全 文 ：第 24 卷 第 10 期
2 0 0 7 年 1 0 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.24 　No.10　
Oct.2007 p.593　
收稿日期:2006-11-15
作者简介:秦兰艳(1983-), 女(汉族), 湖南永州人 , 硕士研究生 , E-mail xintian666@sohu.com;孙启时(1945-), 男
(汉族),吉林松源人 , 教授 , 主要从事中药资源开发利用及质量标准的研究 , Tel.024-23986468 , E-mail sunqishi@
sina.com。
文章编号:1006-2858(2007)10-0627-04
RP-HPLC法同时测定穿山龙中薯蓣皂苷和
纤细皂苷的含量
秦兰艳1 , 贾凌云1 , 孙启时1 , 黄顺旺2
(1.沈阳药科大学 中药学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.合肥仁康医药科技有限公司 ,安徽 合肥 230088)
摘要:目的 建立测定不同产地穿山龙供试品中薯蓣皂苷和纤细皂苷含量的方法。方法 采用RP-
HPLC 法。色谱柱为 Kromasil C8 色谱柱(200 mm×4.6 mm , 5 μm),流动相为乙腈-水(体积比 41∶
59),检测波长为 206 nm ,柱温为室温。结果 薯蓣皂苷质量浓度在 0.10 ～ 1.00 g·L-1内 、纤细皂苷
质量浓度在 0.02 ～ 0.20 g·L-1内与峰面积呈现良好的线性关系 , 相关系数均为 0.999 7(n =6)。
其平均回收率分别为 101.2%、100.7%, RSD分别为 2.4%、2.0%(n =9)。供试品含量测定结果
表明 ,饮片中薯蓣皂苷和纤细皂苷的含量显著高于新鲜药材烘干品。结论 该方法简便 、准确 、重现
性好 ,为穿山龙药材的质量控制提供了参考。
关键词:穿山龙;薯蓣皂苷;纤细皂苷;反相高效液相色谱法
中图分类号:R 917　　　文献标志码:A
　　穿山龙为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣
(Dioscorea nipponica Makino)的干燥根茎 ,具有
祛风除湿 、舒筋活络 、止咳平喘祛痰之功效 ,主治
关节炎腰腿疼痛 、肢体麻木 、大关节病 、跌扑损伤 、
慢性支气管炎等[ 1] 188-189 。穿山龙中主要成分为
甾体皂苷类成分 ,总皂苷提取物对冠心病 、动脉粥
样硬化 、高血脂 、哮喘 、炎症及肿瘤有很好的疗
效[ 1] 430 。薯蓣皂苷和纤细皂苷(结构式见图 1)具
有很好的抗肿瘤和抗菌活性 ,两者结构很接近 ,属
于甾体皂苷同系物。相关文献对穿山龙及其制剂
含量测定的成分有薯蓣皂苷和酸水解后产生的薯
蓣皂苷元[ 2-6] ,而有关此药材中同时测定薯蓣皂
苷和纤细皂苷含量的方法尚无报道 。作者在查阅
文献过程中发现 ,HPLC 法用于测定薯蓣皂苷含
量的文献中[ 3-4] ,均采用 C18柱 ,没能将薯蓣皂苷
和纤细皂苷两峰分离 ,所测定的薯蓣皂苷含量实
际上是薯蓣皂苷和纤细皂苷的总含量。为了更加
准确的控制中药材及其制剂的质量 ,作者采用
Kromasil C8 柱对两者进行了分离 ,建立了薯蓣皂
苷和纤细皂苷含量测定的方法 ,并在此基础上对
不同产地穿山龙饮片以及新鲜药材烘干品中薯蓣
皂苷和纤细皂苷的含量进行了比较 。
A—Dioscin;B—Gracillin
Fig.1　Structures of dioscin and gracillin
DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2007.10.005
1　仪器与材料
LC-10AT 输液泵 、SPD-10A 紫外检测器(日
本Shimadzu公司),Easy 3000双通道色谱工作站
(杭州中辉科学器材有限公司)。
Kromasil C8 色谱柱(4.6 mm ×200 mm ,
5μm ,大连依利特公司)。
薯蓣皂苷 、纤细皂苷标准品(自制 ,HPLC 面
积归一法计算纯度质量分数≥98%)。
甲醇 、乙腈(色谱纯 ,天津康科德科技有限公
司),纯净水(杭州娃哈哈集团)。
穿山龙饮片分别购于辽宁省药材公司 、北京同
仁堂以及各产地药业公司。新鲜药材来源于辽宁
省清源县穿山龙 GAP 种植基地 、沈阳药科大学药
植园及其他产地野生资源。上述药材均由沈阳药
科大学中药学院孙启时教授鉴定为薯蓣科植物穿
龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)的根茎 ,新鲜药
材切片后 ,放置烘箱 60 ℃下干燥至质量恒定。
2　方法与结果
2.1　对照品储备溶液的制备
分别精密称取薯蓣皂苷和纤细皂苷适量 ,置
于同一量瓶中 ,加质量分数为 80%的甲醇溶解并
稀释至刻度 , 摇匀 ,配成质量浓度分别为 1.0 、
0.2 g·L-1的对照品储备溶液 。
2.2　供试品溶液的制备
取过(355±13)μm筛的穿山龙药材粉末1.0 g ,
精密称定 ,置 100 mL 具塞三角瓶中 ,加质量分数为
80%的甲醇 100 mL ,精密称质量后置超声波清洗器
中超声提取 30 min ,取出 ,称质量 ,用质量分数为
80%的甲醇补足损失质量 ,摇匀 ,经0.45μm微孔滤
膜过滤 ,取续滤液即得供试品溶液。
2.3　色谱条件选择及系统适用性试验
色谱柱:Kromasil C8 柱(4.6 mm ×200 mm ,
5μm);流动相:乙腈-水(体积比 41∶59);流速:
1mL·min-1;检测波长:206 nm;柱温:室温;进样
量:20μL 。在此条件下两色谱峰理论板数均不小
于7 500 ,两峰分离度及与其他峰分离度 R 均大
于 1.5 ,两色谱峰拖尾因子均为 1.05。代表性色
谱图见图 2。
2.4　标准曲线的绘制
分别精密吸取不同体积的薯蓣皂苷和纤细皂
苷对照品储备液 ,加入质量分数为 80%的甲醇配
成质量浓度为0.10 、0.20 、0.40 、0.60 、0.80 、
a—Dioscin;b—Gracillin
Fig.2　HPLC chromatograms of dioscin and gracill in in-
standard(A)and samples(B)
1.00 g·L-1的薯蓣皂苷对照品溶液和质量浓度为
0.02 、0.04 、0.08 、0.12 、0.16 、0.20 g·L-1纤细皂
苷对照品溶液 ,取上述不同质量浓度的对照品溶
液各 20μL 进样 ,在上述色谱条件下进行分析 ,以
对照品质量浓度(ρ, g·L-1)为横坐标 ,峰面积
(A)为纵坐标 ,绘制标准曲线。结果表明 ,薯蓣皂
苷质量浓度在 0.10 ～ 1.00 g·L-1内 、纤细皂苷在
0.02 ～ 0.20 g·L-1内与峰面积呈良好的线性关
系 ,回归形方程分别为 A =7.787 ×105ρ+
3.603×104(r =0.999 7 , n =6)和 A =7.187×
105ρ-1.202×103(r=0.999 7 , n =6)。
2.5　精密度试验
取药材粉末 1.0 g ,精密称定 ,按“2.2”条方法
操作 ,在上述色谱条件下重复进样 5次 ,记录薯蓣
皂苷和纤细皂苷峰面积 , 计算 RSD 值分别为
1.2%和 1.7%,说明仪器精密度良好 。
2.6　重复性试验
取同一供试品粉末 6份各 1.0 g ,精密称定 ,
按“2.2”条方法操作 ,在上述色谱条件下进行分
析 ,计算薯蓣皂苷和纤细皂苷的含量 ,计算 RSD
值分别为 1.1%、2.1%。
2.7　稳定性试验
取药材粉末 1.0 g ,精密称定 ,按“2.2”条方法
操作 ,在上述色谱条件下 ,分别于 0 、2 、4 、8 、12 、
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24 、48 h测定 ,计算薯蓣皂苷和纤细皂苷的含量。
结果表明 ,薯蓣皂苷和纤细皂苷在 48 h 内稳定性
良好 ,RSD分别为 2.2%和 2.1%。
2.8　回收率试验
取已知含量的穿山龙供试品 9份各 0.5 g ,精
密称定 ,分别加入高 、中 、低质量浓度的对照品溶
液适量 ,按“2.2”条方法操作 ,在上述色谱条件下
进行分析 ,计算回收率。结果表明 ,薯蓣皂苷与纤
细皂苷平均回收率分别为 101.2%、100.7%,
RSD分别为 2.4%、2.0%(n =9)。结果见表 1。
Table 1　Results of recovery experiment
Compound No. m(sample)/ mg madded/mg m found/mg Recovery/ %Average recovery/ % RSD/ %
Dioscin 1 11.16 5.50 17.29 103.78
2 11.16 5.50 17.15 102.94
3 11.16 5.50 16.88 101.32
4 11.16 11.00 22.86 103.16
5 11.16 11.00 22.56 101.80 101.2 2.4
6 11.16 11.00 22.88 103.25
7 11.16 16.50 27.25 98.52
8 11.16 16.50 27.02 97.68
9 11.16 16.50 27.21 98.37
Gracillin 1 1.66 0.80 2.45 99.59
2 1.66 0.80 2.50 101.63
3 1.66 0.80 2.51 102.03
4 1.66 1.40 2.98 97.38
5 1.66 1.40 3.00 98.04 100.7 2.0
6 1.66 1.40 2.99 97.71
7 1.66 2.40 4.11 101.23
8 1.66 2.40 4.15 102.22
9 1.66 2.40 4.13 101.72
2.9　供试品含量测定
取各产地药材各 1.0 g ,精密称定 ,按“2.2”条
方法操作 ,在上述色谱条件下进行分析 ,计算薯蓣
皂苷和纤细皂苷的含量 ,测定结果见表 2。
Table 2　Contents(c)of dioscin and gracillin in Dioscorea nipponica Makino samples(n=3)
Sample O rigin c(dioscin)/(mg·g-1) c(g racillin)/(mg·g-1)
Herbal pieces Liaoning 23.74 8.39
prepared fo r Liaoyuan , Jilin 22.30 6.39
decoction Harbin ,Heilongjiang 22.32 3.34
Hebei 20.50 3.69
Dezhou , Shandong 12.77 2.08
Xi an , Shanxi 18.68 3.24
Kunming , Yunnan 15.08 3.94
Chengdu , Sichuan 17.14 4.17
Frensh ma terials Q ingyuan , Liaoning 10.78 2.22
dried in oven Shenyang , Liaoning 9.30 1.53
Liaoyuan , Jilin 9.57 1.66
Xiuwuxian ,Henan 9.35 1.89
3　讨论与结论
a.薯蓣皂苷和纤细皂苷是穿山龙中主要成分
和有效成分 ,结构上属于甾体皂苷同系物 ,这类成
分分离比较难。在实验中曾试用 C18柱对两者进
行分析 ,发现两峰重叠 ,通常表现为 1 个峰 ,改变
流动相的组成也不能实现基线分离。C8 柱烷基
链短 ,对此类化合物选择性好。实验证明 , Kro-
629第 10 期 秦兰艳等:RP-HPLC 法同时测定穿山龙中薯蓣皂苷和纤细皂苷的含量　　　
masil C8 柱在一定比例的流动相下薯蓣皂苷和纤
细皂苷的分离度 R >1.5 ,达到了含量测定的要
求 ,且重现性良好。
b.由表 2 可知 ,不同产地穿山龙饮片中薯蓣
皂苷和纤细皂苷含量差别比较大 ,其中东北三省
药材薯蓣皂苷含量高于其他省分药材。饮片中两
种有效成分含量显著高于鲜材直接烘干品 ,可能
的原因是 ,药材在干燥 、长期储存过程中 ,原薯蓣
皂苷和原纤细皂苷在相应酶和热作用下发生了 F
闭环作用 ,脱去一分子糖 ,生成了对应的次生苷薯
蓣皂苷和纤细皂苷。
c.在提取方法考察时 ,采用超声提取考察了
甲醇浓度对提取效率的影响。结果表明 ,质量分
数为 80%的甲醇对薯蓣皂苷和纤细皂苷提取效
果最好 ,特别对纤细皂苷的提取效果差异明显。
同时考察了质量分数为 80%的甲醇超声提取 10 、
20 、30 、40 min时的含量差异 ,结果表明 ,超声提取
30min 和 40 min含量高 ,且无明显差异 ,所以提
取时间选用 30 min。
d.文献通常采用 HPLC 法 、重量法 、薄层扫
描法等测定酸水解后的薯蓣皂苷元的含量以进行
质量控制 ,这样不仅费时 ,而且不能反映其中主要
成分的真实含量 。实验证明 , 作者建立的RP-
HPLC方法简便 、准确 、重现性好 ,可以作为穿山
龙药材的质量控制方法之一。
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Determination of contents of dioscin and gracillin in
Dioscorea nipponica Makino by RP-HPLC
Q IN Lan-yan1 , JIA Ling-yun1 , SUN Qi-shi1 , HUANG Shun-wang2
(1.School of Tradit ional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang
110016 , China;2.Renkang Medicine Science Inc., Hefei 230088 , China)
Abstract:Objective To develop a RP-HPLC method for determinat ion of the contents of dioscin and
g racillin in Dioscorea nipponica Makino from different areas.Methods A Kromasil C8 column(200 mm ×
4.6 mm ,5 μm)with a solvent system consisting of acetonit rile-water(V∶V =41∶59)was used , and the de-
tecting w avelength w as set at 206 nm.The column temperature w as room temperature.Results The calibra-
tion curve of dioscin and g racillin were linear over the range of 0.10-1.00 g·L-1 ,0.02-0.20 g·L-1 re-
spectively w ith the same correlation coeff icient of 0.999 7(n =6).The recoveries of the two saponins w ere
101.2%(RSD=2.4%)and 100.7%(RSD = 2.0%), respectively.The contents of the two steroidal
saponins in the herbal pieces w ere much higher than those in the fresh materials dried in oven.Conclusions
The method is sample , accurate , reproducible and can offer references for quali ty cont rol of the medicinal
materials.
Key words:Dioscorea nipponica Makino;diosin;gracillin;RP-HPLC
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