全 文 ：研究与探讨
2014年第22期
Vol . 35 , No . 22 , 2014
地被竹与淡竹叶提取物抗氧化活性的
比较研究
王 姝1，2，倪勤学2，许光治2，杨冬冬2，高前欣2，张有做2，*
（1．浙江农林大学，亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安 311300；
2.浙江农林大学，浙江省农产品品质改良技术研究重点实验室，浙江临安 311300）
摘 要：以5种地被竹与淡竹叶为材料，采用Folin试剂还原比色法、硝酸铝-亚硝酸钠比色法和DPPH法、ABTS法、
FRAP法、Fenton反应法比较其提取物中总酚、总黄酮含量及其抗氧化能力。结果表明，6种竹叶均含有很高的次生代
谢物，其中鹅毛竹叶提取物的提取率最高，为8.70%±0.02%，高于淡竹的提取率（8.02%±0.06%）；以干基计算，六种竹
子总酚含量在4.13%~9.06%之间，总黄酮含量在2.35%~4.37%之间，其中两者含量最高的为鹅毛竹；竹叶提取物具有
较强清除自由基的作用，清除DPPH自由基和ABTS自由基能力强于淡竹的有鹅毛竹和南平倭竹；不同竹种提取物的
铁还原能力之间存在显著性差异，强于淡竹的只有鹅毛竹，其FRAP值为585.00μg/mL。
关键词：地被竹，淡竹，竹叶，抗氧化
Comparative analysis of antioxidant activity of bamboo leaf extracts of
ground bamboo and Phyllostachysnigra var．henon
WANG Shu1，2，NI Qin-xue2，XU Guang-zhi2，YANG Dong-dong2，GAO Qian-xin2，ZHANG You-zuo2，*
（1．The Nurturing Station of the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture，Zhejiang A&F University，
Lin’an 311300，China；
2.The key laboratory for quality improvement of agricultural products of Zhejiang province Zhejiang A&F University，
Lin’an 311300，China）
Abstract：Six bamboo leaves（five ground bamboos and Phyllostachysnigra var） was used as the materials to
analysis the contents of total phenols and total flavonoids by using Forint reduction assay reagent and
aluminum nitrate-sodium nitrite colorimetry and their antioxidant activity by using DPPH，ABTS，FRAP and
Fenton reaction method，respectively. The result showed that six kinds of bamboo leaves contained abundant
botanic secondary metabolites. The yield of extract from Shibataea chinensis Nakai was maximum，up to 8.70%
±0.02%，higher than that of extract from Phyllostachysnigra var. The yield of extract from S.nanpingensis Q.F.
Zheng et K.F.Huang was 8.02%±0.06%. The content of total phenolics，on dry basis of leaves，varied in a range
of 4.13%~9.06% in the six kinds of bamboo leaves，total flavonoids located in 2.35%~4.37% ，respectively.
Among the six bamboos，there were more contents of total phenolics and total flavonoids in the extract from
Shibataea chinensis Nakai was highest. Meanwhile two species（Shibataea chinensis Nakai and S.nanpingensis
Q.F.Zheng et K.F.Huang） revealed the stronger scavenging capacity against DPPH·and ABTS+· than those of
any other bamboos.The reducing power in each bamboo leaves were significantly changed （p＜0.05） . The
reducing power of Phyllostachysnigra var．henon was only lower than that of Shibataea chinensis Nakai，whose
FRAP was 585.00μg/mL.
Key words：ground bamboo；Phyllostachysnigra var．henon；bamboo leaves；anti-oxidant activity
中图分类号：TS201.1 文献标识码：A 文 章 编 号：1002-0306（2014）22-0135-05
doi：10.13386/j.issn1002-0306.2014.22.021
收稿日期：2014－02－25
作者简介：王姝（1988-），女，硕士研究生，研究方向：竹林培育与利用。
* 通讯作者：张有做（1970-），男，博士，教授，研究方向：食品分子功
能学。
基金项目：浙江省科技厅公益性项目（2013C32089）。
竹子是禾本科竹亚科多年生的常绿植物，其次 生代谢物非常丰富，现如今在世界上是具有使用价
值的物群之一。素有“竹子王国”之称的中国，拥有丰
富的竹资源，特别是在我国长江以南地区，竹子种
类、面积和竹材产量都位居前列。目前对竹叶提取物
的研究主要集中于刚竹属的一些竹种，如毛竹、淡
竹、斑竹等，其中淡竹竹叶可入药，这在唐朝著名食
疗学家孟冼所著《食疗本草》中有所记载[1]。大量研究
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表明，淡竹叶中主要有效成分为黄酮糖苷、香豆素类
[2]和茶多酚[3]，具有降血脂、抗血栓、抗氧化、免疫调节
等生理活性[4-8]。另外，发现淡竹叶中还含有多糖类成
分、内酯、叶绿素、氨基酸、维生素、微量元素等成分，
其都具有很高的生物活性作用[9]。然而刚竹属竹种叶
的采集难度大、生物量也相对较小，不利于开发为叶
用竹种；反之，地被竹种因其秆形矮小、叶子密集、叶
生物量大，适于机械化采摘。目前对地被竹的研究报
道也相对较少。
本实验选取5种地被竹和淡竹的竹叶为研究对
象，比较研究地被竹与淡竹竹叶中总酚、总黄酮的含
量及其抗氧化活性，为地被竹在以后的研究和开发
利用提供一定的科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
鹅毛竹（Shibataea chinensis Nakai）、南平倭竹
（S.nanpingensis Q.F.Zheng et K.F.Huang）、铺地竹
（Sasa argenteastriatus Camus）、翠竹（Sasa pygmaea
（Miq .）E . G . Camus）、黄条金刚竹（Pleioblastus
kongosanensis f. aureostriatus Muroi et Yuk. Tanaka）、
淡竹（Phyllostachysnigra var．henon） 于2012年8月采
集；芦丁、对羟基苯甲酸、DPPH（2，2’-二苯基-1-苦
味酰苯肼）、ABTS 购自Sigma公司，纯度均大于
98%；福林试剂 购自上海鼎国生物科技有限公司；
pUC18质粒 DNA（0.5μg/μL） 购自宝生物工程（大
连）有限公司；甲醇、乙醇、碳酸钠、FeCl3、硫酸、双氧
水、FeSO4等 为分析纯；水 为去离子水。
DGG-9053AD型高温鼓风干燥箱 上海森信实
验仪器有限公司；RE-52A型旋转蒸发仪 上海亚荣
生化仪器厂；UV-1800型紫外分光光度计 岛津；
DK-8D型电热恒温水槽 上海精宏实验设备有限公
司；YP502型电子天平 上海精密科学仪器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 样品制备 分别采集6个竹种的新鲜叶子，清
洗沥干，立刻用微波炉加热（间隙加热3次，每次
1min），然后置于烘箱中干燥至恒重，粉碎，过40目
筛，备用[10]。
分别称取5.00g粉末平行样品3份，加入15倍的甲
醇回流提取2h，提取3次，趁热过滤，洗渣，合并滤液，
并用旋转蒸发仪减压浓缩至浸膏状，得到醇提取物（m）。
将醇提取物用一定体积的蒸馏水混悬，脱脂，脱脂后
用正丁醇溶剂萃取，得到各竹种的正丁醇萃取物，浓
缩干燥到恒重（mi），备用。
提取物得率（%）=mi/5.00×100
式中，mi指各竹种正丁醇相萃取物的质量（g）。
1.2.2 竹叶提取物中总酚含量的测定
1.2.2.1 标准曲线的测定 以对羟基苯甲酸为标准
品，采用Folin试剂还原比色法[10]测定，在745nm的波
长处测定吸光度（A）。以A值为纵坐标（Y），对羟基苯
甲酸的质量为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方
程为Y＝0.0309 X＋0.0914，R2＝0.9966，线性范围为2~
9μg/mL。
1.2.2.2 样品测定 分别精密量取待测液0.05mL，按
标准曲线制备中的方法在745nm处测定A值，并根据
对羟基苯甲酸的标准曲线，计算各试样的总酚含量。
总酚含量（%）=（m1×V2）/（m×V1）×100
式中：m1—依据标准曲线计算出被测液中总酚
含量（mg），m—供试品取样量（mg），V1—待测液分取
的体积（mL），V2—待测液的总体积（mL）。
1.2.3 竹叶提取物中总黄酮含量的测定
1.2.3.1 标准曲线的制作 以芦丁为标准品，参照丁
明等[11]的硝酸铝-亚硝酸钠比色法加以改进，准确吸
取浓度为150μg/mL的标准品溶液0、0.50、1.00、2.00、
3.00、4.00mL移入10mL具塞试管中，加无水乙醇定容
至5mL，分别加入0.3mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放
置5min，加入0.3mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6min
后加入2mL 1.0mol/L氢氧化钠溶液，用无水乙醇定容
至10mL，静置10min。在波长510nm处测定A值。以A
值为纵坐标（Y），以芦丁的质量为横坐标（X），绘
制标准曲线，得回归方程为Y＝0.0049X＋0.0018，R2＝
0.9984，线性范围为30~60μg/mL。
1.2.3.2 样品测定 分别精密量取待测液0.1mL，在
510nm的波长处测定A值，并根据芦丁的标准曲线，
计算各试样的总黄酮含量。
总黄酮含量（%）=（m1×V2）/（m×V1×106）×100
式中：m1—依据标准曲线计算出被测液中黄酮
含量（μg），m—供试品取样量（g），V1—待测液分取的
体积（mL），V2—待测液的总体积（mL）。
1.2.4 竹叶提取物抗氧化活性的测定
1.2.4.1 清除DPPH自由基实验 参照文献[12]方法
加以改进，准确称取DPPH试剂0.01g，用甲醇溶解
至250mL量瓶中，定容，摇匀得0.10mmol/L。分别取
0.1mL待测样液和3.9mL DPPH溶液混合摇匀，在室
温下反应1h，517nm波长下测定A值。以甲醇为空白
对照，计算各样品抑制率。
以待测样品浓度为横坐标（X），抑制率为纵坐标
（Y）得待测样品清除DPPH 自由基的关系曲线。计算
得到待测样品的半数抑制浓度（IC50值）。
抑制率（%）＝（A空白－A样品）/A空白×100
1.2.4.2 清除ABTS+自由基实验 参照文献[13]方法
加以改进。取176μL浓度为140mmol/L的过硫酸钾水
溶液加入到10mL浓度为0.384mg/mL的ABTS+溶液中
混合，避光反应12~16h。
测定之前加入无水乙醇将ABTS+溶液稀释至吸
光值为0.700±0.02（734nm）下。以无水乙醇为空白试
剂将分光光度计调零。将3.9mL的ABTS+溶液与0.1mL
的待测液溶液混合摇匀，在室温下反应6min，在
734nm波长下测定吸光值（A样品）。3.9mL的ABTS溶液
与0.1mL样品提取剂为空白对照，测得吸光值（A空白）。
以待测样品浓度为横坐标（X），抑制率为纵坐标（Y）
得待测样品清除ABTS+自由基的关系曲线。计算得到
待测样品的半数抑制浓度（IC50 值）。
抑制率（%）＝（A空白－A样品）/A空白×100
1.2.4.3 FRAP法分析铁离子还原能力 参照文献方
法 [14]，配制相同浓度的样品溶液，各取0.3mL加入
2.7mL工作液（0.3mo1/L醋酸盐缓冲液25mL，10mmol/L
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TPTZ溶液2.5mL，20mmo1/L FeCl3溶液2.5mL），混匀
后在37℃反应10min，于593nm处测定A值。以70%乙
醇溶液做空白对照。准确量取6.08mg硫酸亚铁溶于
适量的水中，加入18mo1/L硫酸0.25mL，再加水稀释
至50mL，得0.8mmol/L的硫酸亚铁溶液，并置入小铁
钉。依次配制400、200、100、50、25μmol/L标准溶液，
以硫酸亚铁浓度为横坐标（X），A值为纵坐标（Y）绘
制标准曲线，将样品反应后的A值在标准曲线上获得
相应的硫酸亚铁的浓度（μmol/L）定义为FRAP值。
1.2.4.4 对DNA损伤的保护作用的琼脂糖凝胶电泳
检测法 参照文献 [15]的方法并加以改进，采用
Fenton反应法测定竹叶提取物保护DNA损伤的能力。
样品浓度均为10mg/mL，pUC18质粒DNA 25μg溶于
1mol/L，pH7.4的Tris-HCl缓冲液中，备用。DNA溶液
1μL，1.75mmol/L FeSO4溶液2μL，不同的样品2μL移
入离心管，加入200mmol/L H2O2溶液2μL，用去离子
水补充至20μL，混合，置于室温下10min后，直接进行
1%琼脂糖凝胶电泳。空白对照为1μL DNA溶液和
1μL Tris-HCl缓冲液用去离子水补充至20μL。Fenton
反应对照为1μL DNA溶液、1μL Tris-HCl缓冲液、
2μL FeSO4溶液和2μL H2O2溶液，用去离子水补充至
20μL。实验组为1μL DNA溶液、1μL Tris-HCl缓冲
液、2μL FeSO4溶液、2μL样品溶液和2μL H2O2溶液，
用去离子水补充至20μL，在琼脂糖凝胶中加入样品
的顺序依次为鹅毛竹、南平倭竹、铺地竹、翠竹、黄条
金刚竹、淡竹。
1.2.5 数据处理 结果采用SPSS 17.0统计软件进行
数据分析，结果以x±s表示。
2 结果与分析
2.1 地被竹与淡竹竹叶提取物得率的比较
地被竹与淡竹竹叶提取物的得率见表1。由表1
可知，竹叶提取物的得率存在显著性差异（p＜0.05），
从高到低依次为：鹅毛竹＞南平倭竹＞淡竹＞翠竹＞黄
条金刚竹＞铺地竹，即鹅毛竹的得率最高，为8.68%～
8.72%；而铺地竹的得率最低，为6.82%～6.96%；高于
淡竹得率的有2个品种，低于淡竹得率的有3个品种，
分别为铺地竹、翠竹及黄条金刚竹。
2.2 地被竹与淡竹竹叶中有效成分的含量比较
以干基计算，地被竹与淡竹竹叶提取物中总酚、
总黄酮的含量见表2。由表2可知，不同竹种竹叶提取
物中总酚、总黄酮的含量存在显著性差异（p＜0.05），
6个竹种相比较，总酚含量的高低顺序依次为鹅毛
竹＞南平倭竹＞淡竹＞黄条金刚竹＞翠竹＞铺地竹，也即
鹅毛竹的含量最高，为9.06%±0.02%，铺地竹最低为
4.13%±0.03%，鹅毛竹叶中总酚的含量约为翠竹叶的
2倍左右。与淡竹叶相比较，总酚含量高于淡竹叶的
有2个竹种，为鹅毛竹和南平倭竹，这与提取率的结
果是一致的。地被竹的竹叶提取物中总黄酮的含量
趋势与总酚含量趋势基本一致，但与淡竹叶相比，总
黄酮含量高于淡竹叶的只有鹅毛竹叶，其含量为
4.37%±0.02%，总黄酮含量的高低顺序依次为：鹅毛
竹＞淡竹＞南平倭竹＞黄条金刚竹＞翠竹＞铺地竹。
2.3 地被竹与淡竹竹叶提取物的抗氧化能力的比较
地被竹与淡竹叶提取物对DPPH自由基、ABTS
自由基的清除效果见表3。由表3可知，各竹种竹叶提
取物对DPPH自由基的清除能力存在显著的差异，但
均低于VC的清除能力，其清除能力的大小顺序为：VC＞
鹅毛竹＞南平倭竹＞淡竹＞翠竹＞黄条金刚竹＞铺地竹。
与淡竹相比，清除DPPH自由基能力最强的地被竹是
鹅毛竹，经计算其半抑制浓度（IC50）为32.33μg/mL，
其次为南平倭竹，其半抑制浓度为33.50μg/mL，高于
淡竹的半抑制浓度（IC50）34.43μg/mL。
各提取物对ABTS+自由基的清除能力也存在明
显的差异，它们的清除能力也均低于VC清除ABTS+自
由基的能力，强弱顺序为VC＞鹅毛竹＞南平倭竹＞淡
竹＞黄条金刚竹＞翠竹＞铺地竹，与淡竹相比，地被竹
中的鹅毛竹及南平倭竹依然显示出了较强的清除
ABTS+自由基的能力，其半抑制浓度（IC50）分别为5.69、
5.92μg/mL，高于淡竹的6.08μg/mL。同时由表3可知，
铺地竹不管是清除DPPH自由基还是清除ABTS+自由
竹种 鹅毛竹 南平倭竹 铺地竹 翠竹 黄条金刚竹 淡竹
总酚（%） 9.06±0.02f 7.51±0.05e 4.13±0.03a 4.49±0.03b 4.56±0.03c 6.77±0.02d
总黄酮（%） 4.37±0.02f 3.54±0.03d 2.35±0.05a 2.57±0.02b 2.77±0.05c 3.65±0.06e
表2 不同品种竹叶中有效成分的含量（n=3）
Table 2 Contents of active component in the bamboo leaves from different species（n=3）
表1 萃取后不同竹种竹叶提取物的得率（n=3）
Table 1 The yields of bamboo leaf extracts from different varieties（n=3）
竹种 鹅毛竹 南平倭竹 铺地竹 翠竹 黄条金刚竹 淡竹
竹叶提取物得率（%） 8.70±0.02e 8.11±0.17d 6.89±0.07a 7.32±0.04c 7.22±0.03b 8.02±0.06d
注：同一列标记字母不同表示显著差异（p＜0.05）；表2~表4同。
竹种 鹅毛竹 南平倭竹 铺地竹 翠竹 黄条金刚竹 淡竹 VC
DPPH-IC50（μg/mL） 32.33±0.03b 33.50±0.08c 39.86±0.15g 37.76±0.42e 38.48±0.10f 34.43±0.14d 3.22±0.12a
ABTS+-IC50（μg/mL） 5.69±0.02b 5.92±0.02c 7.56±0.01g 7.00±0.02f 6.95±0.02e 6.08±0.01d 1.98±0.01a
表3 不同竹种竹叶提取物的抗氧化活性（n=3）
Table 3 Anti-oxidant activities in the extract from bamboo leaves of different species（n=3）
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基的效果都是最差的。
2.4 地被竹与淡竹竹叶提取物还原能力的比较
2.4.1 硫酸亚铁标准曲线的制备 以硫酸亚铁浓度
为横坐标（X），吸光值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，
得到如图1所示的一条函数曲线，对其数据进行数据
回归处理，得到回归方程为y=0.0007x+0.0515，R2=
0.9981，线性范围为100~800μmol/mL。
2.4.2 竹叶提取物的FRAP值 根据标准曲线的回
归方程计算，5种地被竹及淡竹叶提取物的FRAP值
测定结果见表4。由表4可知，不同竹种提取物及VC
的铁还原能力存在显著性差异（p＜0.05）。在所有竹
种中，铁还原能力最强的是鹅毛竹，其FRAP值为
（585.00±1.43）μg/mL，与淡竹相比，铁还原能力高于
淡竹的也只有鹅毛竹，其他地被竹的铁还原能力都
弱于淡竹的铁还原能力，还原能力大小顺序依次为
鹅毛竹＞淡竹＞南平倭竹＞翠竹＞黄条金刚竹＞铺地竹。
2.5 地被竹与淡竹竹叶提取物对DNA损伤的保护能
力的比较
Fenton反应的原理是在Fe2+的催化作用下，H2O2
产生具有高反应活性的羟基自由基，其氧化能力仅
次于氟无机氧化剂[16]。在生物体代谢过程中产生的
羟基自由基与蛋白质交联变性，危害人体健康[17]。
地被竹与淡竹竹叶提取物对DNA损伤的保护能
力见图2，泳道1是Mark，泳道2是空白对照，泳道3是
Fenton反应对照，泳道4～泳道9是分别加入相同浓度
的鹅毛竹、南平倭竹、铺地竹、翠竹、黄条金刚竹及淡
竹竹叶提取物。由图1表明，在加入同样浓度提取物
的情况下，鹅毛竹、铺地竹、黄条金刚竹及淡竹对
pUC18质粒DNA的保护作用明显强于南平倭竹和翠
竹对DNA的保护能力，由图2中DNA条带的亮度可
知鹅毛竹的保护作用最强，高于淡竹的保护能力，即
鹅毛竹对羟基自由基的清除能力高于淡竹的清除
能力。
2.6 竹叶提取物中总酚、总黄酮含量与抗氧化活性
的相关性
地被竹与淡竹竹叶提取物中总酚、总黄酮含量
与抗氧化活性的相关性见表5。由表5可知，6个竹种
竹叶提取物中总酚、总黄酮含量与抗氧化活性之间
存在很大的相关性，相关性都在90%以上，其中总黄
酮含量与ABTS+自由基的清除能力和铁还原力之间
的相关性要高于总酚含量与两者的相关性，说明，黄
酮在清除ABTS+自由基和铁还原能力上起主要作用。
而总酚含量与清除DPPH自由基能力之间的相关性
却大于总黄酮含量与清除DPPH自由基能力之间的
相关性，说明，在竹叶提取物中除了总黄酮外还存在
其他物质具有清除DPPH自由基的能力，这与宋仲容
等[18]的研究结果相一致。
3 结论
3.1 对5种地被竹和淡竹的测定结果表明，地被竹
竹叶中也含有丰富的次生代谢物，不同地被竹与淡
竹竹叶提取物中总酚、总黄酮含量之间存在显著性
差异，其中两种有效成分均高于淡竹的地被竹只有
鹅毛竹，均低于淡竹的地被竹有铺地竹、翠竹和黄条
金刚竹。
3.2 抗氧化和还原能力的实验结果表明地被竹与
淡竹竹叶提取物所表现出来的抗氧化能力及铁还原
能力之间也存在显著性差异。同时，竹叶提取物的抗
氧化活性与有效成分含量之间存在很大的相关性，
鹅毛竹、南平倭竹的抗氧化能力强于淡竹的抗氧化
名称 鹅毛竹 南平倭竹 铺地竹 翠竹 黄条金刚竹 淡竹 VC
FRAP（μg/mL） 585.00±1.43f 417.38±1.65d 205.95±1.65a 316.90±3.59c 225.00±1.43b 463.09±0.83e 2575.00±2.48g
表4 不同竹种竹叶提取物的FRAP值（n=3）
Table 4 FRAP of the extract from bamboo leaves of different species（n=3）
图1 硫酸亚铁标准曲线
Fig.1 Standard curve of the FeSO4
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
吸
光
值
FeSO4浓度（μmol/mL）
1 2 3 4 5 6 7 8 9
图2 各竹种竹叶提取物对DNA损伤的保护
Fig.2 Protection of DNA damage in the extract from bamboo
leaves of different species
注：1.Mark，2.空白对照，3.Fenton反应对照，4.鹅毛竹，5.南平倭
竹，6.铺地竹，7.翠竹，8.黄条金刚竹，9.淡竹。
指标
DPPH自由基
清除能力
ABTS+自由基
清除能力
铁还原力
总酚含量 R2=0.9499 R2=0.9134 R2=0.9032
总黄酮含量 R2=0.9235 R2=0.9201 R2=0.92
表5 不同竹种竹叶提取物中总酚、总黄酮与抗氧化活性的相关性
Table 5 The correlation between content of the total phenols，
total flavonoids and the antioxidant activity in the extracts of
different varieties
（下转第144页）
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能力。这可能与鹅毛竹和南平倭竹同属于倭竹属有
关，还有待进一步研究。
3.3 竹叶提取物对DNA损伤保护的实验结果表明，
同浓度提取物的处理下，所有竹种竹叶提取物对
DNA的损伤都显示出了一定的保护作用。鹅毛竹、铺
地竹、黄条金刚竹及淡竹对pUC18质粒DNA的保护
作用明显强于南平倭竹和翠竹对DNA的保护能力。
因此可推断，地被竹竹叶提取物对羟基自由基具有
一定的清除能力，具有进一步开发和研究的潜力。
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