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棘托竹荪菌托抑菌物质提取、分离及活性组分



全 文 :天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2015,27:1910-1916
文章编号:1001-6880(2015)11-1910-07
收稿日期:2015-06-25 接受日期:2015-09-09
基金项目:福建省科技厅重点项目(2013Y1003);福建省公益类科
研院所项目(2014R1022-1)
* 通讯作者 Tel:86-10-059187862406;E-mail:lrb16888@ sina. com
棘托竹荪菌托抑菌物质提取、分离及活性组分
林陈强,林戎斌* ,陈济琛,张 慧,林新坚
福建省农业科学院土壤肥料研究所农业资源与环境研究中心,福州 350013
摘 要:以棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata)菌托为研究对象,提纯菌托提取物有效抑菌天然产物,分析其抑
菌活性组成。选择最佳提取溶剂及指示菌,采用色谱层析法分离纯化,GC-MS 检测分析活性组分。结果表明:
乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌、标准摩根氏菌、肠炎沙门氏菌均
有较好的抑制效果;以金色葡萄球菌为指示菌,乙酸乙酯提取物的抑菌作用对温度、紫外线均有较好的稳定性;
对提取物进行分离,获得 2 个有抑菌活性组分 DEVⅠ、DEVⅡ,采用 GC-MS分析 DEVⅠ、DEVⅡ中的化学组分,
DEVⅠ中相对含量 1%以上的成分有 20 个;DEVⅡ中相对含量在 1%以上成分 6 个,其中具有抑菌活性的成分
为 2-呋喃甲酸和肉桂酸,相对含量分别为 25. 6%和 54. 2%,推测可能为棘托竹荪菌托抑菌物质的主要组成成
分。
关键词:棘托竹荪;菌托;抑菌活性物质;GC-MS
中图分类号:S646. 8 文献标识码:A DOI:10. 16333 / j. 1001-6880. 2015. 11. 014
Extraction,Separation and Composition Analysis of the Antibacterial
Components from Volva of Dictyophora echinovolvata
LIN Chen-qiang,LIN Rong-bin* ,CHEN Ji-chen,ZHANG hui,LIN Xin-jian
Institute of Soil and Fertilizer,Fujian Academy of Agricultural Sciences /Agricultural Resource and
Environmental Centre,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350013,China
Abstract:Components from volva of Dictyophora echinovolvata were extracted by different extraction solvent and their an-
timicrobial effects were determined using Staphylococcus aureus,Bacillus subilis,Escherichia coli,Bacillus cereus,Mor-
ganella fulton,Salmonella enteritidis as indicator bacteria. In addition,the components with highest antibacterial activity
were separated by column chromatography and the purified fractions were determined by gas chromatography-mass spec-
trometry (GC-MS). Results showed that the ethyl acetate extract from volva had highest antibacterial effect on the above
pathogenic bacteria and was more stable for temperature and ultraviolet radiation. The ethyl acetate extract was then fur-
ther purified to afford 2 antibacterial components,namely DEV I and DEV II. Through GC-MS analysis,twenty-six com-
ponents with the relative content of more than 1% were identified in DEV I and DEV II,respectively. The major antibac-
terial components of DEV II were 2-furoic acid with relative contents of 25. 6% and cinnamic acid with relative contents
of 54. 2% . These two components were possibly the major antibacterial components from volva of D. echinovolvata.
Key words:Dictyophora echinovolvata;volva;antibacterial components;GC-MS
竹荪[Dictyophora indusiata (Vent. ex Pers)
Fisch]为鬼笔科(Phallaceae)竹荪属(Dictyophora)大
型食用菌,是一种产于亚洲热带地区的珍稀药用
菌[1]。
竹荪具有抑菌防腐的作用[2,3]。民间发现竹荪
与肉共煮,可使肉汤保存较长时间而不致于腐败变
质。因此,竹荪中的抑菌活性物质具有开发成天然
防腐剂的潜在价值[4,5]。目前对竹荪抑菌的研究主
要以竹荪水提物[6-8]和有机溶剂(如乙醇[5,8,9]、乙酸
乙酯[2,3,10]、石油醚[11,12]、正己烷[13]、丙酮[14]等)提
取物为抑菌样液。通过抑菌研究发现,竹荪提取物
对霉菌、酵母及细菌具有广泛的抑菌效果。竹荪抑
菌作用的报道多数建立在粗提物上,对抑菌成分的
化学基础研究较少。
竹荪成熟子实体可分为菌盖、菌体、菌托三大部
分,对竹荪的研究集中在其可食用的菌体部分,而对
占子实体鲜重一半以上的菌托研究较少,且主要分
析菌托的营养物质[15-17]。檀东飞等[18]研究发现棘
托竹荪菌托挥发油和石油醚提取物均有抑菌作用,
并采用 GC-MS进行分析,但未明确抑菌物质的具体
成分。因此,本文以棘托竹荪菌托为研究对象,以金
色葡萄球菌为指示菌,提取菌托中的抑菌活性物质,
采用色谱法进行分离纯化、GC-MS 分析分离得到的
活性组分,以期探明菌托抑菌物质的主要成分,为利
用竹荪菌托资源,开发竹荪天然防腐剂提供依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验材料
棘托竹荪(Dictyophora. echinovolvata),采自福建
顺昌。
指示菌:金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus,
枯草芽孢杆菌 Bacillus subilis,大肠杆菌 Escherichia
coli,蜡状芽孢杆菌 Bacillus cereus,标准摩根氏菌
Morganella Fulton,肠炎沙门氏菌 Salmonella enteriti-
dis。以上菌种由福建省疾病预防控制中心提供。
1. 2 仪器试剂
1. 2. 1 主要仪器
N-1100 旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);
GHP-9080 隔水式恒温培养箱(上海一恒科技有限
公司);中压液相制备色谱系仪(Buchi,Pump Manag-
er C-615,Pump Module C-605,RI DETECTOR,UV
Photometer C-635) ;Agilent HP6890-5973N 气质联用
仪。
1. 2. 2 试剂
石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、甲醇、氯仿等试剂均
为分析纯,中国医药(集团)上海化学试剂公司产
品。
2 实验方法
2. 1 抑菌物质的提取
取 50 g 棘托竹荪菌托干样,破碎,过 60 目筛,
置于 500 mL具塞三角瓶,分别加入石油醚、正丁醇、
乙酸乙酯、甲醇 4 种提取试剂各 250 mL,超声波震
荡 1 h,静置过夜后过滤,5000 rpm离心 10 min,上清
液用旋转蒸发仪在 50 ℃下真空浓缩至恒重,称量
(m),用 5 mL原提取剂溶解,获得粗提物,检测抑菌
活性,选择最佳试剂的粗提物进行下一步实验。
提取率(%)= m /50 × 100
2. 2 棘托竹荪菌托粗提物抑菌活性测定
棘托竹荪菌托乙酸乙酯提取物(Ethyl acetate
extract,EAE)用少量甲醇溶解后,定量吸取梯度体
积,110 ℃完全烘干,称量,确定浓度并稀释至 20
mg /mL,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆
菌、蜡样芽孢杆菌、标准摩根氏菌为指示菌,滤纸片
法(d = 5 mm)和打孔法(d = 8 mm)比较各处理液的
抑菌活性,以 pH4. 0,浓度为 20 mg /mL 的山梨酸钾
溶液作为阳性对照,甲醇溶液为空白对照。
2. 3 抑菌物质粗提物理化性质
2. 3. 1 抑菌物质耐热性能测定
棘托竹荪菌托乙酸乙酯提取物用少量的甲醇溶
解后稀释至 5 mg /mL,等量装入小试管,然后分别在
100 ℃水浴中分别加热 10、20、30、40、50、60、70
min,自然冷却后,以甲醇为对照,打孔法(d = 8 mm)
每孔加样 0. 3 mL,比较各处理液对金黄色葡萄球菌
的抑菌活性。
2. 3. 2 抑菌物质抗紫外辐射耐性测定
棘托竹荪菌托乙酸乙酯提取物用少量的甲醇溶
解后稀释至 5 mg /mL,等量装入培养皿中,在无菌间
15 W 紫外灯下,距离 25 cm,照射 15、30、45、60、
75min,以甲醇为对照,打孔法(d = 8 mm)每孔加样
0. 3 mL,比较各处理液对金黄色葡萄球菌的抑菌活
性。
2. 4 棘托竹荪菌托抑菌物质的提取、分离
2. 4. 1 棘托竹荪菌托乙酸乙酯提取物制备
1000 g棘托竹荪菌托干品剪碎,过 60 目筛,加
4000 mL乙酸乙酯,置室温下(25 ~ 30 ℃)浸提 48 h
(不时摇动)。400 目过滤,滤液低温 4 ℃、5000 rpm
离心 5 min,收集提取液。滤渣再加乙酸乙酯 2000
mL摇匀浸提 24 h,过滤、离心(条件同上)。合并两
次提取液,50 ℃减压薄膜浓缩至恒重,-18 ℃保存
备用。
2. 4. 2 棘托竹荪菌托抑菌物质的分离
2. 4. 2. 1 硅胶柱层析
固定相按提取物(g)∶硅胶(g)= 1∶ 50 称取硅胶
(200 ~ 300 目),根据硅胶量选择适当的层析柱;流
动相选择氯仿-甲醇洗脱体系或石油醚-乙酸乙酯洗
脱体系。每 2 倍保留体积收集于三角瓶中,每个梯
度洗脱 10 倍保留体积。50 ℃下旋转蒸发仪浓缩
干,用甲醇或氯仿溶解后移至小烧杯中。薄层层析
(TLC)法检测合并相同组分。
2. 4. 2. 2 反相中压液相制备色谱分离层析
1191Vol. 27 林陈强等:棘托竹荪菌托抑菌物质提取、分离及活性组分
固定相为 YMC-GEL,流动相选择不同比例的甲
醇-水梯度洗脱,流速 5 mL /min,最大压力为 3 MPa;
馏分收集器为 1 管 /5 min,每梯度收集 10 管,50 ℃
下旋转蒸发仪浓缩干,用甲醇或氯仿溶解后移至小
烧杯中。薄层层析(TLC)法检测合并相同组分。
2. 5 抑菌活性成分 GC-MS分析
气相色谱条件:进样口温度为 250 ℃,检测器温
度为 280 ℃。柱温采用程序升温方式:70 ℃ 3 min,
3 ℃ /min至 100 ℃,100 ℃ 6 min,5 ℃ /min 至 150
℃,150 ℃ 6 min,10 ℃ /min至 250 ℃,250 ℃15min,
分流比 30 ∶ 1,柱流量 1. 2 mL /min,柱头压 5. 5psi。
进样量 1. 0 μL。
质谱条件:用 70 eV的 EI源 230 ℃,四级杆 150
℃,溶剂延迟时间为 3 min 分子量范围为 25 ~ 500
amu。
通过计算机检索与 NIST 质谱库和 Wiley 质谱
库提供的标准质谱图进行对照,并参照已发表的质
谱图,从而鉴定;同时将相对百分含量按峰面积归一
化法计算,根据色谱图保留峰面积计算各成分的相
对百分含量。
2. 6 数据统计分析
试验结果采用 SPSS16. 0 统计软件,one-way
ANOVA进行方差分析,均值比较用 LSD 和 Duncan
法。
3 结果与分析
3. 1 不同试剂对抑菌物质提取效果
从图 1 和表 1 可以看出,5 种试剂提取物抑菌
能力依次为甲醇 >乙酸乙酯 >丙酮 >正丁醇 >石油
醚。从表 1 可以看出甲醇提取时的得率最高,为 7.
81%,用 5 mL原提取试剂重新溶解后甲醇提取物浓
度是乙酸乙酯提取物 7. 8 倍左右,但抑菌能力的增
加并不明显,说明用甲醇提取时杂质相对较多,不利
于分离抑菌活性物质,从分离效率的角度考虑选用
乙酸乙酯作为提取试剂。
1:石油醚;2:正丁醇;3:乙酸乙酯;4:丙酮;5:甲醇;6:空白
1:petroleum ether,2:n-butyl alcohol,3:ethyl acetate,4:acetone,5:
methanol,6:Blank
图 1 不同试剂提取物抑菌效果(指示菌:金黄色葡萄球菌)
Fig. 1 The antibacterial ability of different extracts (indica-
tor bacteria:Staphylococcus aureus)
表 1 不同试剂提取物抑菌效果
Table 1 The antibacterial ability of different extracts
溶剂
Solvent
石油醚
Petroleum ether
正丁醇
n-Butyl alcohol
乙酸乙酯
Ethyl acetate
丙酮
Acetone
甲醇
Methanol
提取率 Extraction yield (%) 0. 07 0. 30 1. 08 1. 22 7. 81
浓度 Concentration (mg /mL) 7 30 108 122 781
抑菌圈直径 Antibacterial circle diameter (mm) 0 aA 7. 4 ± 0. 18 bB 14. 9 ± 0. 22 cCD 12. 0 ± 0. 18 cC 18. 2 ± 0. 12 dD
注:数据为 3 次重复的平均值;不同小写字母表示差异显著(P < 0. 05);不同大写字母表示差异极显著(P < 0. 01) ;下同。
Note:Values were means of 3 replicates ± s. d,Different lower case letters indicated significant different at P < 0. 05,different capital letters indicated sig-
nificant difference at P < 0. 01. Same as below.
3. 2 粗提物抑菌活性测定
菌托乙酸乙酯提取物抗菌活性测定实验结果如
图 2 所示。提取物对 6 种常见的细菌均有抑制作
用,其抑菌效果依次为金黄色葡萄球菌 >标准摩根
氏菌 >枯草芽孢杆菌 >蜡样芽孢杆和 >大肠杆菌 >
肠炎沙门氏菌。提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效
果最佳,因此选择金黄色葡萄球菌作为下一步分离
实验中检测分离组分抑菌活性的指示菌。
35
30
25
20
15
10
5
0





Di
am
et
er
%o
f%i
nh
ib
iti
on
%zo
ne
(m
m
)
Escherichia
coli
Staphylococ-
cus aureus
Bacillus
subilis
Bacillus
cereus
Morganella
fulton
Salmonella
enteritidis
指示菌
Indicator%bacteria
图 2 乙酸乙酯提取物抑菌试验
Fig. 2 The antibacterial ability of ethyl acetate extract a-
gainst different indicator bacteria
2191 天然产物研究与开发 Vol. 27
3. 3 提取物中抑菌成分的理化性质研究
3. 3. 1 抑菌成分热稳定性试验
菌托乙酸乙酯提取物 100 ℃沸水浴中处理不同
时间后进行抑菌试验,以甲醇作为对照,结果如图 3
所示,可以看出提取物在 100 ℃沸水浴 70 min 过程
中,其抑菌能力并未有较大的改变,说明提取物中的
抑菌成分具有较好的热稳定性。





Di
am
et
er
%of
%in
hi
bi
tio
n
%zo
ne
(m
m
)
40
35
30
25
20
15
10 0 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70
处理时间
Time(min)
图 3 不同热处理时间对提取物抑菌能力的影响
Fig. 3 Effect of heat treatment on antibacterial activity of the
ethyl acetate extract
3. 3. 2 UV对抑菌成分稳定性的影响
菌托乙酸乙酯提取物经紫外线照射后的抑菌活
性如图 4 所示,实验表明抑菌活性物质在紫外灯照
射 15 ~ 75 min过程中抑菌能力变化不明显,说明菌
托乙酸乙酯提取物中的抑菌活性物质不受紫外照射
的影响或者影响很小。





Di
am
et
er
%of
%in
hi
bi
tio
n
%zo
ne
(m
m
)
40
35
30
25
20
15
10 0 15% 30% 45% 60% 75
照射时间
Time(min)
图 4 UV对提取物抑菌能力的影响
Fig. 4 Effect of UV on antibacterial activity of the ethyl ace-
tate extract
3. 4 棘托竹荪菌托抑菌物质分离、纯化
3. 4. 1 乙酸乙酯提取物初次分离结果(氯仿-甲醇
洗脱)
乙酸乙酯提取物初次分离共获得 40 个组分
(编号 CM1-CM40),其中洗脱组分 CM15-CM18、
CM34-CM37 对大肠杆菌有抑制作用。洗脱组分
CM14-CM24、CM26-CM29、CM31-CM37 对金黄色葡
萄球菌均有抑菌作用。根据 TLC 结果将 CM14-
CM24 合并为组分 DEV①,CM26-CM29 合并为 DEV
②,CM31-CM37 合并为 DEV③。
表 2 洗脱组分的抑菌效果
Table 2 Antibacterial activity of different components after preliminary purification
组分
Component
编号
No.
氯仿(V)∶甲醇(V)
Chloroform(V)∶ Methanol(V)
重量(g)
Weight(g)
抑菌效果
Antibacterial activity
大肠杆菌
Escherichia coli
金色葡萄球菌
Staphylococcus aureus
DEV① CM14-CM24 60∶ 1-50∶ 1 0. 428 + + + +
DEV② CM26-CM29 40∶ 1-30∶ 1 0. 117 - +
DEV③ CM31-CM37 20∶ 1-10∶ 1 0. 783 + + + + + +
注:“-”表示无抑菌效果;“ +”表示有抑菌效果;随着“ +”增加抑菌效果增强。
Note:“-”no antibacterial activity;“ +”had antibacterial activity;“ +”→“ + + +”showed from weak to strong activity.
从表 2 可以看出,菌托乙酸乙酯提取物经过硅
胶柱层析后分离得到的 3 个具有抑菌作用的组分
DEV①、DEV②、DEV③,其中 DEV①与 DEV③对大
肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,且抑菌效
果较强;而 DEV②只对金黄色葡萄球菌有较弱抑制
作用。3 个组分是以不同极性洗脱相洗脱出来,其
中 DEV①和 DEV③洗脱极性相差较大,说明 DEV①
和 DEV③是含不同抑菌化合物的组分,由此可以推
测竹荪菌托抑菌成分中至少含有两个以上具有抑菌
活性的化合物。
3. 4. 2 DEV①硅胶柱分离层析结果
称取 300 mg分离下来的组分 DEV①进行层析
柱(石油醚-乙酸乙酯洗脱),获得组分经 TLC 分析
后合并为 DEV①-1 ~ DEV①-11。从图 5 可以看出,
组分 DEV①-5 ~ DEV①-10 均有抑菌作用,随着洗脱
剂极性增加抑菌作用减弱;将抑菌组分 DEV①-5 ~
DEV①-9 合并,待挥发干后继续进行柱层析(氯仿-
甲醇洗脱),通过薄层层析结果将各个组分合并为
10 个组分(1 号-10 号),测定抑菌作用,如图 6 所示
7 号和 8 号有抑菌活性,合并为 DEVⅠ。
3191Vol. 27 林陈强等:棘托竹荪菌托抑菌物质提取、分离及活性组分
图 5 DEV①分离组分抑菌检测(石油醚-乙酸乙酯洗脱)
(1-11:DEV①-1-DEV①-11)
Fig. 5 Antibacterial activity of different components separa-
ted from DEV①(Eluent:petroleum ether-ethyl ace-
tate;1-11:DEV①-1-DEV①-11)
图 6 DEV①二次分离组分抑菌检测(氯仿-甲醇洗脱)
(1-10:1 号-10 号)
Fig. 6 Antibacterial activity of different components further
separatd from DEV①(Eluent:chloroform-methanol;
1-10:No. 1-No. 10)
3. 4. 3 抑菌组分 DEV③中抑菌成分的分离纯化
称取 500 mg分离下来的组分 DEV③进行反相
中压液相制备色谱分离层析,获得组分经 TLC 分析
后合并为 DEV③-1 ~ DEV③-30。从图 7 可以看出,
组分 DEV③-1 和 DEV③-4 ~ DEV③-8 均有抑菌作
用。将抑菌组分 DEV③-4 ~ DEV③-8 合并为 DEV
Ⅱ。
图 7 DEV③分离组分抑菌检测
Fig. 7 Antibacterial activity of different components separa-
ted from DEV③
3. 5 抑菌活性成分 GC-MS分析
3. 5. 1 DEV I化学成分分析
对 DEV I GC-MS 分析结果共鉴定出 57 种成
分,其中相对含量在 1%以上共 20 个,如表 3 所示。
其中脂类 12 种,醇类 1 种,酸类 4 种,其他 3 种。20
种成分相对含量共占总体的 82. 07%。
表 3 DEVⅠ中相对含量 1%以上的化学成分
Table 3 The components with relative content more than 1% of total in DEV I
编号
No.
分子式
Molecular
formula
分子量
Molecular
weight
匹配度
Match
Result
化学式
Chemical
formula
相对含量
Relative
contents
1 C17H34O2 270 98 14-甲基十五烷酸甲酯 Pentadecanoic acid,14-methyl-,methyl ester 10. 91%
2 C16H32O2 256 98 棕榈酸 n-Hexadecanoic acid 9. 28%
3 C18H34O2 282 94 油酸 Oleic Acid 8. 34%
4 C19H36O2 296 99 反-9-十八碳烯酸甲酯 9-Octadecenoic acid,methyl ester,(E)- 8. 10%
5 C17H32O2 268 91 棕榈油酸甲酯 9-Hexadecenoic acid,methyl ester,(Z)- 7. 39%
6 C10H26O6P2 S4 433 99 田乐磷 DEMEPHION 5. 54%
7 C10H18O3 186 99 9-氧代壬酸甲酯 Nonanoic acid,9-oxo-,methyl este 5. 20%
8 C38H68O8 652 79 L-抗坏血酸-2,6-二棕榈酸酯 L-ASCORBYL DIPALMITATE 4. 76%
9 C16H10Br2O 378 96 2,5-Di[p-bromophenyl]furan 2. 94%
10 C9H16O4 188 78 辛二酸单甲酯 Suberic acid monomethyl ester 2. 87%
11 C19H38O3 314 99 2-羟基十八烷酸甲酯 Octadecanoic acid,2-hydroxy-,methyl ester 2. 83%
12 C11H14ClO 197 80 2-[4-Chloro-2-(1-methylethyl)phenoxy]ethanol 2. 07%
13 C16H30O2 254 99 11-Hexadecenoic acid,(11Z)- 2. 02%
14 C19H36O 280 64 2-Octylcyclopropaneoctanal 1. 96%
15 C16H22O4 278 86 邻苯二甲酸二异丁酯 Phthalic acid,isobutyl octyl este 1. 91%
16 C17H34O2 270 93 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutyl phthalate 1. 31%
4191 天然产物研究与开发 Vol. 27
17 C16H32O2 256 98 十五碳酸甲酯 Methyl pentadecanoate 1. 23%
18 C18H36O2 284 91 硬脂酸 Octadecanoic acid 1. 23%
19 C16H22O4 278 91 邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯 1,2-Benzenedicarboxylic acid,mono 1. 13%
20 C19H38O2 299 99 硬脂酸甲酯 Octadecanoic acid,methyl ester 1. 05%
3. 5. 2 DEVⅡ化学成分分析
对 DEVⅡGC-MS 分析结果共鉴定出 24 种成
分,其中相对含量在 1%以上共 6 个,如表 4 所示。
6 种成分相对含量共占总体的 86. 2%,其中相对含
量较高的为肉桂酸和 2-呋喃甲酸,二者均为已知具
有抑菌作用的物质,因此推测为 DEVⅡ具有抑菌作
用的主要功能成分。
表 4 DEVⅡ中相对含量 1%以上的化学成分
Table 4 The components with relative content more than 1% of total in DEVⅡ
编号
No.
分子式
Molecular
formula
分子量
Molecular
weight
匹配度
Match
Result
化学式
Chemical
formula
相对含量
Relative
contents
1 C9H8O2 148 98 肉桂酸 Cinnamic acid 54. 2%
2 C5H4O3 112 94 2-呋喃甲酸 2-Furancarboxylic acid 25. 6%
3 C18H34O2 282 94 油酸 Oleic Acid 2. 2%
4 C7H6O2 122 94 苯甲酸 Benzoic acid 1. 6%
5 C16H22O4 278 95 邻苯二甲酸二丁酯 Dibutyl phthalate 1. 4%
6 C10H12O3 180 95 2-羟基-3-苯基丙酸甲酯 2-Hydroxy-3-phenylpropanoic acid methyl ester 1. 2%
4 讨论与结论
实验发现竹荪菌托提取物具有抑菌作用,且具
有较广的抑菌菌谱、热稳定、耐紫外照射的特点。菌
托作为竹荪生产过程产生的废弃物,开发成本低,从
菌托中开发获得天然防腐剂具有巨大的潜在价值。
竹荪被发现具有抑菌作用已有较多报道。长裙
竹荪提取液对细菌、病原菌具有广泛的抑制作用,在
中性至碱性条件下可发挥抑菌作用,对高温、高压稳
定,但对酵母菌、霉菌没有明显的抑制作用[5,9,18];棘
托竹荪挥发油对霉菌、酵母及细菌都有抑菌效
果[10-14,19],水提物对常见有害菌具有一定的抑菌效
果,对高温有一定的稳定性[7],可见竹荪中的抑菌
成分与竹荪种类及提取方法有关,这也说明了竹荪
中具有多种的抑菌成分,如有报道竹荪多糖具有抑
菌活性[20-21]。
檀东飞等[19]采用非极性至极性的 5 种溶剂浸
提棘托竹荪中的抑菌物质,结果表明随着溶剂极性
的增强,提取得率增大;同时对不同溶剂提取物分别
做了抑菌试验,提取物的抑菌效果是:乙酸乙酯提取
物 >正己烷提取物 >丙酮提取物 >乙醇提取物 >水
提取物,这与本文对棘托竹荪菌托的实验结果相近。
本文通过活性追踪法分离纯化棘托竹荪菌托乙酸乙
酯提取物的抑菌成分,虽然未能得到单一抑菌成分,
但是极性较大的抑菌组分 DEVⅡ中肉桂酸及 2-呋
喃甲酸的相对含量接近 80%,而二者均为已知具有
抑菌活性的化学物质[22-24],因此可以推测棘托竹荪
菌托乙酸乙酯提取物起抑菌作用的主要物质为肉桂
酸及 2-呋喃甲酸。分别采用液相色谱法和气象色
谱法测得竹荪菌托乙酸乙酯粗提物中肉桂酸含量为
0. 0153%,2-呋喃甲酸含量为 0. 0086%。分离获得
的极性较小的组分 DEVⅠ中相对含量超过 1% 的
占 82. 07%,而相对含量超过 3% 的占 59. 52%,但
这些已知物质中未见报道具有明显的抑菌作用成
分,由此认为 DEVⅠ抑菌作用可能是多种小极性化
合物协同作用的结果。Huang MQ等[25]从长裙竹荪
子实体挥发性成分中分离鉴定一种抗生素 Albafla-
venone,并通过定量分析出长裙竹荪中 Albaflaveno-
ne 含量为 0. 0063%,推测该化合物是长裙竹荪具有
抑菌活性的主要活性成分;黄明泉同时也在棘托竹
荪子实体和棘托竹荪蛋的挥发性成分中检测发现
Albaflavenone[26],棘托竹荪菌托中是否含有该成分,
以及其他相关的抑菌活性物质和不同化学组分的比
列对抑菌活性的影响还有待进一步研究。
参考文献
1 Bao ZH(暴增海),Ma GZ(马桂珍). The Dictyophora re-
source and its development and utilization in China. Res Sci
5191Vol. 27 林陈强等:棘托竹荪菌托抑菌物质提取、分离及活性组分
(自然资源),1994,3:68-71.
2 Tan JJ(谭敬军),Hu YP(胡亚平). Antimicrobial actions of
Dictyophora indusia Fisscher. J Hunan Agric Univ,Nat Sci
(湖南农业大学学报,自科版)1999,25:479-482.
3 Tan JJ(谭敬军). Studies on antimicrobial characteristics of
Dictyophora indusia Fisscher extract. Food Sci (食品科学),
2001,22(9) :73-75.
4 He XS(贺新生),Huang QQ(黄倩倩),Pan JL(潘家莲),
et al. Study on extracting natural antiseptic from the mycelia
and fruity-bodies of Phallales. Sichuan Food Ferment (四川
食品与发酵),2004,40(4) :40-42.
5 Han H(韩慧),Zhang G(张刚),Hao JW(郝景雯),et al.
Studies on a kind of biopreservative from Dictyophora gown.
Food Res Dev (食品研究与开发) ,2008,29(5) :62-64.
6 Lu HN(卢惠妮),Pan YJ(潘迎捷),Zhao Y(赵勇),et al.
Antimicrobial effect of Dictyophora indusiata Fisscher fruit-
body. Nat Prod Res Dev (天然产物研究与开发),2011,
23:324-327.
7 Lu HN(卢惠妮),Pan YJ(潘迎捷),Sun XH(孙晓红),et
al. Antibacterial activity of water extract of Dictyophora echi-
novolvata fruitbody. Food Sci (食品科学),2009,30:120-
123.
8 Hao JW(郝景雯),Jia SR(贾士儒),Zhang G(张刚),et
al. Comparison on the antimicrobial activity of ethanol and
water extracts of Dictyophora indusia Fisscher. Food Res and
Dev (食品研究与开发) ,2010,31(10) :8-10.
9 Hao JW(郝景雯),Zhang G(张刚),Han H(韩慧),et al.
Study on the extracted method of Dictyophora indusia Fiss-
cher and its antimicrobial action. Sci Tech Food Ind (食品工
业科技),2008,29:123-124.
10 Tan DF(檀东飞),Su YQ(苏燕卿),Wu RQ(吴若菁),et
al. Studies on antimicrobial activity of Dictyophora Echino-
volvata extracted with ethyl acetate. J Strait Pharm (海峡药
学),2002,14:101-103.
11 Tan DF(檀东飞),Wu RJ(吴若菁),Liang M(梁鸣),et al.
Studies on chemical compositions and antimicrobial activity
of volatile oil of Dictyophora Echinovolvata. Mycosystema(菌
物系统),2002,21:228-233.
12 Tan DF(檀东飞),Huang RZ(黄儒珠),Lu Z(卢真),et al.
Chemical compositions and antimicrobial activity of the vola-
tile oil and petroleum ether extract from the fresh carpophore
of Dictyophora echinovolvata. J Fujian Normal Univ,Nat Sci
(福建师范大学学报,自科版),2010,26:100-105.
13 Tan DF(檀东飞),Du ZH(杜峥辉),Wu RQ(吴若菁),et
al. Studies on antimicrobial activity of Dictyophora Echino-
volvata extracted with N-hexane. J Strait Pharm (海峡药
学),2003,15:61-63.
14 Liang M(梁鸣),Tan DF(檀东飞),Li HZ(李惠珍),et al.
Chemical compositions of Dictyophora echinovolvata extracted
with acetone and antimicrobial activity of its extracts with ac-
etone,ethyl alcohol,water. Mycosystema(菌物学报),2005,
24:197-201.
15 Lin CQ(林陈强),Chen JC(陈济琛),Lin RB(林戎斌),et
al. Study on the development of the comprehensive utilization
about the Dictyophora resource. Edible Fungi Chin (中国食
用菌),2011,30(2) :8-11.
16 Chang JJ(常佳驹),Zhuang YL(庄永亮),Shang XL(尚小
丽),et al. Study on nutritional characteristics of the volva of
Dictyophora rubrovolvata. Sci Tech Food Ind (食品工业科
技),2011,32:408-410.
17 Zhuang YL,Sun LP. Nutritional characteristics of proteins
from the volva and pileus in cultivated mushroom Dictyophora
rubrovolvata. Int J Food Sci Nutri,2011,62:392-396.
18 Tan JJ(谭敬军),Hu YP(胡亚平),Wu HH(吴晗晗).
Studies on antimicrobial activity of Dictyophora Indusia Fiss-
cher. Food Sci (食品科学),2000,21(10) :54-56.
19 Tan DF(檀东飞),Huang RZ(黄儒珠),Lu Z(卢真),et al.
Chemical compositions and antimicrobial activity of the volva
of Dictyophora echinovolvata (I). Mycosystema(菌物学报),
2006,25:603-610.
20 Wang WX(王宪伟). Study on bacteriostasis activity of poly-
saccharides from Dictyophora. J Anhui Agric Sci (安徽农业
科学),2013,41:1414.
21 He H(何慧). Extraction and bacteriostasis of polysaccharide
extracted from Dictyophora indusiata mycelium. J Guizhou
Agric Sci(贵州农业科学),2010,38(9) :93-95.
22 Zhang CL(张春乐),Song KK(宋康康),Chen XR(陈祥
仁)et al. The antibacterial and antifungal activity studies of
cinnamic acid and its derivatives. J Xiamen Univ,Nat Sci(厦
门大学学报,自科版),2006,45:16-18.
23 Liang SN(梁盛年),Duan ZF(段志芳),Fu L(付莉)et al.
Comparative research on the antibacterial action of several
types of cinnamic acid derivative and cinnamic acid. Food
Sci Tech(食品科技),2005,9:71-73.
24 Sun DX(孙道兴),Gao H(高华). New prepared method of
2-furoic acid. J Qingdao Univ (青岛大学学报),2001,16
(3) :60-61.
25 Huang MQ,Chen X,Tian HY,et al. Isolation and identifica-
tion of antibiotic albaflavenone from Dictyophora indusiata
(Vent:Pers.)Fischer. J Chem Res,2011,35:659-660.
26 Huang MQ(黄明泉). Study on chloropropandiol formation in
thermo-reaction meat flavours and development of new meat
flavours. Xi’an:Shaanxi University of Science & Technology
(陕西科技大学),PhD. 2012.
6191 天然产物研究与开发 Vol. 27