全 文 ：书　［收稿日期］　２０１６－０３－２６；２０１６－０８－２０修回
　［基金项目］　国家自然科学基金项目“半夏珠芽发育的激素调节和关键调控基因克隆研究”（３１５６００８１）；贵州大学创新基金项目“滴水珠珠
芽发育的形态解剖学研究”（研农２０１６００６）
　［作者简介］　朱燕燕（１９８９－），在读硕士，研究方向：植物生理学。Ｅ－ｍａｉｌ：１５７６１６２２０５７＠１６３．ｃｏｍ
　＊通讯作者：罗　睿（１９７４－），副教授，硕士生导师，从事发育生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｏｒｕｉ＿ｐｈｙｓｉｏｌ＠１２６．ｃｏｍ
园艺·中药材 ［文章编号］１００１－３６０１（２０１６）０９－０３９３－０１０１－０４
Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ·ＣＨｉｎｅｓｅ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｍｅｓ
滴水珠组织培养体系的优化
朱燕燕，罗 睿＊，陈海丽，刘 丹
（贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳５５００２５）
　　［摘　要］为缩短滴水珠（Ｐｉｎｅｌｌｉａ　ｃｏｒｄａｔａ）的繁殖周期，促进其种质资源的保存与产业化利用，以滴水
珠的叶片和叶柄为外植体，研究不同植物激素种类及其配比对滴水珠外植体组织培养的影响。结果表明：叶
柄作为外植体较优；愈伤组织诱导及继代培养最优条件为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ，只需
７～１５ｄ即可转接；分化及增殖最优条件为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，增殖倍数达９．２倍，时间
仅需１４ｄ；生根培养最优条件为 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋活性炭０．５ｇ／Ｌ，７ｄ即可炼苗移
栽。通过对各阶段进行分步优化，繁殖周期缩短为４４ｄ，有利于滴水珠的产业化生产。
［关键词］滴水珠；组织培养；植物激素；再生体系；药用植物
［中图分类号］Ｓ５６７．２ ［文献标识码］Ａ
Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｉｎｅｌｉａ　ｃｏｒｄａｔａ
ＺＨＵ　Ｙａｎｙａｎ，ＬＵＯ　Ｒｕｉ＊，ＣＨＥＮ　Ｈａｉｌｉ，ＬＩＵ　Ｄａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５００２５，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｓｈｏｒｔｅｎ　ｔｈｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ｐ．ｃｏｒｄａｔａ　ａｎｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｐｅｔｉｏｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｐｅｔｉｏｌｅ　ｗａｓ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｏ　ｂｅ
ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ　１．０ｍｇ／Ｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗｉｔｈ　ｍｅｄｉｕｍ　ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ ＋ＩＢＡ
０．２ｍｇ／Ｌ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ　ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｒｅａｃｈ　９．２．Ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ（ＭＳ）ｓｕｐｐｌｉｅｄ
ｗｉｔｈ　ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ ＋ＡＣ　０．５ｇ／Ｌ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍａｌ．Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ－ｔｕｂｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　ａｆｔｅｒ　７ｄａｙｓ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｃｙｃｌｅ　ｗａｓ　ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ　ｔｏ　４４ｄ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ
ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ．ｃｏｒｄａｔａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｉｎｅｌｌｉａ　ｃｏｒｄａｔａ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ；ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔ
　　滴水珠（Ｐｉｎｅｌｌｉａ　ｃｏｒｄａｔａ　Ｎ．Ｅ．Ｂｒ．）为天南星
科（Ａｒａｃｅａｅ）半夏属多年生草本植物，主要分布于我
国浙江和贵州等地，是我国特有的重要天然药用植
物［１］。其块茎含多种氨基酸和生物碱［２］（如，吲哚生
物碱 Ｎｅｏｅｃｈｉｎｕｌｉｎ　Ａ［３］）、微量元素［４］及多种化合
物，主治毒蛇咬伤［５］及用于肿瘤病人的消肿止痛［６］，
其凝集素显示出明显的抗虫性［７］。滴水珠对环境要
求较高，主要生长在岩石边、岩隙中或岩壁上、林下
溪旁以及潮湿草地，以无性珠芽繁殖为主［１］。随生
境改变和过度采挖，其自然分布区越来越窄，仅分布
于难以采挖的岩隙和岩壁上。因此，人工培育滴水
珠种苗是对其进一步开发利用的重要技术，组织培
养是培育种苗的关键环节。李伟平等［８］在郁建新［９］
研究的基础上，对分化和生根培养基进行了筛选，但
是其繁殖周期达８９ｄ；虽然王玉娇等［１０］通过改变激
素配比，得到愈伤组织诱导的最佳组合，但繁殖周期
依然没有缩短，甚至更长，达７个多月［１１］。因此，笔
者拟通过改变激素种类和配比，重新筛选滴水珠组
织培养各阶段的最优配方，旨在提高滴水珠的繁殖
效率和缩短繁殖周期，为产业化生产提供技术支持。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
１．１．１ 外植体 滴水珠植株采集于浙江省温州市
永嘉县，２０１５年８月盆栽种植于贵州大学植物生理
学实验室，待长出新叶后，选取幼嫩的叶柄和叶片备
用。
１．１．２ 试剂 ＭＳ培养基、６－苄基嘌呤、α－萘乙酸、
２，４－二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸和无水氯化钙等均为
分析纯。
１．１．３ 其他 栽培基质，按土∶有机肥∶锯末＝
１０∶１∶２混合拌匀。
１．２ 试验方法
１．２．１ 外植体消毒 用软毛刷刷洗叶柄和叶片表
　贵州农业科学　２０１６，４４（９）：１０１～１０４
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
面泥土，洗洁精浸泡３０ｍｉｎ，流水冲洗２ｈ，再将材料
放入超净工作台用７５％酒精消毒４５ｓ，０．１％的升
汞消毒７ｍｉｎ，无水乙醇冲洗３次，最后放入培养皿
中滤干水分备用。
１．２．２ 试验设计 所有培养基均以 ＭＳ为基础培
养基，添加３％蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂８ｇ／Ｌ，控制ｐＨ
５．８～６．０。培养条件均为培养温度（２５±２）℃，光照
强度２　０００～２　５００ｌｘ、光照时间为１２ｈ／ｄ。
１）愈伤组织诱导。试验设９个处理（表１），即
在基础培养基中分别添加不同配比的６－ＢＡ、ＮＡＡ
和２，４－Ｄ，以文献［８］中的最佳培养基为对照（ＣＫ）。
外植体灭菌后，叶柄切成大小为１ｃｍ左右的小段，
叶片切成１ｃｍ×１ｃｍ大小，接种于愈伤组织诱导培
养基中，每种处理接种４８管。
表１ 滴水珠愈伤组织诱导培养基不同激素的种类与配比
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｆｏｒ
ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ．ｃｏｒｄａｔａ　 ｍｇ／Ｌ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
６－ＢＡ　 ＮＡＡ　 ２，４－Ｄ
Ｍ１＊ １．０　 ０．５ －
Ｍ２ １．０　 １．０ －
Ｍ３ ２．０　 ０．５ －
Ｍ４ ２．０　 １．０ －
Ｍ５ ２．０ － ０．５
Ｍ６ ２．０ － １．０
Ｍ７ １．０ － ０．５
Ｍ８ １．０ － １．０
Ｍ９ １．０ － ２．０
　　注：＊为文献［８］的最佳培养基（下同）。
　Ｎｏｔｅ：＊ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ［８］．
　　２）不定芽分化与增殖培养。不定芽分化试验
设６个处理（表２），即在基础培养基中分别添加不
同配比的６－ＢＡ、ＮＡＡ和２，４－Ｄ，以文献［８］中的最
佳培养基为对照（ＣＫ）。不定芽增殖试验设３个处
理，在不定芽分化培养基础上选取不定芽分化率较
高的培养基、参考文献［８］中分化率高的Ｐ１及任意
培养基Ｐ３等３种进行试验。愈伤组织形成后将其
转移至不定芽培养基中进行不定芽分化培养，每种
处理接种５０个；待不定芽分化出绿色芽点后，将不
定芽转接到增殖培养基进行增殖培养，每种处理接
种５０个。
表２ 滴水珠不定芽分化和增殖培养基不同激素的
种类与配比
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｆｏｒ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｐ．ｃｏｒｄａｔａ　 ｍｇ／Ｌ
处理　
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　
６－ＢＡ　 ＮＡＡ　 ＩＢＡ
Ｐ１＊★ ０．５　 ０．２５　 ０
Ｐ２ １　 ０．２５　 ０
Ｐ３★ ３　 ０．５　 ０
Ｐ４ １　 ０　 ０．１
Ｐ５★ ２　 ０　 ０．２
Ｐ６ ３　 ０　 ０．３
　　注：Ｐ１，培养基添加香蕉汁１００ｇ／Ｌ；★，增殖培养所用培养基。
　Ｎｏｔｅ：Ｐ１，Ａｄｄｉｎｇ　ｂａｎａｎａ　ｊｕｉｃｅ　１００ｇ／Ｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ；
★，ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ．
　　３）生根培养。试验设２个处理，Ｔ１，生根培养
基为 ＭＳ＋０．１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ＋
０．５ｇ／Ｌ活性炭；Ｔ２，生根培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ
０．２５ｍｇ／Ｌ［８］（ＣＫ），每种处理接种小苗７２个。即
待小苗长到一定高度后，转入生根培养基中培养。
４）炼苗和移栽。组培苗生长１０ｄ左右，取３批
共１８０ 株 生 长 健 壮、根 系 形 成 良 好 且 株 高 为
５～１０ｃｍ的组培苗，揭开盖子放置３～５ｄ，然后取
出组培苗用水洗净根部的培养基，转种于栽培基质，
浇透水后置于２０～２５℃及５０％湿度的遮荫环境下
培养，每２ｄ浇水１次。
１．３ 数据统计分析
采用ＤＰＳ软件进行统计分析。
愈伤组织诱导率＝（产生的愈伤组织数／接种外
植体数）×１００％
芽分化率＝（出现芽的愈伤组织块数／接种的愈
伤组织块数）×１００％
增殖倍数＝（丛生芽总数／接种总苗数）×１００
２ 结果与分析
２．１ 不同激素配比对愈伤组织的诱导效果
从表３可知，１）叶柄外植体。接种叶柄（图示
Ａ）外植体在９种培养基中均可诱导产生愈伤组织，
Ｍ２、Ｍ７与 Ｍ８间诱导率差异不显著，与其他处理间
差异显著。其中，Ｍ４的诱导率最高，达６０％；其次
是 Ｍ３，达 ５５％。在６－ＢＡ浓度为 １ ｍｇ／Ｌ 时，随
ＮＡＡ浓度的升高，愈伤诱导率降低，而２，４－Ｄ则相
反；当６－ＢＡ浓度为２ｍｇ／Ｌ时，随 ＮＡＡ和２，４－Ｄ
浓度的升高，愈伤诱导率均升高，且 ＮＡＡ 为
１ｍｇ／Ｌ时，诱导率达最大（图示 Ｂ）。当６－ＢＡ 与
ＮＡＡ比值为２∶１时，愈伤组织诱导率均升高；而
２，４－Ｄ＋６－ＢＡ组合的诱导效果较６－ＢＡ＋ＮＡＡ组合
差。２）叶片外植体。接种叶片外植体在９种培养
基中，除 Ｍ２外，其他处理均可诱导产生愈伤组织
（图示Ｃ），Ｍ３与 Ｍ６，Ｍ５与 Ｍ９处理间差异性均不显
著，与其他处理间差异显著。其中，Ｍ４诱导率最高，
达５７％。６－ＢＡ浓度为１ｍｇ／Ｌ，随着２，４－Ｄ浓度的
增加，诱导率呈先减后增，其他处理则与叶柄的一
致。说明，滴水珠叶柄和叶片诱导愈伤组织的最适
激素组合为２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ。
表３ 不同激素配比滴水珠不同愈伤组织的诱导培养效果
Ｔａｂｌｅ　３　Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ％
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
叶柄
Ｐｅｔｉｏｌｅ
叶片
Ｌｅａｆ
Ｍ１＊ ５０ｃ ５３ｂ
Ｍ２ １７ｇ　 ０ｇ
Ｍ３ ５５ｂ ４５ｃ
Ｍ４ ６０ａ ５７ａ
Ｍ５ ２５ｆ ３０ｄ
Ｍ６ ４０ｅ ４３ｃ
Ｍ７ １５ｇ　 ２０ｅ
Ｍ８ １８ｇ　 １０ｆ
Ｍ９ ４７ｄ ３０ｄ
　　注：同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。
　Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　５％
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ．
·２０１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
A B C
D E F
G H I
　　注：Ａ，叶柄；Ｂ，叶柄产生愈伤组织；Ｃ，叶片产生愈伤组织；Ｄ，愈伤组织；Ｅ，分化芽；Ｆ，不定芽增殖；Ｇ，生根苗；Ｈ，移栽苗；Ｉ，生长１个月的
生根苗。
　　Ｎｏｔｅ：Ａ，ｐｅｔｉｏｌｅ；Ｂ，ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ；Ｃ，ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｅｔｉｏｌｅ；Ｄ，ｃａｌｕｓ；Ｅ，ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ；Ｆ，ｂｕｄ－ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ；Ｇ，ｒｏｏｔｉｎｇ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｐｌａｎｔｅｄ　ｏｎ　ａ　ｍｅｄｉｕｍ；Ｈ，ｒｏｏｔｉｎｇ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ；Ｉ，ｏｎｅ　ｍｏｎｔｈ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ．
图示 滴水珠组织培养快繁体系的不同阶段
Ｆｉｇ．　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｐ．ｃｏｒｄａｔａ
２．２ 不同激素配比对不定芽分化与增殖培养效果
１）不同激素配比不定芽的分化效果依次为Ｐ５
（１００％）＞Ｐ１（９０％）＞Ｐ２（７０％）＞Ｐ３（６７％）＞Ｐ６
（６０％）＞Ｐ４（４５％）。在 ＮＡＡ浓度不变情况下，随
６－ＢＡ 浓 度 升 高，不 定 芽 的 分 化 率 不 断 降 低。
２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ 分化率达１００％。
经差异显著性分析，Ｐ１和Ｐ５差异不显著，但二者与
其他处理间差异显著；Ｐ２与Ｐ３差异不显著，但与其
他处理间差异显著。Ｐ５不定芽７～１２ｄ即可进行增
殖，且不定芽长势较好（图示Ｅ），芽整齐度高。说
明，Ｐ５（２ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ）为不定芽分
化的最佳激素配比。
２）从表４可知，不定芽的长势和增殖倍数均依
次为Ｐ５＞Ｐ３＞Ｐ１。Ｐ５不定芽增殖倍数最高，７ｄ即
达９．２倍（图示Ｆ）；Ｐ１不定芽只能维持基本生长，并
不增殖；Ｐ３不定芽增殖倍数为４．３倍，３组的增殖倍
数差异较大，差异显著。
表４ 不同培养基处理不定芽的增殖效果
　Ｔａｂｌｅ　４　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ
培养基编号
Ｎｏ．
接种数／个
Ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
ｎｕｍｂｅｒ
芽总数／个
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｂｕｄｓ
芽长势
Ｇｒｏｗｔｈ
ｖｉｇｏｒ
增殖倍数／倍
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
Ｐ１＊ ５０　 ５０ － １
Ｐ３ ５４　 ２３２ ＋ ４．３
Ｐ５ ７６　 ７００ ＋＋＋ ９．２
　　注：－，长势变化不大；＋，长势一般；＋＋＋，长势很好。
　Ｎｏｔｅ：－，ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｖｉｇｏｒ；＋，ｏｒｄｉｎａｒｙ　ｇｒｏｗｔｈ
ｖｉｇｏｒ；＋＋＋，ｆｉｎｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｖｉｇｏｒ．
２．３ 组培苗生根、炼苗与移栽
观察发现，Ｔ１的小苗发根株数为７２个，生根率
为１００％，根系发达（图示Ｇ），有５～９根，主根长度
最长可达１０ｃｍ，植株高度可达８～１２ｃｍ；而Ｔ２的
小苗发根株数只有５０株，生根率为６９％，根的长势
一般。选取经炼苗后生长健壮、根系形成良好，叶片
２～３，株高８ｃｍ左右的植株（图示Ｈ）进行移栽，
·３０１·
　朱燕燕 等　滴水珠组织培养体系的优化
　ＺＨＵ　Ｙａｎｙａｎ　ｅｔ　ａｌ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｉｎｅｌｌｉａ　ｃｏｒｄａｔａ
１个月后其成活率达１００％（图示Ｉ）。
２．４ 繁殖周期
在最佳培养基上，愈伤组织诱导时间为１０ｄ，不
定芽分化时间为７ｄ，增殖培养基上培养７ｄ即可转
接到生根培养基上，培养１０ｄ后可进行炼苗移栽，
繁殖周期为４４ｄ。
３ 结论与讨论
滴水珠的叶柄和叶片在添加激素２．０ｍｇ／Ｌ　６－
ＢＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ培养基上愈伤组织诱导率较
高，且６－ＢＡ＋ＮＡＡ组合诱导效果优于６－ＢＡ＋２，４－
Ｄ组合。该研究结果与刘鑫欣等［１２］愈伤组织诱导
的激素以６－ＢＡ为主，ＮＡＡ其次，而２，４－Ｄ影响不
显著的结论一致，但与李伟平等［８，１０］研究结果不同。
可能本试验使用的材料与其所用材料的基因型不
同，因而最适的激素种类不同。林娅等［１３－１５］的研究
也证明，ＮＡＡ诱导愈伤组织的效果优于２，４－Ｄ。
在添加激素２．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ
处理下，不定芽分化率较李伟平等［８，１０］提高１２％，
分化时间缩短７ｄ。表明，细胞分裂素与生长素相互
作用，当二者比值高时可诱导不定芽正常分化［１６］；
该研究细胞分裂素与生长素比（１０∶１）高于李伟平
等［８，１０］的试验比例（２∶１），可能是导致不定芽分化
率提高、时间缩短的主要原因。
通过优化激素种类和配比，获得增殖和继代培
养的最优激素种类为２．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ和０．２ｍｇ／Ｌ
ＩＢＡ，２种激素的用量比例为１０∶１。闻丽等［１７］的研
究表明，６－ＢＡ与ＩＢＡ的组合适合油茶花药愈伤组
织的进一步继代培养，６－ＢＡ与ＩＢＡ组合是否适用
于更多植物的继代培养，有待研究。
该研究表明，在 ＭＳ培养基＋０．１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ
＋０．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ＋０．５ｇ／Ｌ活性炭条件下，不定芽
生根数目、质量以及所用时间均优于李伟平等［８，１０］。
推测可能是因为活性炭创造的黑暗条件有利于根的
诱导和根系的生长［１８］。
滴水珠的愈伤组织诱导繁殖周期为４４ｄ，与之
前滴水珠繁殖周期最快８９ｄ［８］相比，缩短培养周期
１／２。王玉娇等［１０］曾对滴水珠的愈伤组织诱导进行
优化，但并未缩短其繁殖周期；其认为，材料增殖再
多但不生根就不是一株完整的植株［１９］。因此，要获
得最优的培养体系，应对各环节进行优化。
［参 考 文 献］
［１］ Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ编委会．《中国植物志》英文修订版
［Ｍ］．北京：科学出版社、密苏里植物园出版社联合出
版，２０１０，２３（２０）：４０－４１．
［２］ 楼之岑，秦 波．常用中药材品种整理和质量研究
［Ｊ］．北京：北京大学医学出版社，２００３：．
［３］ 王 琦，赵云丽，高晓霞，等．中药滴水珠中 Ｎｅｏ－
ｅｃｈｉｎｕｌｉｎ　Ａ的分离及测定［Ｊ］．色谱，２００９，２７（４）：
５０９－５１２．
［４］ 徐照辉，朱梦娜，吴巧凤．滴水珠中总生物碱和微量元
素的含量测定［Ｊ］．广东微量元素科学，２００５，１１（１０）：
３７－４０．
［５］ 田莎莎，李伟平，沈嫣婧，等．半夏、天南星和滴水珠抗
五步蛇毒中毒作用的研究［Ｊ］．中药药理与临床，
２０１３，２９（３）：１３６－１３８．
［６］ 宋立人，洪 恂，丁绪亮，等．现代中药学大辞典［Ｍ］．
北京：人民卫生出版社，２００１．
［７］ ＬＩＮ　Ｌ，ＪＩＥ　Ｌ，ＴＡＮＧ　Ｋ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ
ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｍａｎｎｏｓｅ－Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｌｅｃｔｉｎ
Ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｐｉｎｅｌｉａ　Ｃｏｒｄａｔａ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ
Ｒｅｐｏｒｔｓ，２００８，３５（４）：６４１－６４７．
［８］ 李伟平，马丹丹，蒋福升，等．滴水珠组培快繁的实验
研究［Ｊ］．北京联合大学学报（自然科学版），２０１２，２６
（３）：４６－５１．
［９］ 郁建新．滴水珠的组织培养和植株再生［Ｊ］．植物生理
学通讯，１９８８，１３（４）：３７．
［１０］ 王玉娇，李伟平，叶温平，等．滴水珠组织培养及快速
繁殖的实验研究［Ｊ］．中华中医药学刊，２０１２，３０（１２）：
２７１０－２７１３．
［１１］ 杨 仙，马丹丹，蒋福升，等．滴水珠原生质体的分离
纯化与植株再生［Ｊ］．中国中药杂志，２０１４，３９（２１）：
４２１１－４２１５．
［１２］ 刘鑫欣，崔晓星，刘金欣，等．不同植物生长调节剂对
半夏愈伤组织诱导效应的研究［Ｊ］．中国中医药信息
杂志，２０１１，１８（５）：５７－５９．
［１３］ 林 娅，郑玉梅，刘青林．影响月季愈伤组织诱导和分
化的因素［Ｊ］．分子植物育种，２００６，４（２）：２２３－２２７．
［１４］ 白文苑，沈慧敏．苍耳愈伤组织诱导及继代培养研究
［Ｊ］．甘肃农业大学学报，２００６，４１（１）：６５－６８．
［１５］ 王玉珍，董玉惠．霍霍巴的组织培养与快速繁殖［Ｊ］．
植物生理学通讯，２００５，４１（６）：８３５－８４０．
［１６］ 张 峰，陈丽静．细胞工程［Ｍ］．北京：中国农业大学
出版社，２０１４．
［１７］ 闻 丽，张日清，李典军．不同激素配比对油茶花药愈
伤组织形成的影响［Ｊ］．经济林研究，２００５，２３（４）：
２１－２３．
［１８］ 刘用生，李友勇．植物组织培养中活性炭的使用［Ｊ］．
植物生理学通讯，１９９４，３０（３）：２１４－２１７．
［１９］ 邢亚娟．中国山杨与美洲山杨杂交种新品系选育研究
［Ｄ］．哈尔滨：东北林业大学，２００５．
（责任编辑：王　海）
·４０１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ