全 文 ：.3 活性污泥涯合液优势 , 株的阵解效曲
降解率 (% ) 除苯酚菌株 除苯乙烯菌株 除丙酮自株 除甲醉菌株
( 2 0 0m g /l ) ( 5 0 m g /l ) ( 5 0 m g /1) ( 5 0
n l g /飞)
数最 占总株数 数 t 占总株数 数 t 占总株数 数盈 占总株致
(% ) (% ) (% ) (% )
0一 10 R0 47。 9 8 9 5 3 。 3 9 9 5 9 。 3 16 , , 8。 8
1 0
.
1一 2 0 2 9 1 7 . 3 4 2 。 4 46 27 。 5 2 1。 2
2 0
。
1一 3 0 5 3 . ` ) 7 4 。 2 l 9 1 1 。 4
3 0
.
1一 4 0 3 1。 8 1 0 6 。 0 l 0 。 6
4 0
。
I一 5 0 1 0 。 6 8 4 , 8
5 0
。
l一6 0 1 U 。 6 . 2 . 4 - 一 l
4
6 0
。
l一 7 0 5 3 . 0 9 5 。 4
7 0
。
1一 8 0 3 I 。 8 4 2 。 4
8 0
。
I一 9 0 3 1 。 8 l 7 10 。 l
9 0
。
l一 10 0 3 7 2 2 。 2 l 5 9 。 0 2 l 。 2
总 计 10 7 10 0 16 7 10 0 16 7 10 0 16 7 10 0
农 4 活性污泥 泛含浓中有效 . 株吸 (降解率 50 % 以上 )
细菌群系 降解苯酚 降解苯乙烯 降解丙酮苗株数 菌株数 菌株数
不动细菌属 9 1 2
假单胞菌属 l 5 1 5 2
产碱杆菌属 l 2 5
掀球菌属 6 9
称状杆菌麟 2 5
黄单胞菌属 l 1
未定属 4 5
总 计 4 9 4 9 2
还可能有菌胶团属 。 并认为在含酚废水活性污
泥中占优势的细菌是假单胞菌属 ,棒状杆菌属 ,
产碱杆菌属等闭 。 因水质是影响活性污泥微生
物组成的一个重要因素。 我们从向阳化工厂 .f
气池活性污泥中分离到的主要细菌群系 , 不动
细菌属占相当的优势。 这与其他研究者的报道
是不同的 ,显然与污水的水质成分有关 , 对此值
得进行广泛的调查。
, 考 文 献
【 l』 中国科学院掀生物研究所细菌分类组 : 《 一般细 菌 常
用鉴定方法》 ,科学出版社 , 北京 , 19 7 8 年 。
【2 』 中国科学院林业土坡研究所污染生态室 : 掀生物学通
报 , 7 ( l ) : 6 1一6礴, 19 8 00
[ 3 ] U e d e
,
5
.
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. 斑e h a r d : ] . G君二 才户 P I . 桥·
c r o b i o l
,
l叹3 ) : 23 9一 2 4 8 , 19 7 2。
「们 张志杰 : ` 环境保护生物学 , , 冶金工业出版社 , 冲一
8 1 , 1 9 8 2
0
海枣 曲 霉 产 生 的 糖 昔 酶 类
曾宇 成 张 树 政
(中国科学 院微生物研究所 , 北京 )
. 共 以木聚塘酶 、 口一 D一岩藻糖昔酶活力较高的海枣曲霉作为试验菌株 。 该菌株的粗酶液含有多
本所齐祖阅橄搜挂定 . 种 ,特此致谢 .
一
1 1 1
-
DOI : 10. 13344 /j . mi crobi ol . chi na . 1987. 03. 006
种塘昔酶 , 活力较高的有木聚施酶 、 地衣多塘酶 、 声一木糖昔酶 、 a 一半乳塘昔酶 、 召一 N 一乙酞氨基葡萄施昔
醉 、 卜菊萄塘昔酶、 尹一D 一岩藻箱昔酶及 户半乳塘昔酶等。 其 户-D 岩藻塘昔酶活力还高于 户半乳撼
昔阵。 将海套曲霉培养不同时间后测活力 , 表明木聚糖酶在培养的第 2 天即大量产生 , 第 3 天达到高
峰 。 户一 D 一岩旅塘昔酶在第 4 天开始产生 ,第 5夭达到高峰。 培养不同时间的粗酶液的盘状凝胶电泳分
析结果表明 ,培养 2 天时 ,可检测到木聚箱酶等少数 Rm 值较大的组份 , 到第 3 天 ,即出现各种 Rm 值
的组份 。
关. 词 塘昔酶类 ;海枣曲霉
镶菌是糖昔酶的一个重要来源 。 现在广泛
`应用的葡萄搪淀粉酶 、 纤维素酶和果胶酶等 , 都
是由霉菌产生的。 霉菌还产生很多其他的糖昔
酶 , 这些酶还没有得到应有的重视和研究 , 但其
潜在的应用价值不可低估。 为了深人探讨真菌
产生的塘昔酶 , 比较了一些霉菌产生搪昔酶的
能力。 从中挑选出木聚糖酶和 户 D 一岩藻糖昔
酶活力较高 , 蛋白酶活力低的海枣曲霉作为搪
昔酶的产生菌 , 并对其产生的搪昔酶种类 、 产酶
条件及培养过程中凝胶电泳图谱的变化进行了
初步研究 。
材 料 和 方 法
(~ ) , 种
海粤曲霉 (才 , Po igl lo P汤。 。 。 i南 ) A s 3 . 3 14 3
及其他菌株 ,均由我所八室提供。
(二 ) 主要化学试荆
对一硝基酚 基节一 D 一岩 藻 糖 昔 ( P N P一夕-
hi 。 )
、 对一硝基酚基 一。 或 户半乳糖昔 ( P N P -
0 或 户 g公) 、 对一硝基酚基一。 或 户葡萄糖昔
( P N P
一。 或 户 gl 。 ) 、 对 一硝基酚基 一“ 或 户甘
璐精昔 ( PN P 一。 或 户~ )
、 对一硝基酚基节 -
木糖昔 ( P N P一夕一 x 尹) 、 对一硝基酚基一。 或 夕-
N
一乙酞氨基半乳糖昔 ( P N P 一。 或 户 ga 1N A C )
及对一硝基酚基节 一N 一乙酞氨基葡萄糖昔 ( P N P
节一 gl e N A c ) , 均为 s i g m a 公司产品 。 狡甲基
纤维素 ( CM C ) , 中国长红塑料厂产品。 夕一 1 ,
2一葡聚糖 、 昆布多糖 ( L a r m in a r i n , 夕一 l , 3一葡聚
糖 ) 、地衣多搪 ( l i e h e` n , 夕一 1 , 3一 l , 4 一葡聚搪 )
及石脐素 ( P u s tlu a n , 夕一 l , 6 一葡聚糖 ) 为 M i l e s
公司何方先生赠。 木聚糖 , 为本所方一澄同志
从稻草中制备。
(三 ) 阵活力的浦定
1
. 以各种对 一硝基酚基 一 a 或 户糖昔作底
物时 , 反应系统 为 酶 液 50 川 , 0 . I M 柠檬酸 -
N a
:
H P o
. 缓冲液 ( p H 6 . 0 ) 1 0 0拌l , S l n M 底物
10 川 , 加燕馏水到终体积 5 0 川。 40 ℃ 反应
l , 分钟 , 加 3以 o . ZM N a : e q , 测 A栩 。 。 。 在
此条件下 , 每分钟形成 l 产m ol 对一硝基酚为 1
个酶活力单位。
2
. 以木聚糖 、 口一葡聚糖等为底物时 , 则取
适当稀释的酶溶液 0 . 5而 , 1并底物 (溶于 p H 6 . o ,
0
.
IM 柠檬酸一 N 七H Pq 缓冲液 ) .0 5 d , 40 ℃
反应 15 分钟后 , 用 s o m o即 i一 N e l s o n 法“ ,测定
产生的还原糖。 以木糖或葡萄糖为标准 , 在本
实验条件下 , 每分钟形成 l 产 m of 还原搪为 1个
酶活力单位 。
(四 ) 盘状粱丙场陇胺报胶电泳 ( P A G E )
按 D va is 法 2tJ , 凝胶浓度 7务 , 缓冲液 川
8
.
3 0
结 果 和 讨 论
(一 ) 海套曲 . 产生的箱普醉类
在对霉菌 A护 e r ig l l , A s 3 . 3 1 4 3 、 3 . 3 2 4 、
3
.
3 1 6 5及 M o n as e u s A S 3 . 8 9 7、 3 . 8 8 7、 3 . 2 1 6 0
等菌株的麦鼓培养物抽提液中的木聚搪酶 、 夕-
D一岩藻糖昔酶和蛋白酶的活力进行 初步比 较
后 , 本实验即以木聚搪酶 、 声一 D 一岩藻 糖 昔 酶
活力较高 、 蛋白酶活力较低的 击 p o ig “ 盯 A .s
3
.
3 1 4 3作为糖昔酶的产生菌。 经鉴定 , 该菌株
为海枣曲霉 (击P . P汤。。 ,油 ) 。将海枣曲霉在含 109 麦鼓 , 巧时 水的培养
基上 ,于 28 ℃ 培养 , 天 , 再用 50 耐 蒸馏水浸泡
后 , 过滤 , 撼液即为粗酶液。 按标准条件测定此
粗酶液对各种底物的水解活力。 结果表明 , 该
粗酶液含有的糖营酶种类很多 , 其中活力较高
的有木聚搪酶 、 地衣多榕酶 、 C MC酶及 户木
艳昔酶 、 户一半乳糖昔酶 、 夕一N 一乙酞 氮基葡萄
糖昔酶 、 务葡萄搪昔酶 、 夕一 D一岩藻糖昔 酶及
价半乳搪昔酶等 (表 1 )。 由于该粗酶液中的木
聚精酶 、地衣多糖酶的活性很高 , 夕一 D 一岩藻糖
昔酶的活性还高于 户半乳糖昔酶 , 因而很有深
人研究的价值 。
农 l 海弃曲 . 粗. 液对不阅雇 . 的水解活性
活力 ( u /m l) } 底 物
26
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二 , =ga ,
0
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6 1 INP -P 吞
一 g , e N , e
(二 ) 菌的培养时间与其产木聚抽酶 、拼O
一岩燕钻普曲活力的关系
将海枣曲霉按常法培养 L , 、 2 、 3 、 斗和 5
天 , 加蒸馏水抽提 , 制备粗酶液。 再按标准条件
测定木聚糖酶 、 夕一 D 一岩藻糖昔酶的活力。 结果
表明 , 该菌株培养 2天即开始大量产生木聚糖
酶 、 第 3 天达到较高值。 第 4天开始大量产生
户D 一岩藻搪昔酶 , 第 , 天达到较高值 (图 l )。
据观察 , 培养 2 天时 , 海枣曲霉的菌丝开始大量
生长 , 第 3 天整个培养基内布满菌丝 , 并开始形
成少量抱子 , 第 4 天则大里形成抱子。从海枣曲
镶的菌丝生长情况与产酶关系看 , 木聚搪酶在
菌丝生长前期即大 t 产生 , 表明该酶可能涉及
为菌丝的生长提供营养物质。 在海套曲霉菌丝
的旺盛生长期内 , 一直很少产生 户 D 一岩葬糖昔
酶 , 直到营养生长几乎停止 , 大 t 形成抱子时 ,
才可在培养基内测到较高活力的 户 D 一岩藻箱
昔酶。 这些结果可能说明 , 在麦鼓内有些多格
或糖蛋白 , 其分子内含有户 D 一岩藻糖昔键 。 随
着菌丝的生长 , 含有该键的大分子被降解 , 产生
一些小分子的 户 D 一岩藻糖昔 , 进而诱导 该 菌
产生 户 D 一岩藻糖昔酶。 也有可能是在菌的生
长期间 , 夕一 D 一岩藻艳昔酶存在于菌丝体内 , 只
是到菌丝生长后期 , 部份菌丝自溶 , 才能在培养
基中测到该酶。 由于在菌丝生长几乎停止时 ,
卜D 一岩藻糖昔酶才大 t 出现在培养基内 , 这意
味着由该酶的水解作用为菌丝的生长提供营养
物质的可能性较小 。 但粗酶液 中 户 D 一岩 藻糖
昔酶活性比 户半乳搪昔酶等许多酶的活 性 都
高 , 这又似乎表明该酶在海枣曲霉的生长 、 繁殖
过程中是起到某种作用的。
(三 ) 不同时间培养的粗魏液的报胶电泳
田谁与箱普醉讼
将上述不同时间培养的粗酶液样品进行盘
状凝胶电泳 , 然后染色 , 观察凝胶上蛋白质区带
口日、nà只收健犯如诱湘,a电O返n)获健胆称群关
1 2 3 4 5
培养时间 d( )
口 1 摘葬不周时间海枣曲镶产生的木聚艳酶
和 P一 D 一岩旅摘昔酶
0— 0 木泉抢醉 ; . 一 . p一 D 一岩藻艳阳:酶 图
2 培养不同时间的海套曲一粗醉液的盘状凝胶电泳忽
培养时间 (从左至右 )分别为 1 . 5、 2 、 3 、 4 天
的变化 。 并将同样条件下电泳后的凝 胶 切成
0., c m 宽的小段 , 放试管内搅碎 , 加燕馏水浸泡
后 , 取少 t 浸泡液测各种糖昔酶活力 , 并将剩余
的浸泡液进行电泳 , 以确定糖昔酶在凝胶上的
区带位里。 电泳结果表明 , 培养 36 小时 , 样品
中只有一条比较清楚的带。 第 2 天 , 即出现少
数 R m 较大的蛋白质区带 。 第 3 天 , 则可观察
到大盆不同 R m 值的蛋白质的成份。 第 4 天增
加到更多。 糖昔酶谱分析结果表明 , 培养 2 天
的样品中只能检测到木聚糖酶 、 c M C 酶等 R m
较大的内切型酶 。 培养到第 4 天 , 除了这些内
切酶外 , 还有大 t R ln 值较小的各种搪昔酶 :
户葡萄搪昔酶 、 夕一半乳糖昔酶 、 夕一木糖昔酶 、
地衣多糖酶等 (图 2 ) 。 由此可见 , 海枣曲霉培
养到第 3天 , 产生的细胞外蛋白质已相当多 , 同
时可测到多种搪昔酶 , 因而可以认为这些蛋白
质中的很大部分为搪昔酶。
今 考 文 欲
{: }
S o m o g了i , M . : J . B三o l . C公m , 1 9 5 :
D a v i s
,
B
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J
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: 刁. 二 N . Y . 才 c耐 .
42 7
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19 6呼.
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S c苦, 12 1 :
19 5 2
.
4 0 4一
与致病性有关的气单胞菌生化特性研究
于 泉 杨 正 时
(中国药品生物制品检定所 , 北京 )
摘共 用较系统的生理生化试验对国内不同地区人腹泻粪便标本中收集的 28 株气单胞菌进 行 了
研究 , 并对气单胞菌属内不同种的细菌生化特性及鉴别试验进行了比较 。 28 株菌属于气单胞菌四个不
同的种 ,其中膝鼠气单胞菌 16 株 ( , 7 . 1% ) , 亲水气单胞菌 ` 株 ( 21 . 4% ) ,寡源气单胞菌 , 株 (l 7 . , % ) ,
杀娃气单胞菌 l 株 ( 3飞% o)
级工润 气单胞菌 ;生化特性
气单胞菌 (汉er o m o a, ) 是近年来不断引起
医学界注意的革兰氏阴性发酵细菌之一。 普遍
存在于水生环境 , 经常从土坡 、 食物和多种动物
中分离到 。 过去一直认为是鱼类 、 爬行动物和
两栖类的重要病原菌 , 近来的材料证明气单胞
菌可引起人的胃肠炎和食物中毒 , 是某些疾病
息者的条件致病菌即 .3] 。 有关气单胞菌系统生
化特性的研究 , 国内尚未报道 , 本文对不同地区
来源的 28 株气单胞菌生化特性进行了研究 , 并
对鉴别气单胞菌属内不同种的生化试验进行了
探讨。
材料和 方 法
(一 ) 菌种
分别由安徽 、 山东 、 黑龙江和北京等地人腹
泻粪便标本 中收集的 28 株气单胞菌 。
(二 ) 分离及培并
所有分离物经普通营养琼脂 平板分离纯
化 , 分别接种 5 5 琼脂 、 麦康凯琼脂 、 T C B S 琼
脂和 5拓羊血琼脂平板。 所有试 验 均 在 30 ℃
培养进行。
(三 ) 生化试驻
1
. 糖类代谢 : 葡萄糖和甘璐醉产酸产气试
验 ;乳糖 、 蔗糖 、 阿拉伯糖 、 木胶糖 、 鼠李糖 、 麦芽
糖 、 覃糖 、 棉子糖 、果糖 、 菊糖 、半乳糖 、 福寿草
醇 、 卫矛醇 、 山梨醇 、 肌醇和水杨素产酸试验 ;七
叶灵水解 , 夕一半乳糖昔酶产生 ( O N PG )和 粘液
酸利用 。
2
. 氮化物代谢 : 尿素酶 、 赖氨酸脱叛酶 、 鸟
氨酸脱竣酶 、 精氨酸脱氢酶和苯丙氨酸脱氨酶
产生试验 ; 叫噪产生试验 、 三糖铁产 H声 和硝
酸盐还原试验。