全 文 ：1
一
99 0N 0 1国 外 林 业 9 1
北美乔松子叶 `胚轴外植体的植株再生
作者 : K:、 ra n Ka u l
译者 : 李 伟
校 者: 吴克贤
不户自 《 I , 1: n 于 C 11 R p ( 、 r r s 》 1 9 8 7 ( 6 ) 5~ 7
国际 _ _匕对林产品的需求 , 在尹 }、 来的 几十
年内将会明显地增加 。 面对 这一需要 , 用较
板的:叶 习 , 改 良和加快扮木速生 , 是当务之
急 。 几 丫萦殖是确保具有特尼性状的林木群
体雄方 一改的生产方式 。 沮 汾 , 应 闰污统的
无注紫班方法 , 如汕条生叙并长 戊优树 , 通
常是很困难的或是不可能约 。 组织培养作为
无性繁殖的一种 技 术 已 被确汰 。 组织培乔
技术对丁树木改 良应用之一是从一粒优 良种
子加倍繁殖生产 。 对 尹某些行种 , 包括一些
计 , ;泥树 冲小植株的生产程序 已得习发展 。 但
九 , 对 于北美乔松的繁殖 , 日前尚无适用的
方法 。 本文描述了北美乔公种苗井流体试告
内生产小植袜的方法 。
材材和方法
把成熟的南美乔松种子用派湿的纱 巾包
万 , 浸泡在 自来水中 16 一 1 8小时 , 然后置于
S C 条件下黑暗深存 5 一 8 周 。 将低温处理
过的种子进行表面消毒 , 用灭过菌的重蒸馏
水冲洗 4 次 , 播种到 S o n l :二 e r 不门C a l d a s 的
发育培养基上 。 种子在 2 6 士 1 ℃条斗下及持
续的 4 0 一 5 0 0协w c/ m “ 日光灯照叭下萌发 。
生长 1 ~ 2 周的种苗供外植体取村 。 外植体
由胚轴顶端 2 ~ 3 毫米长并附着一轮修剪成
原长一半的子叶所组成 。 这样的外位体属于
子叶 /胚轴外植体 。 将外植体接种 在补加生
长激素的改良M S培养基或 L i t v a y 等的培养
基上 , 进行 苗的诱导或抽茎 。 在文中挑述的
培养基均采用分析纯试剂制备 , O。 8%琼 脂
固化 , 在 12 1℃ 、 1 公斤 /厘米 2 下热压灭菌
1 5分钟 。 灭菌前将所有培养基的 P H 直月至
5
。
8
。 所有实验至少重复两次 。
实验结果
小植株的发 一育分 4 步完戊 : 即 苗 的 诱
导 、 苗的生长 、 根的诱导和根的生 一长。
1
、 苗的诱导
外植体接种在补加 2 毫克 /升 B A 和 0 . 2
屯克 /升 N A A的 M S 培 养 基 ( C 培养 韭 )
上 , 并在 2 6士 ] ℃的光照条件下培养 , 从子
叶八玉轴外植体上诱导苗 。 外植体培 养 两周
后 , 胚轴的一部分开始膨胀 , 并在基端形成
一些愈伤组织 , 此时尚 未 见 到不定苗的形
成 。 从培养基中除去 N A A 后 , 可诱导出少
量的苗 , 但仅在 2 ~ 3 周的诱导期内 , 才能
获得最佳结果 。 如果延长 C培养基上的培养
时间 5 或 6 周 , 会导致胚轴的愈伤组织化 ,
并降低苗形成的数量 。 在 C培养基上继续谙
养 , 会引起大量愈伤组织化 , 并且苗 一也不能
生长 。 苗的诱导是一个基本的步骤 。 如果将
子砚一 /胚轴外植体直接接种在苗生 长 培养基
上 , 同样 , 也不能形成不定苗 。
2
、 苗的生长
为使苗生长 , 须将子叶 /胚轴外 植 体从
{宣诱导培养基转移到不含任何植物生长激素
的 L M培养基上 。 苗生长所需光照温度条件
与苗诱导时相同 。 在 L M培养基上 约 1 周之
改 良C : 。 s s h o f f和 D 。 了 基 本培井基 上, :龙 后 , 下定茵即变得肉眼可见 。 以后 的 6 一 8
成根的诱 导和伸长 , 将小杭株 不】月发育对期
f自堵养物 , 在 1 7 C或 2 6 C条份下温 言。 全部
周期间 , 新不定苗继续 下断
养基上诱导 2 周 , 随后转到
地形成 。 在 C培
L M谙芥绍上 ,
国 外 林 业 1息g C 纯 1
获 得乔 木树 种 二 倍 体花 粉 的 方 法
作者 : O.C .人J a二 :二 a H等
译者 :王 岳
本文 涪i 一{ 《} :eo e 。川 :e 》 9 9 8 1.( 工) : 9 1~ 25
提高林分产妞的有坟方法之一就是杂种
优势的选择 , 阔叶树种的杂种优势常体现在
三倍体上 , 例如 , 呀然产生或人工获得的山
杨 、 杨树 、 赤公和谕封 、 栋树 、 桦树 、 桑树
的三倍体 , 共 一育生 一冷决 、 叶大 、 对病害有很
强抗性的特点 。 在针一叶 1封选种中也得到预期
的数据 , 在丹资 , 人工合成的生长较快的落
叶松杂种的异三清沐已达到成龄状态 , A ·
K
·
y : o p : 二 o n 等人研究的欧洲松 和 克 里
木松混倍 体 ( 2 一 迄倍 体 ) , 在 30 年林龄
时 , 己具有松脂 产址高和生命力强的特点 。
虽然三信体和混信休的实用价值 已被证
实 , 但是 , l地子在自然条件下这种形式的发
生是较稀少万几俱然的 , 且缺少人工获得它们
的有效方法 , 致使在选神中使用它们受到限
制 。 三倍体的发主与参加受粉的正常单倍体
及退 化二倍体 ( Z n ) 配子有关 , 剩下的二
倍体其自然发生频率在 自然界 中 已 相 当低
了 , 书廷据我们的资料 , 在杨树各种类中 , 其
兰友量为 0 . 2 2 ~ 7 。 9 8% 。
M
o k和 兀 e : o k p u h统计· , 平均 7 5乡石的亲
本基因能通过二 f言体配子传给后代 , 这使二
倍体配子用于选种有了很穴的阅`能性 。
为了获得人工乔术讨种二倍体花粉 , 而
采用影响它们父本生殖器官的方 法 如 用 秋
水仙素处理欧洲甜 樱 桃 、 刺 李 、 杨 树、 松
树 ; 用笨骄 乙烷处理茶蕉子 ; 月l 低 温 或 高
温 川 J温箱 ) 处理松树、 杨树 、 落叶松 、 桑
树 ; 用电离幅射和化学超诱变 处理苹果等的
研究方法可谓众所周知 , 但这些作法的缺点
是二倍体花粉粒产量不多 (单位的 ) , 所获
得二倍体花粉粒即缺少一系 列 的 细 胞学证
1 0 %的子叶 /几抽 外植 体上均可 形 成 不 定
苗 。 苗诱导期问 , 不定苗是由子叶腋处形成
的芽长成的 。 若将握轴和子叶的片段在 C培
养基培养 2 周 , 然后转列 L M 培养基上 , 则
没有芽的形戍及苗的生长 。 每个培养物上的
不定苗效量变动于 8 一 21 之间 , 平均每个培
养物 1 4 . 7株苗 。
这些苗叮以很容易地从苗丛中拔出 。 它
们的大小变动于 3 一 7 毫米之间 。 如果从诱
导培养基中去掉 N A A , 每个培养物上的不
定苗数目会明显降低到 1 一 注株 。 如呆不受
一点损伤 , 要彼此分开这些苗十分费力 。 鉴
于本研究使用的手},子是从开放授粉的树木收
集而来 , 山丁: 遗传荃因不 同 , 所 得不定苗之
间出现一些变异是 }妇龙的 。
3
、 根的诱导
从 L M培养基得的苗转到含有 10 毫克 /升
肌醇 , 1 %蔗糖 , 1 %琼脂和 0 . 5毫克 / 升
N A A 的1 / G D培养基上 , 在苗诱导和发育相
同的光照温度条件下培养两周 。
4
、 根的生长
两周后 , 将苗从诱导根的培养基转到根
生长的培养墓中 , 后者与诱导恨的培养基相
似 , 但不含任何生长激素 。 培养钧在 1 50 一 2 。。
件W /厘 米 2 封光灯照 明 (每天 1 6小时 )及 17 士
1 ℃下温育 。 转到很生长培养基 1 周内 , 一
些培养物即生出 1 一 2 条根 。 5 周内 , 80 %
的培养物出现了根的 z匕长 。 根的诱导和生 一长
在欧洲落叶松和班克松试管不定苗上也获得
J
’
)戊功 , 使用的是 1一分近 似的堵养丛组 合。