全 文 ：doi:10. 3969 / j. issn. 1000-484X. 2013. 07. 012
①本文受河南省科技攻关项目(No． 0524420040)和河南省动物学省
级重点学科基金资助
②通讯作者，E-mail:ZSL369@ sina． com
作者简介:贾永芳(1978 年 －) ，女，在读博士，讲师，主要从事细胞免
疫调控方面的研究，E-mail :jyf324@ 126． com。
花旗松素、槲皮素对 LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制作用①
贾永芳 吴雷振 张瑞平 王丽霞 刘亚洁 张顺利②
(河南师范大学生命科学学院 省部共建细胞分化调控国家重点实验室，新乡 453007)
中国图书分类号 Ｒ967 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2013)07-0723-05
［摘 要］ 目的:探讨花旗松素和槲皮素对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的免疫抑制作用。方法:昆明
种正常孕鼠 90 只，随机分为对照组(A组) ;实验组均于孕 6 天尾静脉注射 LPS 0． 2 ml 诱导流产小鼠，并分为 LPS 处理组(B
组) ，低浓度花旗松素及 LPS双处理组(C1 组)、高浓度花旗松素及 LPS双处理组(C2 组)、低浓度槲皮素及 LPS双处理组(D1
组) ，高浓度槲皮素及 LPS双处理组(D2 组) ，每组 15 只。用酶组织化学、免疫组化和 ELISA方法检测孕 9 天子宫角组织非特
异性酯酶阳性(α-NAE +)巨噬细胞，CD14 +巨噬细胞和 TNF-α 含量。结果:B 组小鼠流产率为 100%，胚胎吸收率为 100%
(P ＜ 0． 01) ;灌胃花旗松素和槲皮素可以显著抑制流产模型小鼠的流产率和胚胎吸收率(P ＜ 0． 01)。B组孕鼠子宫内膜和肌
层 α-NAE +，CD14 +巨噬细胞数量和阳性面积与 A组相比均显著增多(P ＜ 0． 01) ;各双处理组与 B组相比，子宫内膜和肌层 α-
NAE +巨噬细胞和 CD14 +巨噬细胞数目和阳性面积显著减少(P ＜ 0． 01)。B 组孕鼠子宫 TNF-α 含量与 A 组相比显著增加
(P ＜0． 05) ，而双处理组接近正常水平。结论:通过抑制子宫巨噬细胞的数量、分布、活性和 TNF-α分泌量，可能是花旗松素和
槲皮素对抗 LPS诱导小鼠流产的机理之一。
［关键词］ 花旗松素;槲皮素;巨噬细胞;α-NAE;CD14;TNF-α;流产;小鼠
Inhibitory effects of taxifolin and quercetin on the macrophages in the uterine of
abortion mice induced by LPS
JIA Yong-Fang，WU Lei-Zhen，ZHANG Ｒui-Ping，WANG Li-Xia，LIU Ya-Jie，ZHANG Shun-Li． College of Life
Science，Henan Normal University，Key Laboratory for Cell Differentiation and Ｒegulation of Henan Province，Xin
xiang 453007，China
［Abstract］ Objective:To explore the immunosuppression effects of taxifolin and quercetin on the macrophages in the uterine of
abortion mice induced by LPS． Methods:Gravidity mice of Kunming(90 mice)were divided into control group (group A)and experi-
mental group． In order to induce abortion，mice in experimental group were intravenous injected LPS on 6 day of pregnancy． Experi-
mental group were divided into group B，group C1(ingestion low concentration taxifolin) ，group C2(ingestion high concentration taxifo-
lin) ，group D1(ingestion low concentration quercetin)and group D2(ingestion high concentration quercetin) ，each group of 15 mice．
Then the variety of α-NAE +，CD14 + macrophages and TNF-α in the uteru of gravidity mice were identified by enzyme-histochemistry，
immunohistochemistry and ELISA on 9 day of pregnancy． Ｒesults:The abortion rate of gravidity mice in group B was 100%，the fetal
resorbing rate was 100%(P ＜ 0． 01)． The abortion rate and the fetal resorbing rate of gravidity mice decreased distinctly through oral
taxifolin or quercetin(P ＜ 0． 01)． The quantities and positive cell area of α-NAE + macrophages and CD14 + macrophages in the endo-
metrium and the myometrium of gravidity mice of group B were greatly increased compared with group A(P ＜ 0． 01)． The α-NAE + mac-
rophages and CD14 + macrophages quantities and positive cell area in the endometrium and the myometrium of the taxifolin and querce-
tin treatment group were reduced compared with group B (P ＜ 0． 01)． The TNF-α contents in the uteri of mice in group B were greatly
increased compared with group A(P ＜ 0． 05) ，but close to normal levels in the taxifolin and quercetin treatment group． Conclusion:
The quantity，distribution and activity of macrophages and the secretion TNF-α were inhibited，which maybe one of the mechanisms for
the miscarriage induced by LPS could be antagonized by taxifolin and quercetin．
［Key words］ Taxifolin;Quercetin;Macrophage;α-NAE;CD14;TNF-α;Abortion;Mouse
花旗松素和槲皮素专属性强，是水红花子的质
量控制标准物，花旗松素是槲皮素的同分异构体，具
有调节脂代谢、抗炎、抗氧化、抗辐射、抗病毒和抗肿
瘤活性作用［1］。本研究团队已经发现水红花子水
煎剂对 LPS所致小鼠流产具有保胎作用，但其单体
·327·贾永芳等 花旗松素、槲皮素对 LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制作用 第 7 期
活性成分是否也具有类似的抗感染流产作用及其作
用机制目前尚不清楚。而在由细菌感染引起的流产
中，细菌脂多糖(LPS)起关键作用，它可以通过激活
子宫巨噬细胞释放 TNF-α，而导致流产［2，3］。同时
CD14 是巨噬细胞重要的模式识别受体，又是介导
LPS激活巨噬细胞的受体，在清除 LPS 过程中发挥
重要作用［4］。本实验旨在通过观察花旗松素、槲皮
素对 LPS 诱导流产小鼠子宫中非特异性酯酶阳性
巨噬细胞和 CD14 阳性巨噬细胞数量和分布，分泌
TNF-α含量的变化，从细胞、分子水平上阐明花旗松
素和槲皮素的免疫抑制作用，从免疫药理学角度探
讨其保胎机理，为其药效的进一步开发和寻找抗感
染流产的新途径提供依据。
1 材料与方法
1． 1 实验药品和器材 花旗松素(Taxifolin)和槲
皮素(Quercetin)均购自南京泽朗医药有限公司;
LPS (Sigma，美国，127k4048)购自北京鼎国生物技
术有限公司;兔抗鼠 CD14 抗体 (Santa Cruze，美
国) ;生物素化的羊抗兔 IgG和辣根过氧化酶标记链
酶卵白素(Vector，美国) ;小鼠肿瘤坏死因子(TNF-
α)ELISA试剂盒(Ｒ＆Dsystems，美国) ;冰冻切片机
(Ｒeichert Histo，美国) ;酶标仪(ST-360，上海科华
实验系统有限公司) ;LPS:用 0. 01 mol /L pH7． 4 的
PBS配制浓度为 0． 5 μg /ml的溶液。
1． 2 实验动物 8 周龄昆明种清洁级小鼠体重
20 ～ 22 g，常规饲养，自由取食饮水。以阴道涂片法
进行动情周期鉴定。取动情期雌鼠与雄鼠 2∶ 1 合笼
过夜，次日清晨检出阴栓者定为孕 1 天。
1． 3 动物分组及处理 孕鼠随机分为对照组(简
称 A组)和实验组。实验组又分为 LPS 处理流产模
型组(简称 B组)、低浓度花旗松素及 LPS 双处理组
(简称 C1 组)、高浓度花旗松素及 LPS双处理组(简
称 C2 组)、低浓度槲皮素及 LPS 双处理组(简称 D1
组)、高浓度槲皮素及 LPS 双处理组(简称 D2 组)。
每组小鼠 15 只。A、B 组于孕 2 天开始每天灌胃
PBS 0． 4 ml，1 次 /天;其中，A 组于孕 6 天尾静脉注
射 PBS 0． 2 ml;B 组于孕 6 天尾静脉注射 LPS
0． 2 ml［5，6］;C1 组于孕 2 天开始每天灌胃花旗松素
50 mg /kg，连续灌胃至孕 8 天，其中在孕 6 天尾静脉
注射 LPS 0． 2 ml;C2 组:孕 2 天开始灌胃花旗松素
250 mg /kg，连续灌至孕 8 天，其余同 C1 组;D1 组:
孕 2 天开始灌胃槲皮素 50 mg /kg，连续灌至孕 8 天，
其余同 C1 组;D2 组:孕 2 天开始灌胃槲皮素
250 mg /kg，连续灌至孕 8 天，其余同 C1 组。所有小
鼠均于孕 9 天处死取子宫。每只小鼠左侧子宫角用
于制备冰冻切片，右侧子宫角用于 ELISA检测。
1． 4 非特异性酯酶染色 左侧子宫角冰冻切片，横
切 6 μm，晾干。参照文献［7］进行非特异性酯酶
(α-ANE)染色。
1． 5 免疫组织化学染色 左侧子宫角冰冻切片
6 μm，多聚甲醛固定 20 分钟，分别用 0． 3% 的
H2O2，10%正常羊血清封闭非特异性染色。滴加
1∶ 200兔抗鼠 CD14 一抗，按试剂盒要求进行免疫组
织化学染色，镜检、照相。
1． 6 子宫组织匀浆液制备和 ELISA 方法 将右侧
子宫角置预冷 PBS中剥去胚胎，冰浴匀浆，12 000 r /
min，4℃离心 15 分钟，分装上清液，－ 20℃冻存。
TNF-α检测按 ELISA 试剂盒说明书操作，酶标仪
450 nm处读取 OD值，标准曲线确定 TNF-α含量。
1． 7 胚胎吸收率计算、细胞计数和统计学分析 胚
胎吸收率 = ［死亡胚胎数 /(死亡胚胎数 +正常胚胎数) ］× 100%。
每只动物取 5 张切片，细胞计数于 10 × 40 倍光镜
下，每张切片随机选取 6 个视野，用 CIS图像分析软
件测量免疫组化阳性细胞数量、灰度值和阳性面积。
数据以 x ± s 表示，统计分析采用 SPSS13． 0 软件和
组间 t检验。
2 结果
2． 1 花旗松素和槲皮素对小鼠胚胎发育的影响
孕 9 天解剖孕鼠，A组 15 只中有 2 只出现明显流产
迹象，胚胎形态明显小于正常胚胎，胎盘和胚胎有出
血或坏死，呈黑褐色;而正常胚胎大小均匀，呈粉红
色。B组孕鼠全部流产，胚胎吸收率 100%，胎盘坏
死，子宫内严重淤血，造模成功。C1、C2 和 D1 组流
产率和胚胎吸收率均略高于 A组(P ＞ 0． 05) ，D2 组
流产率较 A组略有增加，胚胎吸收率显著高于 A组
(P ＜ 0． 01) ;各双处理组流产率与 B组相比下降，胚
胎吸收率极显著降低(P ＜ 0． 01)。结果详见表 1。
2． 2 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 α-NAE +巨噬
细胞的影响
2． 2． 1 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 α-NAE +巨
噬细胞数量和分布的影响 B组小鼠子宫内膜和肌
层 α-NAE + 巨噬细胞数量均显著多于 A 组(P ＜
0. 01，图 1A、B) ;C1 组与 A 组相比，外膜巨噬细胞
显著减少(P ＜ 0． 05) ，但内膜及肌层已接近 A 组
(P ＞ 0． 05，图 1C)。C2 组与 A 组、B 组相比，子宫
各层 α-NAE + 巨噬细胞数量均显著减少(P ＜
0. 05) ，内膜和肌层达到极显著水平(P ＜ 0． 01)。
D1 组与 A组相比，外膜显著降低(P ＜ 0． 05) ，其他
·427· 中国免疫学杂志 2013 年第 29 卷
部位差异不显著;三层组织结构中巨噬细胞均显著
低于 B组(P ＜ 0． 05)。D2 组子宫内膜和肌层巨噬
细胞数目显著高于 A 组，低于 B 组(P ＜ 0． 01)。详
见表 2。
2． 2． 2 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 α-NAE +巨
噬细胞灰度值的影响 与 A 组相比，B 组子宫内膜
和肌层灰度值显著减少(P ＜ 0. 05) ，外膜灰度值与
A 组无差异;D2 组肌层灰度值显著降低(P ＜
0. 05) ;其他双处理组内膜与肌层和 A 组相比无显
著差异，外膜较 A 组显著增加(P ＜ 0. 05)。双处理
组和 B组相比均显著增加(P ＜ 0. 05)。详见表 2。
2． 2． 3 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫巨噬细胞 α-
NAE +阳性反应面积的影响 与 A 组相比，B 组子
宫内膜和肌层巨噬细胞 α-NAE +阳性反应面积显著
增加(P ＜ 0． 01)。C1、D1 组内膜和肌层与 A组相比
差异不显著，较 B 组显著下降(P ＜ 0． 01)。C2 组
内、外膜阳性面积较 A 组显著减少，肌层降低(P ＜
0． 01)。D2 组内膜和肌层较 A 组和其他双处理组
极显著增加(P ＜ 0． 01) ;内膜较 B 组极显著下降
(P ＜ 0． 01) ，肌层下降不显著。详见表 2。
2． 3 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 CD14 +巨噬的
影响
2． 3． 1 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 CD14 +巨噬
细胞数量和分布的影响 B 组小鼠 CD14 +巨噬细
胞数量与 A 组相比，内膜、肌层均显著增多(P ＜
0. 01) ，外膜与 A 组相似(图 2A、B)。C1 组、D1 组
与 A组相比，肌层显著升高(P ＜ 0． 01) ，外膜显著降
低(P ＜ 0． 05) ，内膜接近 A 组(P ＞ 0． 05，图 2C)。
C2 组子宫内膜和外膜 CD14 +巨噬细胞数量均显著
低于 A组，肌层极显著高于 A 组 (P ＜ 0． 01)。D2
组内膜和肌层 CD14 +巨噬细胞均极显著高于 A 组
(P ＜ 0． 01) ，外膜低于 A 组(P ＜ 0． 05)。各双处
理组与B组相比，3层巨噬细胞数量均显著低于B组
(P ＜ 0． 05) ，内膜和肌层达到极显著水平(P ＜
0. 01)。详见表 3。
2． 3． 2 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 CD14 +巨噬
细胞灰度值的影响 B 组子宫内膜和肌层 CD14 +
巨噬细胞灰度值较 A 组显著减少(P ＜ 0． 05) ，外膜
差异不明显。C2 组内膜和外膜均显著高于 A 组
(P ＜ 0． 05) ，肌层无显著差异。其它各双处理组内
膜和肌层变化与 A 组近似，显著高于 B 组(P ＜
0. 05) ;外膜较 A 组和 B 组显著增加(P ＜ 0． 05)。
详见表 3。
2． 3． 3 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 CD14 +巨噬
细胞免疫反应阳性面积的影响 B 组子宫内膜和肌
层 CD14 + 巨噬细胞阳性面积率较 A 组显著增加
(P ＜ 0． 01)。D2 组肌层极显著高于 A 组和其它双
处理组，低于 B组(P ＜ 0． 01) ，内膜和外膜与 A组无
显著差异。其他双处理组 3 层结构与 B 组相比均
显著降低，其中内膜和肌层达到极显著水平(P ＜
0. 01) ;与 A组相比内膜极显著降低(P ＜ 0． 01) ，外
膜显著降低(P ＜ 0． 05) ，肌层显著升高(P ＜ 0． 01) ;
组间差异不显著。详见表 3。
2． 4 花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 TNF-α含量的
表 1 各组小鼠的妊娠结果
Tab． 1 Pregnancy outcome of each group mice
Groups Abortion rate (%) Fetal resorption rate(%)
A 13． 3(2 /15) 15． 3A
B 100(15 /15) 100B
C1 26． 7(4 /15) 28． 6A
C2 20． 0(3 /15) 21． 9A
D1 26． 7(4 /15) 27． 4A
D2 33． 3(5 /15) 42． 8C
Note:Data with different letters significantly differ among treatments
(capitals means P ＜ 0． 01)．
表 2 LPS、花旗松素和槲皮素对各组小鼠子宫 α-NAE +巨噬细胞的影响(x ± s)
Tab． 2 Effect of LPS，taxifolin and quercetin on the α-NAE + macrophages in the uterine of each group mice (x ± s)
Groups
Quantity Gray value Positive cell area
Endometrium Myometrium Perimetrium Endometrium Myometrium Perimetrium Endometrium Myometrium Perimetrium
A 6． 12 ±0． 71A 2． 81 ± 0． 82A 16． 54 ±1． 67a 66． 64 ±7． 71a 70． 62 ±1． 67a 43． 76 ±5． 44a 1． 09% ± 0． 001 1A 0． 95% ± 0． 001 5A 1． 86% ±0． 004 4a
B 26． 23 ±2． 65B 32． 84 ±3． 33B 14． 34 ±0． 35a 45． 71 ±2． 21b 54． 61 ±2． 23b 46． 60 ±1． 52a 3． 25% ± 0． 008 3B 2． 87% ± 0． 004 4B 1． 49% ±0． 003 8ab
C1 6． 20 ± 1． 18A 2． 88 ± 0． 84A 10． 40 ±1． 14bc 64． 64 ±7． 71a 69． 56 ±2． 14a 61． 32 ±5． 58b 0． 89% ± 0． 001 5A 0． 75% ± 0． 001 9A 1． 37% ±0． 003 1b
C2 3． 40 ± 0． 91C 1． 40 ± 0． 55C 8． 24 ± 0． 45c 68． 41 ±1． 57a 76． 13 ±6． 64a 69． 67 ±4． 24b 0． 61% ± 0． 001 9C 0． 51% ±0． 002 3C 1． 32% ±0． 003 4b
D1 9． 44 ± 1． 14A 2． 54 ± 0． 83A 11． 56 ±0． 12b 63． 65 ±11． 15a73． 15 ±3． 05a 62． 55 ±3． 34b 1． 01% ± 0． 002 1A 0． 88% ±0． 001 9A 1． 48% ±0． 002 3ab
D2 20． 58 ±2． 52D 16． 25 ±3． 22D 12． 75 ±0． 15b 58． 45 ±2． 61a 61． 00 ±3． 32c 63． 75 ±8． 91b 2． 49% ± 0． 006 5D 2． 46% ±0． 005 5B 1． 89% ±0． 001 4a
Note:Data with different letters significantly differ (capitals means P ＜ 0． 01，lowercase means P ＜ 0． 05)among treatments．
·527·贾永芳等 花旗松素、槲皮素对 LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制作用 第 7 期
表 3 LPS、花旗松素和槲皮素对小鼠子宫 CD14 +巨噬细胞的影响(x ± s)
Tab． 3 Effect of LPS，taxifolin and quercetin on the CD14 + macrophages in the uterine of each group mice (x ± s)
Groups
Quantity Gray value Positive cell area
Endometrium Myometrium Perimetrium Endometrium Myometrium Perimetrium Endometrium Myometrium Perimetrium
A 6．41 ±0．89A 1．41 ±0．25A 15．12 ±0．71a 82．36 ±4．61a 97．15 ±5．38a 61．83 ±4．15a 2．44% ±0．006 4A 0．62% ±0．000 9A 2．78% ± 0．005 3a
B 23．28 ±3．35B 26．13 ±4．69B 12．67 ±2．36a 60．39 ±4．35b 64．08 ±4．32b 71．13 ±3．89a 3．32% ±0．004 8B 3．74% ±0．003 8B 2．24% ± 0．003 5a
C1 7．12 ±0．71A 8．65 ±1．34C 8．03 ±1．64b 89．45 ±2．51a 86．54 ±6．65a 90．24 ±3．74b 1．12% ±0．001 7C 1．56% ±0．001 1C 1．44% ± 0．003 4b
C2 3．25 ±0．46C 7．42 ±0．98C 7．43 ±1．55b 120．64 ±23．71c 91．13 ±4．08a 88．15 ±3．36b 1．07% ±0．002 9C 1．36% ±0．004 5C 1．42% ± 0．002 5b
D1 8．62 ±0．84A 8．43 ±1．29C 8．15 ±1．84b 88．67 ±2．56a 102．09 ±3．05a 94．75 ±2．71b 1．24% ±0．002 1C 1．61% ±0．001 2C 1．51% ± 0．001 6b
D2 14．25 ±2．30D 15．82 ±1．26D 9．15 ± 0．58b 87．28 ±3．98a 88．75 ±4．39a 83．29 ±3．75b 2．35% ±0．005 3A 2．73% ±0．005 1D 1．89% ± 0．014 0ab
Note:Data with different letters significantly differ (capitals means P ＜ 0． 01，lowercase means P ＜ 0． 05)among treatments．
图 1 流产小鼠子宫非特异性酯酶染色
Fig． 1 Non-specific esterase staining in the uterine of a-
bortion mice
Note:A． The quantity of α-NAE + macrophages in the uterine of mice
in group A(× 100) ;B． The quantity of α-NAE + macrophages in
the uterine of mice in group B has a significant increased com-
pared with group A(× 100) ;C． The quantity of α-NAE + macro-
phages in the uterine of mice in group C1 has a significant de-
creased compared with group B(× 100)． The arrow in the figure
( )showed seperately the endometrium，the myometrium and
the perimetrium．
影响 子宫 TNF-α 含量(pg /ml;蛋白)在 B 组含量
为 45． 36 ± 6． 89，显著高于 A 组 25． 38 ± 2． 89
(P ＜ 0． 05)。C1 组为 26． 23 ± 4． 71，C2 组为
29． 25 ± 0． 46，D1 组为 28． 15 ± 3． 84，D2 组为
34. 05 ± 3. 08，与 A组相比无显著性差异;与 B 组相
比均显著降低(P ＜ 0． 05)。
3 讨论
LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的重要组成成分，
可诱发大鼠和小鼠的胚胎吸收［8，9］。王晓丹［5］报
道，每只孕鼠在孕 7 天静脉注射 0． 1 μg LPS 引起小
鼠流产，本课题组在孕 6 天注射 LPS 即可引起小鼠
全部流产，胚胎吸收率为 100%，认为造模成功。而
在孕 2 ～ 8 天预先灌胃孕鼠花旗松素或槲皮素，再注
射 LPS，孕鼠的流产率与流产模型组相比下降，胚胎
吸收率极显著降低(P ＜ 0． 01) ，说明花旗松素和槲
皮素对 LPS诱导的小鼠流产具有抑制作用。
图 2 流产小鼠子宫免疫组化染色
Fig． 2 Immunohistochemistry staining in the uterine of a-
bortion mice
Note:A． The quantity of CD14 + macrophages in the uterine of mice in
group A(× 100) ;B． The quantity of CD14 + macrophages in the
endometria and the myometrium in the uterine of mice in group B
has a significant increased compared with group A(× 100) ;C．
The quantity of CD14 + macrophages in the endometria and the
myometrium in the uterine of mice in group C1 has a significant
decreased compared with group B(× 100)． The arrow in the figue
( )showed seperately the endometrium，the myometrium and
the perimetrium．
妊娠是一个免疫耐受的过程，小鼠胚胎着床和
维持与子宫巨噬细胞的分布变化有关［10］。外源性
LPS通过血浆中脂多糖结合蛋白(LBP)转运至单
核 /巨噬细胞膜表面，与 CD14 结合，启动 LPS 信号
的细胞内转导［11］，引起预致敏的巨噬细胞释放
TNF-α［3］，后者可直接引起胎盘滋养层细胞的凋
亡［12］，导致小鼠流产，提示 CD14 是介导 LPS 激活
巨噬细胞的关键因素。本文实验结果显示，A 组孕
9 天时，子宫内的 CD14 +巨噬细胞主要分布在外膜
和内膜，在肌层内几乎没有分布。B 组子宫内膜和
肌层的 CD14 +巨噬细胞数和阳性面积显著的高于 A
组，灰度值显著小于 A 组，说明在 LPS 刺激后巨噬
细胞 CD14 分子的表达增多，高表达的 CD14 分子作
为巨噬细胞的重要的模式识别受体进一步介导 LPS
激活巨噬细胞，促进巨噬细胞释放大量的 TNF-α。
同时实验结果证实，B 组小鼠子宫巨噬细胞 CD14
表达增加的同时伴随着 TNF-α 含量显著升高。B
·627· 中国免疫学杂志 2013 年第 29 卷
组外膜 CD14 +巨噬细胞数目与 A组无显著差异，推
测 LPS 有诱导巨噬细胞从子宫外部向子宫内膜迁
移的作用，而各双处理组的内膜、肌层 CD14 +巨噬
细胞数和阳性面积，TNF-α 含量均极显著的低于 B
组，Daolin Tang［13］用 100 mg /kg 槲皮素处理由 LPS
引起的脓毒症小鼠也发现血清 TNF-α 也下降显著
(P ＜ 0． 05)。提示一定剂量花旗松素和槲皮素对
孕鼠的前期处理可以减少巨噬细胞 CD14 分子的表
达，可能通过阻断 LPS-LBP /CD14 系统，在一定程度
阻断抗原呈递，达到减弱 LPS 对巨噬细胞的激活作
用。推测花旗松素和槲皮素对 LPS 导致的小鼠流
产的保护作用与降低巨噬细胞 CD14 +的表达、巨噬
细胞从子宫外向子宫内膜的迁移能力并抑制 TNF-α
的分泌有关。值得关注的是，用高浓度槲皮素处理
的 D2 组的作用没有其它双处理组显著，尤其是在
对内膜巨噬细胞迁移和 CD14 分子表达的抑制作用
较其他双处理组明显降低，而高浓度花旗松素对 C2
组小鼠子宫内膜巨噬细胞 CD14 分子表达的抑制作
用较其他双处理组明显增强，证实这种活性单体对
LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞有抑制作用，但其
作用效果有差别，剂量是其原因之一。中药具有双
向调节作用，在一定的剂量范围内，随着剂量的增加
有的疗效会相应提高，有的疗效反而下降，甚至显示
出相反的治疗作用。此外，除单味药的剂量对治疗
功效的影响外，方剂中君臣佐使的配伍及其剂量比
例也是中医处方的关键所在，因此，就槲皮素和花旗
松素对巨噬细胞的抑制作用的分子机理以及与其他
有效活性成分配伍之药效仍需深入研究，对其作为
新型免疫抑制剂提供更详实的依据。
De等［14］的观察表明，与子宫腺区相邻的基蜕
膜中，正常妊娠 8 天很少见到巨噬细胞，本实验也观
察到相同的结果。实验结果表明，B组与 A组相比，
子宫内膜和肌层的 α-NAE +巨噬细胞数量和阳性面
积都极显著增加，说明 LPS 刺激后子宫内巨噬细胞
非特异性酯酶的活性显著增强，使巨噬细胞水解能
力增强，吞噬防御功能增强，而在这过程中也会产生
大量的炎性细胞因子而导致流产。除 D2 组肌层
外，其他双处理组子宫内膜和肌层的 α-NAE +巨噬
细胞数量和阳性面积与 B 组相比都极显著减少，说
明预先口服不同浓度的花旗松素和槲皮素可以不同
程度地阻止 α-NAE +巨噬细胞由外膜向内膜迁移，
降低非特异性酯酶的活性，从而减弱由巨噬细胞引
起的炎症反应对胚胎的不利影响。
综上所述，花旗松素和槲皮素对子宫中巨噬细
胞的抑制作用可能是通过阻止细胞的迁移、降低其
α-NAE +活性和 TNF-α的分泌，阻断 LPS-LBP /CD14
系统，进而在一定程度阻断抗原呈递，从而改变子宫
免疫耐受的微环境实现的。
4 参考文献
1 肖培根主编． 新编中药志［M］． 北京:化学工业出版社，2007:
760-760．
2 Clark D A，Chaouat G，Banwatt D et al． Ecology of danger-depend-
ent cytokine-boosted spontaneous abortion in the CBA x DBA /2
mouse model:II Fecal LPS levels in colonies with different basal abor-
tion rates［J］． Am J Ｒeprod Immunol，2008;60(6) :529-533．
3 Beutler B，Greenwald D，Hulmes J D et al． Identity of tumour necro-
sis factor and the macrophage-secreted factor cachectin［J］． Nature
Lond，1985;316:552-554．
4 Van Der Laan L J，Dopp E A，Haworth Ｒ et al． Ｒegulation and func-
tional involvement of macrophage scavenger receptor MAＲCO in
clearance of bacteria in vivo［J］． J Immuno1，1999;15(162) :
939-947．
5 王晓丹，马爱团，姜国均 et al．石菖蒲对 LPS致流产小鼠的保胎作
用及子宫免疫细胞的影响［J］． 中国兽医学报，2009;29(7) :
889-893．
6 王卫华，闫 坤，王丽霞 et al． 红藤对 LPS 诱导流产小鼠的保胎
作用及子宫巨噬细胞的影响［J］．中国免疫学杂志，2011;27(4) :
325-329．
7 陈啸梅． 组织化学手册［M］． 北京:人民卫生出版社，1982:
170-172．
8 Hunt J S． Cytokine networks in the uteroplacental unit:macrophages
as pivotal regulatory cells［J］． J Ｒeprod Immunol，1989;16 (1) :
1-17．
9 Aisemberg J，Vercelli C，Wolfson M et al． Inflammatory agents in-
volved in septic miscarriage［J］． Neuroimmunomodulation，2010;
17(3) :150-152．
10 贾永芳，李 莉，张顺利 et al．妊娠早期小鼠子宫巨噬细胞分布
和活性的变化［J］． 解剖学杂志，2009;32(1) :49-51．
11 Gifford G E，Lohmann-Matthes M L． Gamma interferon priming of
mouse and human macrophages for induction of tumor necrosis factor
production by bacterial lipopolysaccharide［J］． J Natl Cancer Inst，
1987;78 (1) :121-124．
12 Otun H A，Lash G E，Innes B A et al． Effect of tumour necrosis fac-
tor-α in combination with interferon-γ on first trimester extravillous
trophoblast invasion［J］． J Ｒeprod Immunol，2011;88(1) :1-11．
13 Daolin Tang，Ｒui Kang，Weimin Xiao et al． Quercetin prevents LPS-
induced high-mobility group Box 1 release and proinflammatory func-
tion［J］． Am J Ｒespir Cell Mol Biol，2009;41(6) :651-660．
14 De M，Wood G W． Analysis of the number and distribution of mac-
rophages，lymphocytes，and granulocytes in the mouse uterus from
implantation through parturition［J］． J Leukocyte Biol，1991;50
(3) :381-392．
［收稿 2012-10-21 修回 2013-02-25］
(编辑 张晓舟)
·727·贾永芳等 花旗松素、槲皮素对 LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制作用 第 7 期