诱导效果最好,
芽长势好,芽高、粗壮且整齐度好。芽的分化率高
达 88%,每块愈伤组织诱导成的丛芽平均数为
4. 59,每块诱导出的平均根数为 1 ~ 2 个。个别组
织块丛生芽长得极好,芽数达到 8 ~ 10 个,并诱导
出根而形成完整的植株。(3)号培养基的愈伤诱导
成芽能力及形成的芽长势相对(2)号培养基弱,愈
伤诱导出根的能力相当。(4)、(5)号培养基的芽
诱导率较弱,但易使愈伤出根,其中(4)号培养基的
诱导出根能力比(5)号培养基强,(4)号培养基诱
导出的根较粗短,个别细长。(6)、(7)号培养基使
愈伤诱导出的芽长势较好,诱导每块愈伤的平均根
数为 3 ~ 4 个,诱导出根的能力较(4)号培养基稍
弱。由此可见,(2)号培养基适合愈伤的丛芽诱导,
(4)号培养基适合诱导愈伤形成根,6-BA 与 NAA
的激素组合比 6-BA 与 IBA 的激素组合更适合滴水
珠的愈伤诱导成芽,单激素 NAA 比 IBA 更适合诱
导愈伤生根。
表 2 滴水珠愈伤组织在六种不同培养基
中诱导丛芽的效果
培养基
编号
接种

分化
成芽的
块数
芽总数
每块
愈伤
平均
芽数
芽分化

芽的
长势
情况
每块
愈伤
平均
根数
(2) 50 44 202 4. 04 88% +++ 1 ~ 2
(3) 50 28 82 1. 64 56% ++ 1 ~ 2
(4) 50 26 54 1. 08 52% + 4 ~ 5
(5) 50 19 26 0. 52 38% - 2 ~ 3
(6) 50 32 98 1. 96 64% ++ 3 ~ 4
(7) 50 35 99 1. 98 70% ++ 3 ~ 4
注:“ +++”表示长势非常好,长得较高粗壮,且整齐度
较好;“ ++”长势好,但整齐度差;“ +”长势一般,芽矮小细
嫩;“ -”长势较差。
3. 3 滴水珠的增殖培养结果
在(2)号培养基:MS + 6 - BA 0. 5 mg /L + NAA
0. 25 mg /L 中进行丛生芽的增殖培养,经过20 d后
进行观察统计。
由表 3 所示,在(2)号培养基中进行滴水珠的
增殖培养,所产生的芽高范围为 3. 0 ~ 6. 0 cm,增殖
倍数达 8. 0 ~ 9. 8,增殖效果较好,反复培养,可以达
到大量增殖的目的,得到大量滴水珠的丛生芽。
表 3 滴水珠丛生芽增殖培养结果
接种数 每处芽数 芽总数 芽高 / cm 增殖倍数
10 8 ~ 10 98 5. 0 ~ 6. 0 9. 8
9 7 ~ 8 73 3. 0 ~ 4. 0 8. 1
10 8 ~ 9 90 3. 0 ~ 4. 0 9. 0
8 8 ~ 10 72 5. 0 ~ 6. 0 9. 0
7 7 ~ 8 54 4. 0 ~ 5. 0 8. 0
9 7 ~ 8 72 3. 0 ~ 4. 0 8. 0
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北京联合大学学报(自然科学版) 2012 年 8 月
3. 4 有机添加物对滴水珠幼芽及胚性愈伤生长的
影响
幼芽(附带愈伤)及胚性愈伤在分别含有 100
g /L 香蕉汁、100 g /L 土豆汁、100 g /L 番茄汁和 100
g /L 胡萝卜汁的 MS + 6 - BA 0. 5 mg /L + NAA 0. 25
mg /L 的培养基中生长 2 周后,观察统计其结果,如
表 4,5 所示。
表 4 有机添加物对滴水珠幼芽生长的影响的初步结果
有机添加物 接种数
新增芽
总数
最高
芽高 / cm
平均
芽高 / cm
香蕉汁 10 167 8. 4 3. 7
土豆汁 10 79 3. 5 1. 12
番茄汁 10 69 5. 8 1. 94
胡萝卜汁 10 88 7. 2 2. 21
有机添加物 增殖倍数 芽的长势
根的生长
情况
香蕉汁 16. 7 +++ 有大量根形成,健壮且长
土豆汁 7. 9 + 有根形成,细且短
番茄汁 6. 9 ++ 有根形成,细且短
胡萝卜汁 8. 8 + 有根形成,细且短
注:“ +++”表示叶片较大,叶柄较粗;“ ++”表示叶片
稍大,叶柄稍粗;“ +”表示叶片较小,叶柄较细。
表 5 有机添加物对滴水珠胚性愈伤生长的影响结果
有机添
加物
接种

新增芽
总数
最高芽
高 / cm
平均芽
高 / cm
未形成
芽的胚
性愈
伤数
胚性
愈伤
成芽率
芽长

香蕉汁 10 85 4. 5 2. 25 0 100% ++
土豆汁 10 39 2. 7 1. 19 2 80% +
番茄汁 10 48 3. 7 1. 19 1 90% +
胡萝卜汁 10 40 4. 5 1. 86 0 100% +
注:“ +++”表示叶片较大,叶柄较粗;“ ++”表示叶片
稍大,叶柄稍粗;“ +”表示叶片较小,叶柄较细。
由表 4 可知,与土豆汁、番茄汁和胡萝卜汁相
比,在培养基 MS + 6 - BA 0. 5 mg /L + NAA 0. 25
mg /L 中添加香蕉汁的幼芽长势最好,最高芽达到
8. 4 cm,且增殖倍数最高,形成的幼芽有大量健壮
根形成。而胡萝卜、番茄汁、土豆汁相对较弱,虽也
有根形成,但较少且细短。说明香蕉汁对滴水珠的
壮苗作用明显。由表 5 可知,香蕉汁和胡萝卜汁都
使胚性愈伤成芽率达 100%,番茄汁次之,土豆汁最
差。添加香蕉汁的培养基所形成的芽长势最好,进
一步说明了香蕉汁具有促进滴水珠幼芽生长的作
用。
3. 5 滴水珠生根培养基的筛选结果
滴水珠组培苗在各生根培养基中培养 19 d 后,
观察统计其结果,如表 6 所示。
由实验结果可知,5 种培养基均能诱导生根,但
在(10)号培养基中,滴水株发根率最高,达到
100%,且每株平均根数达 5. 8 个,(11)、(12)号培
养基的发根率均为 90%,每株平均根数分别为 5. 0
和 4. 4,即随着 NAA 浓度的增大,每株平均根数反
而减少。(8)号培养基根的发根率只有 60%,且每
株平均根数较低,表明 NAA 与 KT 的共同作用并没
有起到很好的促进滴水珠组培苗根的形成作用。
表 6 滴水珠生根培养基的筛选结果
培养基
编号
接种株数 发根株数
平均根数
/每株
发根率
根的
生长
情况
(8) 10 6 2. 4 60% +
(9) 10 8 4. 7 80% ++
(10) 10 10 5. 8 100% ++
(11) 10 9 5. 0 90% ++
(12) 10 9 4. 4 90% ++
注:“ +”越多,表示根生长得越好。
3. 6 滴水珠的移栽
将生长健壮的 35 株滴水珠组培苗移至沙土
中,2 周后成活的植株为 25 株,得到的成活率为
71. 4%,成活植株生长良好。将成活的植株挖出观
察,发现植株具有较多的根系,且根较长(如图 2 所
示)。
图 2 滴水珠组培苗的完整植株
3. 7 滴水珠愈伤组织总生物碱含量的测定结果
实验结果表明,盐酸麻黄碱对照品在 2. 5 ~ 30
μg 范围内线性关系良好。标准曲线方程为 Y =
0. 035 3X + 0. 070 8,R2 = 0. 998 8。根据标准曲线
方程,计算出滴水珠愈伤组织中总生物碱的含量为
05
第 26 卷第 3 期 李伟平等:滴水珠组培快繁的实验研究
图 3 标准曲线图
0. 784 8%,比徐照辉等[2]报道的滴水珠药材中总
生物碱 0. 653 1%含量稍高。
4 讨论
滴水珠(Plnellia cordata N. B. Br.)为天南星科
植物滴水珠的干燥块茎。据报道滴水珠块茎含天
门冬氨酸、谷氨酸、精氨酸等多种氨基酸,β2 谷甾
醇、油酸、生物碱[2-3]等物质。此外,有文献报道滴
水珠中总生物碱的含量为 0. 653 1%;含有 Cu、Mn、
Zn、Fe、Co、Cd、Cr 等多种微量元素,其中 Fe 的含量
最高,为 134. 800 × 10 - 6[4]。可见,生物碱是滴水
珠中主要的有效成分,故可以通过测定滴水珠中生
物碱含量来作为滴水珠质量控制的一种手段,本研
究诱导出了滴水珠愈伤组织,并对所诱导愈伤组织
中总生物碱的含量进行测定,发现愈伤组织中生物
碱含量较高,表明本研究所建立的滴水珠愈伤组织
诱导体系具有一定的应用价值。
植物组织培养是快速繁殖植物的一种常用方
法,本研究以滴水珠为实验材料,通过愈伤诱导、愈
伤分化,丛芽增殖及生根诱导初步建立了滴水珠组
织培养的快速繁殖体系。以 MS + 6 - BA 2. 0 mg /L
NAA 0. 2 mg /L 为愈伤组织诱导培养基,叶片诱导
率达 80%。愈伤分化及丛芽增殖的最适培养基为
MS + 6 - BA 0. 5 mg /L + NAA 0. 25 mg /L,丛生芽分
化率达到 88%,丛芽增殖倍数达 8. 0 ~ 9. 8。实验
研究结果表明激素 NAA 比 IBA 更适于滴水珠的愈
伤分化,因为 IBA 是人工合成的生长素,化学性质
稳定不易分解[5]。生根诱导最适培养基为 1 /2MS
+ NAA 0. 25 mg /L,生根率达 100%。而培养基 1 /
2MS + KT 1. 0 mg /L + NAA 2. 0 mg /L 在诱导生根中
效果较差,而徐秀梅等[6]采用此培养基诱导半夏丛
芽生根,效果较好,7d 后有粗壮根生成,且生成速
度较快、数量多,说明同为天南星科半夏属的半夏
和滴水珠在诱导组培苗生根中对培养基的选择存
在差别。另外,因为香蕉汁具有促进丛芽生根的作
用,可以尝试在培养基 1 /2MS + NAA 0. 25 mg /L 中
添加香蕉汁,以获得更好的生根效果。通过炼苗移
栽到沙土上,植株成活率达 71. 4%。上述研究结果
为通过组培快繁方式快速繁殖滴水珠种苗,使野生
滴水珠变家种,为滴水珠的产业化生产奠定了实验
基础。
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(责任编辑 柴智)
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