全 文 ：棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶酶学特性研究
黄志鸿１，檀东飞２
摘要：　目的　研究棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶酶学特性。　方法　将棘托竹荪菌盖胞外酶冻干粉以缓
冲液进行溶解，经透析、离心后，以ＤＮＳ为显色剂，以水杨苷为底物，采用分光光度法，对β－葡萄糖苷酶的主要酶学
特性和不同抑制剂、激活剂对酶活性的影响进行研究。　结果　β－葡萄糖苷酶的最适反应ｐＨ为４．０，最适反应温
度为６５℃；Ｈｇ２＋、Ｃｕ２＋对酶起抑制作用，Ｆｅ２＋、Ｚｎ２＋对酶具有激活作用；棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶对水杨苷
的米氏常数（Ｋｍ）为１．３２０×１０－２　ｍｏｌ／Ｌ，最大反应速度Ｖｍａｘ为０．１４３　７μｍｏｌ／ｍｉｎ，比活力为２．８７４Ｕ／ｍｇ。　结论
　棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶偏好酸性环境，其温度适应范围较宽，温度升高可提升酶催化活性，但影响酶的
稳定性。
关键词：　棘托竹荪；子实体类，真菌；分光光度法；β－葡糖苷酶类；曲霉菌，黑；温度
中图分类号：　Ｒ３４５；Ｒ３６３．１２３；Ｒ３７９．６；Ｒ９７７．３　　文献标志码：　Ａ　　文章编号：　１６７２－４１９４（２０１４）０２－００９１－０５
收稿日期：２０１４－０１－１４
基金项目：福建省自然科学基金（Ｘ０６５００４５）
作者单位：１．福建医科大学 基础医学院，福州　３５０１０８；
２．福建师范大学 生命科学学院，福州　３５０１１７
作者简介：黄志鸿（１９８５－），男，助理实验师，理学硕士
通讯作者：檀东飞．Ｅｍａｉｌ：ｄｆｔａｎ＠ｆｊｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　棘托竹荪（Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏｖｏｌｖａｔａ　Ｚａｎｇ，
Ｚｈｅｎｇ　ｅｔ　Ｈｕ）原产于我国湖南、贵州等地，是我国科
技工作者于湖南省会同县首次发现并于１９８８年正
式定名的新种，隶属于真菌门、腹菌纲、鬼笔目、鬼笔
科、竹荪属［１］。棘托竹荪是名贵的食用真菌，同时具
有各种药用功效，是一种食、药兼用菌［２－３］。
　　棘托竹荪属大型真菌，能直接生长于腐朽的树
干、竹木及草本植物半分解的残体上，具有很强的分
解利用纤维素的能力，棘托竹荪是所有竹荪中分解
能力最强的，对不易分解的针叶树凋落物也能进行
有效的分解［４－５］。纤维素酶是含有葡聚糖内切酶、葡
聚糖外切酶和β－葡萄糖苷酶这３种主要组分的复合
酶［６］。在水解纤维素的过程中，β－葡萄糖苷酶起着
关键作用，因此增强复合酶体系中β－葡萄糖苷酶的
活性，是提高水解效率的关键措施之一。
　　目前对纤维素酶的研究主要集中在霉菌和细
菌，对大型真菌的相关研究相对较少［７］。因大型食、
药用真菌不分泌有害物质，其纤维素酶可应用于食
品药品行业，开展对食、药用真菌纤维素酶的研究，
在一定的现实意义。本研究以棘托竹荪为材料，研
究其菌盖胞外β－葡萄糖苷酶酶学特性，旨在对棘托竹
荪β－葡萄糖苷酶进行研究及对其进行利用提供参考。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　主要材料　棘托竹荪菌盖胞外酶样品冻干
粉：收 集 已 开 伞 棘 托 竹 荪 菌 盖 外 分 泌 物 以
０．０１ｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ　６．０磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液溶
解并去除杂质后，利用硫酸铵沉淀法，冻干制成。棘
托竹荪品种：棘托－８９。
１．１．２　主要试剂　水杨苷（Ｃ１３Ｈ１８Ｏ７）、３，５－二硝基
水杨酸（ＤＮＳ）、酒石酸钾钠（Ｃ４Ｈ４Ｏ６ＫＮａ·４Ｈ２Ｏ）、
磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）、柠檬酸（Ｃ６Ｈ８Ｏ７）、盐酸
（ＨＣｌ）、磷酸（Ｈ３ＰＯ４）、葡萄糖（Ｃ６Ｈ１２Ｏ６）、牛血清
蛋白等均为Ａ．Ｒ试剂（中国国药集团）。
１．１．３　主要仪器　高速冷冻离心机（ＣＲ２２ＧＩＩ，日
本日立公司），电子分析天平［ＡＬ－２０４，梅特勒－托利
多仪器（上海）有限公司］，紫外可见分光光度计
（７５２Ｎ，上海精密科学仪器有限公司），酸度计
（ＨＡＮＮＡ　ｐＨ２１１，北京哈纳科仪科技有限公司），
数显恒温水浴锅（Ｈ－Ｈ－４，国华电器有限公司），
７８ＨＷ－１型恒温磁力搅拌器（杭州仪表电机厂）。
１．２　方法
１．２．１　酶液制备　取１０．０ｍｇ菌盖胞外酶样品
（硫酸铵沉淀冻干粉）用少量０．０１ｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ　６．０磷
酸氢二钠－柠檬酸缓冲液溶解后装入透析袋中，后将
透析袋放入相同缓冲液中置于磁力搅拌器上进行低
温透析，更换透析液直至溶液中没有ＳＯ２－４ （以ＢａＣｌ２
检测）。将完成透析的酶液以４℃、１０　０００ｒ／ｍｉｎ离
心１０ｍｉｎ，取上清液以蒸馏水稀释定容至２５ｍＬ，
４℃保存备用。
１．２．２　β－葡萄糖苷酶活性测定　取１．０ｍＬ　１．０％
的水杨苷（溶于０．１５ｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ　４．０磷酸氢二钠－柠
檬酸缓冲液）和粗酶液１．０ｍＬ于试管中，混合反应
后取出１．０ｍＬ反应液立即放入１．０ｍＬ　ＤＮＳ试剂
终止反应，充分混合后在沸水浴加热５ｍｉｎ，流水迅
速冷却至室温，加水定容至１０．０ｍＬ，分别取０ｍｉｎ
１９
福建医科大学学报
Ｊ　Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ　２０１４Ａｐｒｉｌ
，Ｖｏｌ　４８Ｎｏ　２
和１５ｍｉｎ时的反应液，立即测定５２０ｎｍ波长下的
吸光值ＯＤ１和ＯＤ２；平行设置一个以等体积缓冲液
替代酶液的空白对照管，测其吸光值ＯＤ３，则ＯＤ值
增量为ΔＯＤ ＝ＯＤ２－ＯＤ１－ＯＤ３。所有实验均设
置１个重复。
１．２．３　酶反应进程曲线测定　根据１．２．２中的酶
活测定方法，取１０．０ｍＬ　１．０％的水杨苷和１０．０ｍＬ
粗酶液预热升温后混合，于 ６５ ℃ 下反应。在
０～６０ｍｉｎ的反应时间内，于０，５，１０，１５，２０，３０，４０，
５０，６０ｍｉｎ分别取样１．０ｍＬ，测定波长５２０ｎｍ下
ＯＤ值，每个实验管均设一个重复。以反应时间为
横坐标，反应后产物的吸光值为纵坐标作反应进程
曲线。以曲线的起始段直线部分最高点对应的时间
做为所有后续实验的反应时间。
１．２．４　酶反应最适ｐＨ测定　根据１．２．２中的酶
活测定方法，分别于ｐＨ　２．５，３．０，３．５，４．０，４．５，
５．０，５．５，６．０，６．５，７．０，７．５，８．０的缓冲液中，加入
酶液与底物，于６５℃水浴反应１５ｍｉｎ，立即测定
ＯＤ５２０。以ｐＨ 为横坐标，产物吸光值为纵坐标作
图，最高吸光值所对应的ｐＨ 即为该酶的最适反应
ｐＨ。
１．２．５　酶反应最适温度测定　根据１．２．２的酶活
测定方法，采用１．２．４测定所得的最适反应ｐＨ，配
置反应液，分别将反应液于４５，５０，５５，６０，６５，７０，
７５，８０，８５，９０℃水浴反应１５ｍｉｎ，测定ＯＤ５２０。以温
度为横坐标，产物的ＯＤ５２０为纵坐标作图，吸光值最
高处所对应的温度即为该酶的最适反应温度。
１．２．６　酶温度稳定性测定　取一定量的酶液于
４５℃水浴加热，待酶液温度恰好升至４５℃时，取样
１次，随后每隔２０ｍｉｎ取样１次，共取３次。取出的
酶液以１．２．２酶活力测定方法，测定ＯＤ５２０，依此计
算出剩余酶活力；同样方法测在５０，５５，６０，６５℃保
温条件下酶的稳定性。
１．２．７　抑制剂、激活剂对β－葡萄糖苷酶的影响　参
照β－葡萄糖苷酶活性测定方法，抑制剂或激活剂的
反应条件设置如下：反应液为底物＋酶＋抑制剂或
激活剂（浓度为２×１０－３　ｍｏｌ／Ｌ），三者体积比为
１∶１∶２，每管设置１个重复。同时，做同比例的正
常酶活测定管，抑制剂或激活剂用同体积的蒸馏水
替代，所有操作同１．２．２。由此得出加入抑制剂或
激活剂的酶与正常酶的相对酶活。
１．２．８　β－葡萄糖苷酶的反应动力学常数
１．２．８．１　标准曲线的制作　分别吸取２．５ｍｍｏｌ／Ｌ
葡萄糖标准液０，０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ｍＬ于试管
０，１，２，３，４，５ 号 中，加 水 将 每 支 试 管 补 足 到
１．０ｍＬ，再加１．０ｍＬ　ＤＮＳ试剂，充分混匀后在沸
水浴中加热５ｍｉｎ，流水迅速冷却至室温，加水定容
至１０．０ｍＬ，在波长５２０ｎｍ处测ＯＤ值，以０号试
管为对照。以葡萄糖含量为横坐标，ＯＤ５２０为纵坐
标。
１．２．８．２　反应动力学常数测定　分别吸取１／５０，
１／６０，１／７５，１／１００，１／１５０，１／２００ｍｏｌ／Ｌ水杨苷（溶
于０．１５ｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ４．０磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液）
０．５０ｍＬ 于试管１，２，３，４，５，６号中，再分别加
０．５０ｍＬ酶液于６５℃的水浴中反应１５ｍｉｎ，立即加
入１．０ｍＬ　ＤＮＳ试剂，混匀；每个浓度的水杨苷设
１个对照管，方法同１．２．２。
１．２．９　β－葡萄糖苷酶酶活测定
１．２．９．１　标准曲线的制作　分别吸５００μｇ／ｍＬ牛
血清蛋白标准液０，０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０．６，
０．７，０．８ｍＬ于８支试管，加水将每支试管补足到
１．０ｍＬ，然后加０．４ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ２ＣＯ３溶液５．０ｍＬ，
再加Ｆｏｌｉｎ－酚试剂１．０ｍＬ，充分混匀后放在４０℃
的水浴中反应２０ｍｉｎ，直接于波长６８０ｎｍ处测ＯＤ
值，以０号试管为对照。以牛血清蛋白的含量为横
坐标，吸光值为纵坐标。
１．２．９．２　蛋白质含量测定　经透析、离心后定容的
酶液浓度为０．４ｍｇ／ｍＬ，取１．０ｍＬ酶液，以Ｆｏｌｉｎ－
酚法测出其蛋白质含量。
１．２．９．３　酶活力单位测定　在６５℃下，分别设立
试验管和对照管，加入酶液，测定其酶活力单位，具
体方法同１．２．２。β－葡萄糖苷酶活力单位定义：以水
杨苷为底物，在ｐＨ 为４．０，温度为６５℃的反应条
件下，每分钟生成１．０μｍｏｌ葡萄糖的酶量为一个酶
活力单位（Ｕ）。
２　结　果
２．１　酶反应进程曲线　由β－葡萄糖苷酶反应进程
曲线可知，酶促反应时间与产物生成量在前１５ｍｉｎ
内基本呈直线关系，２０ｍｉｎ时达到反应的顶峰，之
后趋势渐缓，因此选择１５ｍｉｎ做为后续实验的反应
时间（图１）。
２．２　ｐＨ对β－葡萄糖苷酶活性的影响　ｐＨ对棘托
竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶活性的影响结果表明，
ｐＨ的变化对酶活的影响较大。当ｐＨ 由３．０上升
到４．０时，酶的活性急剧上升，而当ｐＨ＞４．０时，酶
活开始下降，ｐＨ由４．０升至５．０时，酶活下降明显，
当ｐＨ＞５．５时，酶活基本被抑制。在ｐＨ　３．０～５．０
的范围内，酶活相对较高，其中４．０为酶的最适反应
ｐＨ（图２）。
２９ 福建医科大学学报　２０１４年４月　第４８卷第２期
图１　β－葡萄糖苷酶反应进程曲线
Ｆｉｇ　１　Ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
图２　ｐＨ对β－葡萄糖苷酶活力的影响
Ｆｉｇ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐＨ　ｏｎβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
２．３　温度对β－葡萄糖苷酶活性的影响　棘托竹荪
菌盖胞外β－葡萄糖苷酶反应温度范围较宽。在
４５～６５℃内酶活随温度增高上升快；＞６５℃时，酶
活明显下降；降至７０℃仍有一定活力，７０～７５℃时
酶活急剧下降；＞８０℃时，酶活几乎降为零。可见
棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶在４５～７０℃相对
具有较高活性，其最适反应温度为６５℃（图３）。
图３　温度对β－葡萄糖苷酶活力的影响
Ｆｉｇ　３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
２．４　β－葡萄糖苷酶热稳定性　β－葡萄糖苷酶在
４５℃时的热稳定性最佳，４５℃时能保持较长时间
的催化活性，温度升高，则稳定性下降，温度越高，稳
定性下降得越快。如５０℃经４０ｍｉｎ后，相对酶活
尚存３９．１７％；而６５℃经４０ｍｉｎ，酶活已降为０，说
明此时酶已变性失活（表１）。
表１　温度对β－葡萄糖苷酶稳定性的影响
Ｔａｂ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
ｔ／ｍｉｎ
Ｔ相对酶活／℃
４５　 ５０　 ５５　 ６０　 ６５
０　 １００　 １００　 １００　 １００　 １００
２０　 ９０．７５　 ６９．４９　 ２８．３５　 １３．９８　 １．３８
４０　 ８８．７８　 ３９．１７　 ３．３５　 １．７７　 ０
６０　 ８７．６０　 １３．５８　 ０．７９　 ０　 ０
１８０　 ７１．４６ － － － －
３６０　 ５３．３５ － － － －
　　表中数据为％．
２．５　不同抑制剂、激活剂对β－葡萄糖苷酶活性的影
响　以加蒸馏水时所测得的酶活力为１００％，其他
加激活剂、抑制剂所测值与其对比得相对酶活。在
激活剂、抑制剂终浓度为１．３３×１０－３　ｍｍｏｌ／Ｌ条件
下，ＨｇＣｌ２、ＣｕＳＯ４对棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷
酶有明显的抑制作用，ＭｇＣｌ２、（ＮＨ４）２ＳＯ４、ＫＣｌ、
ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２对其则无明显影响，ＦｅＳＯ４、ＺｎＳＯ４则有
不同程度的激活作用（表２）。
表２　不同抑制剂、激活剂对β－葡萄糖苷酶活力的影响
Ｔａｂ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｎβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ
激活剂、抑制剂 相对酶活／％
Ｈ２Ｏ　 １００
ＨｇＣｌ２ ６４．６
ＣｕＳＯ４ ７３．５
ＥＤＴＡ　 ８２．５
ＦｅＣｌ３ ８７．５
Ｐｂ（ＮＯ３）２ ８７．７
ＭｇＣｌ２ ９８．４
（ＮＨ４）２ＳＯ４ １００．６
ＫＣｌ　 １０２．８
ＮａＣｌ　 １０３．６
ＣａＣｌ２ １０４．９
ＺｎＳＯ４ １０８．１
ＦｅＳＯ４ １２８．０
２．６　β－葡萄糖苷酶反应动力学常数　以葡萄糖为
标样，得到葡萄糖标准曲线，方程为：
　　Ｙ＝０．４２８　９Ｘ－０．０５０　８
　　Ｒ２＝０．９９９　４
　　其中Ｙ为ＯＤ５２０，Ｘ为葡萄糖含量（μｍｏｌ）。
　　在β－葡萄糖苷酶的反应动力学常数测定中，测
出ＯＤ值后，可从葡萄糖标准曲线求出葡萄糖含量，
即在不同浓度的底物中β－葡萄糖苷酶催化反应所生
成的葡萄糖的量，再结合双倒数做图法，即可测得酶
反应动力学常数等一系列参数。
３９黄志鸿等：棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶酶学特性研究
表３　β－葡萄糖苷酶在不同浓度底物中的反应速度
Ｔａｂ　３　Ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
序号 ［Ｓ］／（ｍｏｌ·Ｌ－１） ＯＤ５２０ ｃ葡萄糖／μｍｏｌ　 Ｖ／（μｍｏｌ·ｍｉｎ－１） １／Ｖ　 １／［Ｓ］
１
２
３
４
１／５０
１／６０
１／７５
１／１００
０．４０２
０．３７３
０．３１６
０．２６２
１．０５６
０．９８８
０．８５５
０．７２９
８．８００×１０－２
８．２３３×１０－２
７．１２５×１０－２
６．０７５×１０－２
１１．３６４
１２．１４６
１４．０３５
１６．４６１
５０
６０
７５
１００
５
６
１／１５０
１／２００
０．１９４
０．１５５
０．５７１
０．４８０
４．７５８×１０－２
４．０００×１０－２
２１．０１６
２５．０００
１５０
２００
图４　双倒数作图
Ｆｉｇ　４　Ｄｏｕｂｌｅ－ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｐｌｏｔ
　　从图４可知，当直线与Ｘ轴相交时，交点的值即为
－１／Ｋｍ，当直线交于ｙ轴时即可求得１／Ｖｍａｘ，由此可得
出棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶对底物水扬苷的
Ｋｍ＝１．３２０×１０－２　ｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ＝０．１４３　７μｍｏｌ／ｍｉｎ。
２．７　β－葡萄糖苷酶活力单位　经测算，牛血清蛋白
的标准曲线为：
　　Ｙ＝０．０００　３Ｘ＋０．００１
　　Ｙ为ＯＤ６８０，Ｘ为蛋白质含量（μｇ），由此可测得
酶的蛋白质含量为５０μｇ。
　　以纤维二糖为酶解底物时，一个β－葡萄糖苷酶
活力国际单位等于标准反应条件下每分钟生成
２．０μｍｏｌ葡萄糖的酶量。现以水杨苷为底物，一个
β－葡萄糖苷酶活力单位则等于在ｐＨ　４．０，温度为
６５℃的反应条件下每分钟生成１．０μｍｏｌ葡萄糖的
酶量。由此可得，β－葡萄糖苷酶活力０．１３４　７Ｕ，进
而可得知，比活力为２．８７４Ｕ／ｍｇ。
３　讨　论
　　棘托竹荪是珍贵的食药兼用菌，目前我国南方
各省已大面积人工栽培，其中棘托－８９因具有产量
高，对环境的适应性好等特点，因而做为主要品种在
福建省内大量栽培。棘托竹荪用于食用的通常为子
实体菌柄和菌裙部分，占棘托竹荪菌体的４０％左
右，而大量的菌盖、菌托等不可食用部分则被直接丢
弃。鉴于棘托竹荪具有很强的分解利用纤维素的能
力，生长过程中大量的酶液分泌到胞外，因此可对其
胞外β－葡萄糖苷酶进行研究，以期对棘托竹荪不可
食用部分进行利用。
　　本研究以水杨苷为底物，对棘托竹荪菌盖胞外
β－葡萄糖苷酶的特性进行研究。由实验结果可知，
棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶在ｐＨ　３．０～５．０均
有活性，其最适ｐＨ为４．０，说明在偏酸性环境中，β－
葡萄糖苷酶能表现出更强的活力，这与棘托竹荪喜生
长于偏酸性环境的生理习性相一致。大量的研究结
果也表明，β－葡萄糖苷酶为一种酸性蛋白酶，不同来
源的β－葡萄糖苷酶其最适反应ｐＨ在３．０～７．０之
间［８－１２］。
　　 不同来源的 β－葡萄糖苷酶其最适温度在
４０～１１０℃均有分布，温度适应范围较宽［９－１１］。棘
托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶的在４５～７０℃的范
围内均可表现出较高活性，其最适温度为６５℃。相
对于其他温度，β－葡萄糖苷酶在４５℃时的热稳定性
最高，能保持较长时间的催化活性；而在其最适反应
温度６５℃，热稳定性却较差，经４０ｍｉｎ的处理，酶
活就完全被抑制。说明温度的升高能提高β－葡萄糖
苷酶的催化效率，但较高的温度也会对酶造成不可
逆的破坏。
　　棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶活性还受到金
属离子的影响［１１，１３］。Ｈｇ２＋、Ｃｕ２＋ 对该酶有明显的
抑制作用，使酶活分别降低了３５．４％和２６．５％；
Ｆｅ２＋、Ｚｎ２＋则有不同程度的激活作用，其中Ｆｅ２＋对
酶的激活作用明显，使酶活力提高了２８％。这可能
由于β－葡萄糖苷酶是一种蛋白酶，Ｈｇ
２＋、Ｃｕ２＋等重
金属离子容易使酶蛋白变性失活，而Ｚｎ２＋通常是一
些酶蛋白活性结构域的重要组成部分，因此该离子
的加入对酶具有激活作用，同时Ｆｅ２＋作为一种还原
剂，可能用以还原酶促反应过程中产生的有害氧化
物，从而保护酶的结构不受破坏。
　　本实验研究了棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶
的酶学特性，并在此基础上进一步研究了抑制剂、激
４９ 福建医科大学学报　２０１４年４月　第４８卷第２期
活剂对酶活性的影响，结果表明，棘托竹荪菌盖外分
泌物含有β－葡萄糖苷酶，在合适的反应条件下能表
现出较高的酶促活性。棘托竹荪是食药两用菌，不
分泌有害成分，其所产的β－葡萄糖苷酶可用于食品、
医药行业，且目前棘托竹荪在我国已进行大规模的
人工栽培，生产加工会产生大量的废弃物，从棘托竹
荪加工后的废弃物中提取β－葡萄糖苷酶，既为β－葡
萄糖苷酶的获取增加一个来源，也可促进棘托竹荪
不可食用部分的再利用，对于提高棘托竹荪的利用
率具有较为积极的意义。
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［８］　Ｃｈｅｎ　Ｍ，Ｑｉｎ　Ｙ　Ｑ，Ｌｉｕ　Ｚ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ　ａβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｐｅｎｉｃｉｌｉｕｍ　ｄｅｃｕｒｒｔｂｅｎｓ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ
ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｏｒｎｃｏｂ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｉｔ　ａｓ　ｃｅｌｕｌａｓｅ　ｓｕｐｐｌｅ－
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，４６：
４４４－４４９．
［９］　Ｓｉｎｇｈａｎｉａ　Ｒ　Ｒ，Ｓｕｋｕｍａｒａｎ　Ｒ　Ｋ，Ｒａｊａｓｒｅｅ　Ｋ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｐｅｒ－
ｔｉｅｓ　ｏｆ　ａ　ｍａｊｏｒβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ－ＢＧＬ１ｆｒｏｍ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ
ＮＩＩ０８１２１ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｙ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ
［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１，４６：１５２１－１５２４．
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｅｌｕａｒβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ　Ｐｉｌｅｕｓ　ｏｆ　Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ　Ｅｃｈｉｎｏｖｏｌｖａｔａ
ＨＵＡＮＧ　Ｚｈｉｈｏｎｇ１，ＴＡＮ　Ｄｏｎｇｆｅｉ　２
１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０１０８，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０１１７，Ｃｈｉｎａ
　　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｐｉｌｅｕｓ　ｏｆ　Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏｖｏｌｖａｔａ．　Ｍｅｔｈｏｄ　Ｔｈｅ　ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ　ｐｏｗｄｅｒ　ｏｆ　ｅｃｔｏｅｎｚｙｍｅ　ｔｈａｔ　ｅｘｔｒａｃ－
ｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｉｌｅｕｓ　ｏｆ　Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏｖｏｌｖａｔａ　ｗａｓ　ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ　ｉｎ　ａ　ｂｕｆｆｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ．　Ａｆｔｅｒ　ｄｉａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ
ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａ－
ｔｏｒｓ　ｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ＤＮＳ　ｗａｓ　ｃｈｏｓｅｎ　ａｓ
ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ　ｒｅａｇｅｎｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓａｌｉｇｅｎｉｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐＨ　ｆｏｒβ－ｇｌｕｃｏｓｉ－
ｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　４．０，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　６５℃．　Ｔｈｅβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｂｙ　Ｈｇ
２＋
ａｎｄ　Ｃｕ２＋，ｂｕｔ　ｗａｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｂｙ　Ｆｅ２＋ａｎｄ　Ｚｎ２＋．　Ｔｈｅ　Ｋｍｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｐｉｌｅｕｓ　ｏｆ　Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ　ｅｃｈｉ－
ｎｏｖｏｌｖａｔａ　ｗａｓ　１．３２×１０－２　ｍｏｌ／Ｌ，ｔｈｅ　Ｖｍａｘｗａｓ　０．１４３　７μｍｏｌ／ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　２．８７４Ｕ／ｍｇ．　
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ａｃｉｄｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｃａｎ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ
ｗｏｒｋｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｈａｓ　ｂｒｏａｄ　ｒａｎｇｅ．　Ａ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｃａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｂｕｔ　ｉｍｐａｉｒ　ｉｔｓ　ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：　Ｄｉｃｔｙｏｐｈｏｒａ　ｅｃｈｉｎｏｖｏｌｖａｔａ；ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｂｏｄｉｅｓ，ｆｕｎｇａｌ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ｂｅｔａ－ｇｌｕｃｏ－
ｓｉｄａｓｅ；ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ；ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
（编辑：张慧茹）
５９黄志鸿等：棘托竹荪菌盖胞外β－葡萄糖苷酶酶学特性研究