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薏苡茎甲醇提取物的抗氧化性研究



全 文 :第 34 卷第 1 期
2015 年 2 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol. 34 No. 1
Feb. 2015
收稿日期:2014 - 05 - 17
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81360684) ;广西自然科学基金资助项目(2011GXNSFA018046) ;广西中医药科技专项
资助课题(GZKZ10 - 128) ;广西教育厅课题(201106LX425) ;广西中医药管理局课题(gzzc1047) ;广西医学科学实验中心开放
基金专项资助项目(KFJJ2011 - 04)。
作者简介:卢善善,女,现就读于右江民族医学院护理学专业。研究方向:天然产物化学、药物化学。E-mail:18777615250@
163. com
* 通讯作者:黄锁义,男,教授,硕士研究生导师。研究方向:天然产物化学、药物化学、食品卫生、中草药与植物化学。E-mail:
huangsuoyi@ 163. com
doi:10. 3969 / j. issn. 1006 - 9690. 2015. 01. 004
薏苡茎甲醇提取物的抗氧化性研究
卢善善1,黄挺章2,李远辉2,黄 莹2,马忠丽2,张照平1,黄锁义3*
(1.右江民族医学院 护理学院,广西 百色 533000;2.右江民族医学院 临床学院,广西 百色 533000;
3.右江民族医学院 药学院,广西 百色 533000)
摘 要 目的:本文研究薏苡茎甲醇提取物的抗氧化作用。方法:以甲醇为溶剂提取;采用比色法测定薏苡茎甲醇
提取物对 DPPH· 、O -2 ·两种自由基的清除作用以及还原 Fe
3 +的能力。结果:薏苡茎甲醇提取物对两种自由基均
有明显的清除作用;对 Fe3 +也具有较强的还原能力。结论:在一定范围内浓度与清除率存在明显的量效关系,当提
取物浓度增加时,对 DPPH·、O -2 ·两种自由基的清除作用随着增强;还原 Fe
3 +能力也随薏苡茎提取物的浓度增加
而增强。
关键词 薏苡茎;甲醇提取物;抗氧化性
中图分类号:R282. 71 文献标识码:A 文章编号:1006 - 9690(2015)01 - 0012 - 03
Study on Antioxidant Effect of the Extracts of Methanol from
Stem of Coix lachryma-jobi L.
Lu Shanshan1,Huang Tingzhang2,Li Yuanhui2,Huang Ying2,
Ma Zhongli2,Zhang Zhaoping1,Huang Suoyi3*
(1. School of Nursing;2. School of Clinical Medicine;3. School of Pharmacy,Youjiang Medical Universi-
ty for Nationalities,Baise 533000,China)
Abstract Objective:Study on antioxidant effect of the extracts of methanol from the stem of Coix lachry-
ma-jobi L. Methods:The stem of Coix lachryma-jobi L. was extracted by methanol soaking. Clearance abil-
ity of the extracts of methanol on DPPH· and O -2 · and the reduction of Fe
3 + ability were measured
with the spectrophotometry. Results:Extracts of stem of Coix lachryma-jobi L. had significant scavenging
effect to two kinds of radicals,moreover it had strong ability of reduction to Fe3 + . Conclusion:In a certain
rang ,there was an obvious dose-effect relationship between concentration and clearance rate. When the
concentration increases,the two kinds of free radical clearance rate and the reduction of Fe3 + ability in-
creased.
Key words Stem of Coix lachryma-jobi L.;extracts of methanol;antioxidant activity
薏苡(Coix lachryma-jobi L.)为禾本科(Gra-
mineae)薏苡属(Coix L.)草本植物,为常用中药,味
甘淡,性微寒,具有健脾补肺、清热利湿的功效,素有
“滋补保健之王”的美誉,《本草纲目》中称其乃上品
养心药[1],流行病学研究显示,中国西南地区癌症
发病率低可能与薏苡仁的食用有关[2],20 世纪 60
年代以来,国内外对薏苡的化学成分及药理活性开
展了多方面研究,并得到了多种化学成分[3]。近年
来,中外学者从薏苡中分到的化合物类型包括:脂肪
酸及脂、酚、生物碱类化合物、多糖类化合物等[3]。
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第 1 期 卢善善,等:薏苡茎甲醇提取物的抗氧化性研究
实验结果初步表明,广西薏苡茎可能含有多糖、黄
酮、有机酸等化学成分[5]。薏苡仁谷壳(Adlay hull)
的甲醇提取物显示有 DPPH 自由基清除能力,且在
该生物活性的跟踪下经过分离纯化,在正丁醇萃取
的部分得到 6 种化合物,这些化合物均显示出较强
的抗氧化活性[2]。薏苡茎化学成分的研究成果为
薏苡茎的抗氧化性研究提供了一定的依据,在中药
药理中发挥重要作用。目前以甲醇为溶剂来提取薏
苡茎未曾看到过,为了充分开发利用薏苡这种天然
植物,探讨及研究薏苡茎抗氧化活性研究有重要指
导意义。本实验旨在研究薏苡茎甲醇提取物的抗氧
化活性,为薏苡茎的开发利用提供参考依据。
1 仪器与材料
722N可见分光光度计(上海精科) ;ZKJ - 1002
循环水式真空抽气泵(上海嘉鹏科技有限公司) ;旋
转蒸发器 RE - 52AA(上海安亭实验仪器有限公
司) ;HH - SA数显恒温水浴锅(上海上登实验设备
有限公司) ;DPPH (美国 Sigma 公司) ;薏苡茎采自
广西百色市西林县。
2 方法与结果
2. 1 薏苡茎甲醇提取物的提取
以烘干的薏苡茎,粉碎至粉末。称取薏苡茎粉
末 100 g,加甲醇浸泡 1 h,回流提取 2 h,抽滤。用旋
转蒸发仪将滤液减压回收甲醇至滤液呈稠状物为
止,置于蒸发皿中蒸干。称取 0. 6 g 样品,用甲醇溶
解并定容至 100 mL,得样品溶液。
2. 2 薏苡茎甲醇提取物抗氧化活性的测定
2. 2. 1 清除 DPPH自由基能力
DPPH是一种稳定的自由基,与抗氧化剂发生
反应,提供 H被还原,颜色发生变化,由深紫色变为
淡黄色,可以用紫外可见分光度法定量测定。取
0. 5 mL 新配置的 DPPH 溶液[c(DPPH)= 6 × 10 -4
mol /L]置于 10 mL的具塞比色管中,然后加入同体
积不同浓度的样品溶液,无水乙醇定容至 5 mL,室
温暗光下反应 30 min,以无水乙醇调零,在 517 nm
处测定其吸光度 A。以高浓度逐渐稀释的方式检测
不同浓度样品对自由基的清除率,以自由基清除率
为 50%时样品的浓度(IC50)来衡量样品对自由基的
清除能力[9]。IC50越小,表明样品清除自由基的能
力越强。其清除率计算公式:
清除率(%)= [(A1 - A2)/A1]× 100%
其中 A1 为反应时间 t = 0 min 时空白吸光度,
A2 为反应时间 t = 30 min时的吸光度。
取不同浓度的样品溶液置于比色管中,加无水
乙醇定容至 5 mL,分别测其对 DPPH自由基清除的
作用,由图 1 可以看出,随着薏苡茎浓度的增加,对
DPPH的清除作用增大,自由基清除率为 51. 61%时
样品的浓度(IC50)为 0. 3 mg /L,浓度较小,表明薏苡
茎多糖清除 DPPH自由基的能力较显著。
图 1 薏苡茎提取物对 DPPH自由基清除率
2. 2. 2 清除超氧自由基能力
采用邻苯三酚自氧化法[9]进行测定。具体方
法如下:取 0. 5 mol /L、pH 8. 2 的 Tris - HCl 缓冲液
4. 0 mL于干燥具塞比色管中,置于 25 ℃水浴中预
热 20 min,分别加入不同浓度的待测品 0. 2 mL,后
均加入 2. 5 mmol /L 邻苯三酚(由 10 mmol /L HCl
制)0. 8 mL,混匀后 25 ℃水浴中准确反应 4 min,立
即加入 10 mmol /L HCl 2 滴终止反应,蒸馏水调零,
在 320 nm处测定吸光度 A。其清除率计算公式:
清除率(%)=[1 -(A1 - A2)/A0]× 100%
其中 A0:为加邻苯三酚但不加样品时的吸光
度;A1:为加样品和邻苯三酚时的吸光度;A2:为加
样品不加邻苯三酚时的吸光度。
从图 2 中可以看出,薏苡茎提取液对 O -2 ·有一
定的清除作用,随着薏苡茎提取液浓度的增加,对
O -2 ·的清除能力也增强,说明当薏苡茎的浓度增加
时,其清除率也增大。
图 2 薏苡茎提取物对超氧自由基清除率
2. 2. 3 还原 Fe3 +能力
采用普鲁士兰法[10]测定样品还原 Fe3 + 能力。
在系列 10 mL具塞比色管中依次加入不同浓度的样
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 34 卷
品溶液 2. 5 mL,2. 5 mL磷酸盐缓冲液[c(磷酸盐缓
液)= 0. 2 mol /L pH 6. 6]和 2. 5 mL 铁氰化钾
(1%) ,混匀后置于 50 ℃水浴中反应 20 min,然后
加入 2. 5 mL 三氯乙酸(10%) ,混匀后将溶液浑浊
离心(3000 r /min)10 min,取上清液 2. 5 mL,加入
2. 5 mL蒸馏水和 0. 5 mL 三氯化铁(0. 1%)溶液,混
匀,以试剂空白作参比,在 700 nm处测定吸光度值,
吸光度值增加表明还原能力增强。
由表 1 可以看出,随着提取物浓度增大,其吸光
度值增加,对 Fe3 +还原能力增强。
表 1 还原 Fe3 +能力吸光度值
质量浓度(mg /mL) 0. 00 0. 6 1. 2 1. 8 2. 4 3. 0
吸光度值 A 0. 00 0. 651 0. 867 1. 126 1. 244 1. 392
3 结 论
本实验研究表明,薏苡茎提取物对 DPPH· 、
O -2 ·均具有较好的清除作用,而且对自由基的清除
作用随着提取液浓度的增加而增强,对金属 Fe3 +还
原能力随薏苡茎提取液的浓度增加而增强。因此,
薏苡茎甲醇提取液具有较强的抗氧化活性。
随着人们对健康要求的提高,食品添加剂的安
全问题成为整个社会的关注热点,开发安全有效的
天然抗氧化剂是大势所趋。植物是一种很有潜力的
抗氧化剂资源,含有很多种类的抗氧化成分。植物
抗氧化剂在食品、饲料、医疗保健中都有应用。充分
利用我国丰富的植物资源,从中找出安全可靠的高
效天然抗氧化剂是众望所归[6]。
近年来,国内外对薏苡的开发利用已逐渐加强,
其在食品保健方面已引起注意[5,7]。植物类的中草
药因其具有药源丰富、取材方便、节省费用、加工简
便、毒副作用小等优点,而引起越来越多人对其化合
物进行研究和开发利用[4]。薏苡作为食用兼药用
的栽培作物,具备了较全面的营养保健功能[3]。实
验研究证明薏苡各部位均含有丰富的营养成分[8],
随着对薏苡化学成分及药理作用的深入研究及我国
膳食结构由小康型向营养保健型的转变,薏苡将会
在药物及保健食品方面有着广阔研究、开发、应用前
景[3]。薏苡茎作为薏苡中重要的一部分,同样有着
可观的研究前景。
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