全 文 ：第23卷第3期
2013年9月
临沧师范高等专科学校学报
JournalofLincangTeachers’Colleg
Vol.23No.3
Sep.2013
* 收稿日期：2013-04-09
作者简介：1.黄飞燕(1984- )，男，湖南郴州人，临沧师范高等专科学校人事处教师，主要从事天然药物化
学研究。2.吴健君(1987- )，女，彝族，云南临沧人，镇康县忙丙中学中教二级教师，主要从事化学教育研究。
3.唐荣平(1971- )，男，云南曲靖人，临沧师范高等专科学校数理系讲师，主要从事药用植物可持续利用研究。
4.张应红(1966- )，男，白族，云南凤庆人，临沧师范高等专科学校数理系副教授，主要从事化学教育研究。
旱芹 （Apium graveolens L.val.dulce.DC.），
属伞形花科一年生或两年生草本植物，异名药
芹、哪化姆（彝族名）、等里俄（傈僳族名），
有强烈的香气，茎直立、无毛有棱角。基生叶
的柄下部有阔膜质的叶鞘，叶片通常呈三深裂
或三全裂，裂片近菱形，边缘有锯齿，叶脉两
面隆起。广泛分布于两湖、云贵川等地[1]。大
量研究表明芹菜素具有平肝清热、祛风利湿的
功效。用于治疗高血压、眩晕头痛、面红耳
赤、血淋痛肿等疾病。以芹菜提取出的提取物
为原料制成的药物具有降压、安神，降血糖、
血脂，软化血管、增强免疫力等功效，其中芹
菜素的作用有抗肿瘤、抗炎、抗焦虑以及降血
压等作用[2～6]。王克勤、罗军武[7]等人采用高效
液相色谱法对不同地区、不同部位的芹菜进行
了含量测定，结果显示不同地区含量有差别，
同时芹菜叶部分比茎部分含量高。
1 材料、仪器与试剂
供试品为昆明产旱芹，市售旱芹。市售鲜
旱芹经去杂、清洗后，切碎，备用。对照品：
芹菜素（Apigenin），纯度98.8%，由昆明卡麦
生物科技有限公司提供。实验仪器为 Agi-
lent1200高效液相色谱仪，配置为自动进样器、
高压四元梯度泵、DAD 检测器、Agilent1200
色谱工作站；kromasil C18(5um，200mm×
4.6mm)色谱柱；AS20500A 超声波清洗器；超
纯水仪。流动相用甲醇为色谱纯 （美国 Tedia
公司）， 醋酸钠固体，其他试剂均为分析纯，
水为超纯水。
2 方法及结果
2.1 提取方法
根据旱芹中主要化学成分的性质，通过以
影响芹菜素提取的乙醇浓度、时间、提取次数
和料液比4个因素为自变量，以提取液中芹菜
RP-HPLC法测定旱芹中芹菜素的含量
黄飞燕 1 吴健君 2 唐荣平 1 张应红 1
（1.临沧师范高等专科学校，云南 临沧 677000；
2.镇康县忙丙中学，云南 临沧 677701）
摘 要：本实验建立一种测定旱芹中芹菜素含量的高效液相色谱法。采用反相高效液相色谱法，色
谱条件为：kromasil C18柱(5um，200mm×4.6mm)，流动相：醋酸 - 醋酸钠水溶液(0.lmol/L，pH=5.0)；
水：甲醇＝40:60（体积比)，体积流量1.0ml/min，检测波长337nm，柱温40℃，进样量：20ul。结果表明
在1.0-40.0ug／ml范围内呈良好的线性关系(R=0.9953)，芹菜素平均回收率101.7％，(RSD=1.67％)。该方
法操作简便、快速、分离度，灵敏度高，适用于芹菜素含量的测定。
关键词：旱芹；芹菜素；RP-HPLC；含量测定
136
峰号 保留时间 峰面积 面积% 理论塔板数 拖尾因子 分离度
1 1.821 130612 8.914 660.824 0.885 0
2 2.3 18754 1.28 341.901 0 1.227
3 2.715 43825 2.991 833.125 0 0.949
4 3.133 740553 50.54 1371.731 2.095 1.171
5 3.971 2205 0.15 2634.359 2.112 2.587
6 8.277 109365 7.464 294.053 0 3.844
素含量为响应值，作4因素3水平的响应面分
析试验[8]。确定旱芹中提取芹菜素在乙醇浓度
为70%、料液比为1：4的条件下提取3小时
回流提取2次为最佳提取工艺。
2.2 色谱条件
采用 kromasil C18柱(5um，200mm×4.6mm)；
流动相：醋酸-醋酸钠水溶液(0.lmol/L，pH=5.
0)；水：甲醇=40:60（体积比)；体积流量 1.0
ml/ min，检测波长337 nm，柱温40℃。进样
量：20ul。采用此色谱条件进样分析，结果见
图2、图3及表1。由图2、3和表1分析结果
可知，采用上述色谱条件，主峰的理论塔板数
大于5 000，且与相邻杂质的分离度大于2.5，
主峰对称性好。因此，选用该测定方法完全能
够测定旱芹提取物中芹菜素的含量。
表1 旱芹提取物供试品溶液HPLC图谱分析
图1 芹菜素对照品溶液HPLC图谱
E:\YOY\2008040201-芹菜素-3.lcd
检测器A通道1
mV
min
图2 旱芹提取物供试品溶液HPLC图谱
检测器A通道1
E:\YOY\2008040301-芹菜素-香芹菜2.lcd
mV
min
137
2.3 标准曲线的绘制
称取芹菜素对照品约10.0mg，至100ml容
量瓶中，加乙醇注入稀释成溶液，摇匀。作为
储备液，精密量取储备液稀释并制成浓度(C)为
2.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0ug/ml，按上
述色谱条件，用 HPLC 法测定，记录峰面积
(A)，以C(溶液浓度)和相对应的A(峰面积)作线
性回归，结果显示，芹菜素标准品在浓度范围
1.0－40.0ug/ml 内呈现良好的线性关系，线性
回归方程为：A＝122821×C-126711，R＝
0.9953。
2.4 精密度实验
取对照品溶液20ul注入HPLC，连续进样
6次。测得芹菜素色谱峰面积，RSD为0.51%，
表明仪器的精密度较好。
2.5 溶液稳定性实验
取精密度项下的对照品溶液，在室温下放
置，在0，2，4，8，12，18，24h时分别取样
进样测定，测得芹菜素色谱峰面积，RSD值为
0.84%，表明芹菜素对照品溶液在24h内稳定。
2.6 重复性试验
精确称取3份10.000g旱芹，按“2.1”提
取方法操作，在“2.2”色谱条件下测定芹菜素
的含量，计算得 RSD 分别为 1.8%、1.4%、
2.2%(n＝3)，表明方法重复性良好。
2.7 回收试验
精确称取 3 份旱芹各 10.000g，精确量取
各对照品溶液2.00mL，按“2.2”色谱条件下，
测得芹菜素的平均回收率分别为 101.1%、
100.8%、103.2%；RSD 分别为 1.1%、0.8%、
3.1%(n=3)。
2.8 样品测定
精密称取芹菜素对照品适量，用乙醇制成
浓度约为20ug/ml的对照品溶液，按“2.2”色
谱条件进行分析，样品色谱图与标准品色谱图
比较指认（图1、图2） 后，精密量取20ul注
入 HPLC，调节检测器灵敏度，记录峰面积。
另精密称取旱芹提取物适量，用乙醇制成约含
芹菜素（20ug/ml） 的供试品溶液，量取上述溶
液各20ul注入HPLC，记录色谱图峰面积，按
外标法以峰面积计算，结果见表2，由表2结
果得芹菜素的百分含量分别为1.41％（n＝3）。
峰号 保留时间 峰面积 面积% 理论塔板数 拖尾因子 分离度
7（芹菜素） 9.386 355699 24.28 7379.042 0 3.54
8 10.057 47840 3.265 1534.737 0 3.684
9 10.581 6843 0.467 490.211 0 0.628
10 11 2561 0.175 324.516 0 0.192
11 11.492 1057 0.072 6028.623 0 0.324
12 13.575 2213 0.151 5392.642 0 3.129
13 13.746 1774 0.121 4568.395 0 0.22
14 14.067 1913 0.131 1792.877 0 0.300
总计 100
138
表2 旱芹提取物供试品溶液芹菜素含量分析
称样量（mg） 稀释倍数 峰面积 含量（%）
对照品
10
500
386521
0.988
380011
10.2
397552
392777
供试品1#
208.1
100
477640
1.18
479764
200.5
460149
461304
供试品2#
200.5
100
435227
1.13
438929
200.7
454719
456514
供试品3#
200.8
100
421709
1.08
425448
208.3
434549
439790
供试品4#
217.5
100
531635
1.29
532725
204
528636
527391
供试品5#
200.6
100
517283
1.3
515604
198.4
494527
493416
供试品6#
209.2
100
571331
1.41
570248
200.2
559347
557709
供试品7#
200.5
100
355622
0.94
358113
205.5
386360
385675
供试品8#
203.1
100
409925
1.04
405120
204.1
415622
418113
供试品9#
200.6
100
426360
1.07
425675
201.3
426592
436325
139
3 讨论
3.1 检测波长的选择
称取干燥至恒重的芹菜素对照品10.0mg，
加少量乙醇溶解，转移至100ml容量瓶中，定
容，于200-400nm的波长范围内进行紫外光谱
扫描。芹菜素在212、269、337nm处有最大紫
外吸收。为减少干扰，选择 337nm 为测定波
长。
3.2 方法学考察
本实验经方法学考察，在色谱条件为：
kromasil C18柱(5um，200mm×4.6mm)；流动
相：醋酸-醋酸钠水溶液(0.lmol/L，pH＝5.0)；
水：甲醇 =40:60（体积比)；体积流量 1.0
ml/min，检测波长337nm，柱温40℃。进样量
20ul的情况下具有良好的专属性、精密度、稳
定性、重复性和回收率，且在1.0-40.0ug/ml内
呈现出良好的线性关系。因此，我们采用该方
法对旱芹中芹菜素的含量进行测定。
3.3 流动相的选择
实验按“2.2”色谱条件进行时发现在滴加
醋酸钠水溶液(0.lmol/L，pH＝5.0)的情况下，芹
菜素能够达到较好的基线分离且不拖尾，故选
择醋酸 - 醋酸钠水溶液(0.lmol/L，pH＝5.0)；
水：甲醇＝40:60（体积比)作流动相。
3.4 本试验采用4因素3水平的响应面正
交试验，以提取物中芹菜素的含量为指标，主
要以乙醇为溶剂，在考察了溶剂浓度、料液
比、提取时间及提取次数等因素的条件下确定
旱芹中提取芹菜素的最佳工艺为乙醇浓度为
70%、料液比为 1:4，提取时间 3 小时，回流
提取 2 次。经测定旱芹中芹菜素的含量为
1.41％。该试验建立的反相高效液相色谱法具
有简便、结果准确、可靠等优点，芹菜素的含
量高于王克勤、罗军武测定的含量，这说明本
实验芹菜素提取工艺较文献的提取方法有较大
的优化，同时也可能因不同地域的旱芹在成分
含量上是有差别的。这对芹菜素的提取工艺研
究、药材质量的评价以及药物资源充分利用有
一定的参考意义。
参考文献：
[1]姚新生.天然药物化学[M].北京：人民卫生出版社，
2001.
[2]Dan E Pratt.Lipid Antioxidants in Plant Tissue[J[.Food
Sci，1965，30：737～741.
[3]李小洁，赵保路，侯京武等.沙棘总黄酮对活性氧自
由基的清除作用[J].中国药理学通报，1990，6(2)：35～
39.
[4]Rafat H S. Hodroyxl Radical Scavenging Activity of
Flavonoids [J]. Phytochemisty，1987，26：2489～2491.
[5]陈建初，董绍华，叶兴亁等.芹菜黄酮及其在主要制
汁过程中的变化[J].浙江农业大学学报，1998，24(3)：
279～282.
[6]孙斌，瞿伟菁，张晓玲.芹菜素的药理作用研究进展
[J].中药材，2004，27(7)：531～534.
[7]王克勤，罗军武，陈静萍等.高效液相色谱法测定芹
菜中芹菜素的含量[J].食品与机械，2009，25(2)：74～
77.
[8]毕春慧，沈莲清.呼应面分析法优化富丸多糖提取工
艺的研究[J].食品科技，2010，35(8)：218～221.
RP-HPLC Measurement to Determine the Quantity of the Celery Element
HUANG Feiyan
(Lincang Teachers’ Coll ge, Lincang 677000 China)
Abstract:A testing method of reversed high performance liquid chromatography( HPLC) was
established to determine the quantity of celery. The chromatogram requires kromasil C18colum
(5um，200mm×4.6mm); mobile phase requires (0.lmol/L，pH=5.0) of sodium acetate and its solu-
tion; Water: methanol equals 40:60, volume 1.0 ml/min; testing wavelength 337nm, and temperature
40℃ with the input quantity of 20ul. The result shows that in the range of 1.0-40.0ug／ml, the
linear relation appears R=0.9953, and the average celery element recycle rate is 101.7％ (RSD=1．
67％). This method is simple and quick with high rate of separation and sensitivity, and it is suit-
able for the determination of the quantity of celery element.
Key Words:Celery; Element; Testing
140