全 文 ：图 3　微量元素缺乏对愈伤组织生物碱含量的影响
4　讨论
培养基的组成是植物生长的一个决定因素 ,不同植物对培养
基有不同的要求 , 并对培养基中的不同成分有不同的敏感性。本
试验发现 , 当 MS培养基中 NO-
3
-N的比例增高时有利于彭泽贝
母愈伤组织中生物碱的积累。
微量元素在植物细胞生长中起着不可替代的作用 ,它们大多
是酶的组成成分或活化剂 , 缺少其中一种就会代谢受阻 , 但是植
物对其的需要量甚微 ,稍多就发生毒害。本文研究发现当培养基
中缺 B、缺 Zn、缺 Cu、缺 Mo、缺 Co、缺 Mn、缺 Fe、缺 I时均有利于
彭泽贝母愈伤组织的生长 ,但是缺 Cu、缺 I时不利于生物碱的积
累 , 与近几年研究的植物逆境有利于中药有效成分的积累相一
致 [ 5] 。
参考文献:
[ 1 ] 　张寿文 ,刘贤旺 , 黄慧莲 ,等.不同激素组合对彭泽贝母愈伤组织
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[ 5 ] 　黄璐琦 ,郭兰萍.环境胁迫下次生代谢产物的积累及道地药材的形
成 [ J] .中国中药杂志 , 2007, 32(4):277.
收稿日期:2008-12-09;　修订日期:2008-04-08
基金项目:国家科技支撑计划资助项目(No.2006BAD27B04)
作者简介:李艳敏(1983-), 女(汉族),河北沧州人 , 现为华南理工大
学在读硕士研究生 ,学士学位 , 主要从事天然产物化学和生物分离技
术方面的研究工作.
＊通讯作者简介:姜建国(1963-), 男(汉族),湖北黄石人 , 现任华南理工
大学轻工与食品学院教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物工程 /生物化学
与分子生物学研究工作.
了哥王中芫花素含量的高效液相色谱法测定
李艳敏 , 姜建国＊ , 杨　丽
(华南理工大学轻工与食品学院 ,广东 广州　510640)
摘要:目的 建立了哥王中芫花素含量测定方法 , 为了哥王的质量评价提供依据。方法 采用 HPLC法测定其芫花素的含
量 , 色谱柱:AlltechODS(4.6mm ×250mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.2 %磷酸水溶液 (体积比 55∶45);流速为 1.0 ml
· min-1;检测波长 346nm,柱温为 35℃;进样量 10μl。结果 芫花素在 0.24 ～ 2.40μg范围内与峰面积呈良好的线性关
系 , 其回归方程为 Y=84 069X+34.648, r=0.999 8。平均回收率为 100.57%, RSD=1.76%(n=5)。结论 该法具有操
作简便准确 , 回收率好 ,精密度 、重复性高 , 分析快速的优点 ,可作为了哥王药材的质量控制方法 。
关键词:高效液相色谱;　了哥王;　芫花素;　含量测定
中图分类号:R284　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)10-2466-02
DeterminationofGenkwaninContentinWikstroemiaindica(L.)C.A.Mey.byHPLC
LIYan-min, JIANGJian-guo＊ , YANGLi
(ColegeofLightChemicalEngineeringandFoodScience, SouthChinaUniversityofTechnology, Guangzhou,
510640, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofthecontentofgenkwanininWikstroemiaindica(L.)C.A.
Mey(W.indica).MethodsThecontentofgenkwanininW.indicawasdeterminedbyHPLCwithAlltechC (18)(250 mm×
4.6mm, 5 μm)column.Amixtureofmethanoland0.2% phosphoricacidsolution(55∶45)wasusedasmobilephase, the
flowratewas1.0 ml· min-1 andUVdetectionwavelengthwasat346 nm.Temperaturewas35℃ andsamplesizewas10μl.Re-
sultsThelinearrelationshipwasgoodwithintherangeof0.24 ～ 2.40μg(r=0.999 8).Theaveragerecoverywas100.57% ,
RSDwas1.76%.ConclusionThemethodissimpleandaccuratewithgoodseparation.Theresultsaresensitiveandreproduci-
bleandmaybeusedinthequalitycontrolofgenkwanininWikstroemiaindica(L.)C.A.Mey.
Keywords:HPLC;　Wikstroemiaindica;　Genkwanin;　Determination
　　中药了哥王为瑞香科植物了哥王 Wikstroemiaindica(L.)C.
A.Mey.的干燥根或根皮 , 主产于两广 ,浙江 、江西也有出产。性
味苦寒 、微辛 ,有毒。功能清热解毒 , 化痰散结 , 消肿止痛。主治
风湿性关节炎 , 淋巴结炎 , 瘰疬 , 痈肿 ,跌打损伤 , 具有抑菌 、抗病
毒抗炎镇痛 、止咳祛痰等作用。本品有毒 , 对皮肤有刺激性 ,所含
树脂有强烈的泻下作用 [ 1] , 文献报道含有黄酮 、多糖类 、酸性树
脂 、挥发油 、甾体类 、皂苷等成分。了哥王含有南荛酚 、牛蒡苷元 、
松脂酚 、山萘酚等多种化学成分 , 还含芫花素 、西瑞香素等 [ 2] 。
了哥王提取液中有效成分的含量测定目前尚无研究报道 , 因此 ,
我们采用高效液相色谱法测定了哥王超声提取液中芫花素的含
量。现报道如下 。
1　仪器与材料
1.1　仪器 Didnex-P680高效液相色谱仪;PDA-100 Photodiote
Array检测器;CQ2250超声波清洗仪(上海声源仪器有限公司);
FA1104N电子分析天平(上海精科天平厂)。
1.2　试药 芫花素对照品由广州药物研究所提供 , 经归一法标
定 , 含量为 99.3%, 流动相甲醇为色谱纯(美国 Tedia公司), 水为
二次蒸馏水 ,其余试剂均为分析纯。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 10期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009 VOL.20 NO.10
1.3　药材 了哥王购于广州市清平药材市场 , 由广东药学院天然
产物化学系王定勇教授鉴定为了哥王 Wikstroemiaindica(L.)C.
A.Mey的干燥根茎。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 AlltechODS柱(4.6 mm ×250 mm, 5
μm, );流动相为甲醇 -0.2 %磷酸溶液(体积比 55∶45);流速
1.0ml· min-1;检测波长 346nm;进样量 10 μl;柱温:35℃;在此
条件下供试品中芫花素成分能与其他成分达到较好的分离。对
照品 、供试品在约 19 min相同时间有一色谱峰 ,见图 1。
a-对照品　b-了哥王提取液　1.芫花素
图 1　对照品 、供试品液相色谱图
2.2　对照品溶液的制备 精密称取芫花素对照品 12 mg, 置于 50
ml的容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,制成 0.24 mg·
ml-1的对照品溶液 , 经 0.45μm微孔滤膜过滤 , 即得。
2.3　供试品溶液的制备 取了哥王生药研成细粉 , 过 40目筛 ,精
密称取细粉约 25 g, 置具塞锥形瓶中 , 加入 100 ml甲醇 , 称定重
量 , 超声处理 45 min, 放置室温 , 加溶剂补足重量 , 摇匀 , 滤过 ,取
续滤液 , 经 0.45 μm微孔滤膜过滤 , 即得。
2.4　线性关系考察 分别精密吸取芫花素对照品溶液 1.0, 2.0,
3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 10.0 ml, 分别置于 10 ml量瓶中 , 加甲醇稀释
至刻度 , 摇匀 ,分别吸取 10μl,注入液相色谱仪中 , 按上述色谱条
件测定其峰面积 , 并以对照品含量(X)为横坐标 , 峰面积(Y)为纵
坐标 , 得回归方程为:Y=84 069X+34.648(r=0.999 8)。结果表
明:芫花素对照品在 0.24 ～ 2.40μg范围内与峰面积呈良好的线
性关系。
2.5　精密度实验 精密吸取同一份供试品溶液 10 μl, 按上述色
谱条件 , 重复进样 7次 , 测定供试品溶液中芫花素峰面积值。结
果供试品峰面积值的相对标准偏差 RSD=1.46% (n=7), 表明
仪器精密度良好。
2.6　重复性实验 精密称取同一批次样品 5份各 25 g, 按供试品
溶液制备项下方法制备并测定 ,结果 RSD=2.34% (n=5),表明
此方法的重复性良好 。
2.7　稳定性实验 精密吸取供试品溶液 , 按上述色谱条件 , 每隔
0.5 h, 测定供试品溶液中芫花素峰面积值 , 共测定到第 4小时 ,
结果 RSD=1.21%,供试品溶液在所测的 4 h内较稳定。
2.8　加样回收率实验 分别精密称取已知含量的样品 5份 ,每份
约 25g, 按供试品制备方法制备 , 分别加入芫花素对照品适量并
测定 , 计算回收率。结果平均回收率 100.57%, RSD=1.76%
(n=5)。结果见表 1。
表 1　芫花素含量测定回收率实验结果
样品 样品中m/μg
加入量
m/μg
测出量
m/μg
回收率
(% )
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 0.63 0.11 0.75 101.35
2 0.65 0.12 0.76 98.70
3 0.64 0.10 0.75 101.35 100.57 1.76
4 0.67 0.13 0.79 98.75
5 0.64 0.10 0.76 102.70
2.9　样品的测定 取不同批次了哥王的干燥药材 5份 , 每份约
25 g, 按供试品制备方法制备 , 分别精密吸取对照品溶液和供试
品溶液 ,按上述色谱条件测定。结果见表 2。
表 2　样品中芫花素含量的测定结果
样品 取样量 m/g 芫花素含量 m/mg 含量(%) 平均含量(%)
1 25.024 6.78 0.027 1
2 25.018 6.74 0.026 9
3 25.104 6.80 0.027 1 0.026 9
4 25.861 6.85 0.026 5
5 25.927 6.91 0.026 7
3　讨论
3.1　流动相的选择 分别以甲醇 -水 、甲醇 -水 -磷酸 、乙腈 -
水 、乙腈 -水 -磷酸为流动相比较分离效果。其中甲醇 -水 -磷
酸为流动相时可以达到最佳分离效果 ,故采用甲醇 -水 -磷酸为
流动相 [ 3] 。
流动相的 pH值对分离影响较大 , 以甲醇和磷酸水溶液作为
流动相 , pH值越低 , 分离效果越好 , 考虑到色谱柱对 pH值的耐
受性 , 因此选择体积分数为 0.2%的磷酸水溶液。
3.2　提取方法的选择 分别考察超声提取和回流提取两种方法。
结果表明 ,超声提取的效果较好 , 峰面积较大 , 含量较高 , 故选择
超声提取方法。
3.3　提取溶剂的选择 精密称取了哥王 25 g共 3份 ,分别置于
锥形瓶中 , 称定重量 ,加入甲醇 、乙醇 、醋酸乙酯各 100 ml,超声处
理 45min,放至室温 , 加溶剂补足重量 , 滤过 , 取续滤液作为供试
品溶液 , 测得芫花素含量分别为 0.27, 0.24, 0.18 mg· g-1。甲
醇提取物中芫花素含量较高 , 杂质对分离度干扰小 ,供试品峰的
分离效果好 ,故采用甲醇作为提取溶剂。
3.4　提取时间的选择 精密称取了哥王 25 g共 4份 ,分别置于
锥形瓶中 ,各加入甲醇 100 ml, 称定重量 ,分别超声处理 20, 30,
45, 60min,放至室温 , 加溶剂补足重量 , 滤过 , 取续滤液作为供试
品溶液 ,测得芫花素含量分别为 0.18, 0.24, 0.27, 0.27 mg· g-1 ,
45 min与 60 min提取效果较好 , 故选用 45 min提取时间 。
目前 ,对了哥王化学成分的研究文献报道的很少。本实验研
究表明芫花素为了哥王中可控成分之一 ,故将其作为药材中的指
标性成分进行含量测定 ,可有效地控制了哥王的质量。
参考文献:
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