全 文 ：辽宁农业科学 2011(1) :43 ～ 45
Liaoning Agricultural Sciences
文章编号:1002 － 1728(2011)01 － 0043 － 03
三色堇组培快繁技术研究
* 王振民1，付 强2，赵 兵3
(1．朝阳市建平县园林管理处，辽宁 朝阳 122400; 2．抚顺市公园管理处，辽宁 抚顺 113008; 3．昌图县
林业局，辽宁 昌图 112500)
摘要:以三色堇品种大花黄(B1H)顶芽为外植体，对其快繁技术进行了研究。结果表明，幼嫩的顶芽为最适外
植体，最佳消毒方式为 70%酒精 15 s + 0． 1% HgCl2 5 min。最佳初代培养基为:MS + 6-BA 2 mg /L + NAA 0． 2
mg /L;最佳的继代培养基为:MS + 6-BA 1 mg /L + NAA 0． 02 mg /L;在 1 /2MS + NAA 0． 1 mg /L培养基上生根效
果较好。
关键词:三色堇;组织培养;快繁技术
中图分类号:Q813． 1 文献标识码:B
三色堇(Viola tricolor)是堇菜科堇菜属多年
生草本花卉，常作二年生栽培，是花坛常用花卉之
一。三色堇的常规繁殖采用种子繁殖或扦插，但
用种子繁殖，其后代性状易分离退化［1 ～ 5］;使用扦
插繁殖系数低，而组织培养以其繁殖系数大，繁殖
周期短、成本较低，可周年生长等优点，弥补了常
规繁殖的不足［6］。
目前国内关于三色堇组培方面的研究鲜有报
道。本项研究针对三色堇组培过程中的关键环节
进行了研究，以期为三色堇的种质资源保存、新品
种工厂化繁殖推广及遗传转化奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 材料
三色堇品种大花黄(B1H) ，选择生长健壮、
无病虫害的植株作为试材。
1. 2 方法
1. 2. 1 外植体的表面消毒
以幼嫩和较老的顶芽为外植体，进行消毒方
式筛选。
1. 2. 2 不同激素组合对顶芽生长的影响
以 MS和 1 /2 MS为基本培养基，分别加入不
同浓度 NAA和 6-BA的培养基中培养。每个处理
重复 3 次，每个重复接种 20 瓶。
1. 2. 3 不同激素组合对继代培养的影响
将初代培养得到的苗转接到以 MS 为基本培
养基，分别添加不同浓度 6-BA 和 NAA 的培养基
中培养(表 2) ，30 d 后统计诱导外植体分化及生
长情况。
1. 2. 4 不同培养基对生根培养的影响
将 4 ～ 5 cm 的芽苗切下，接种到生根培养基
上，每个处理重复 3 次，每个重复接种 20 瓶(表
3)。30 d后观察生根情况和生长情况。
1. 2. 5 培养条件
培养基中含蔗糖 30 g /L、琼脂 7 g /L，pH 值
5． 8 ～ 6． 0。培养条件为:温度(23 ± 2)℃，光照
16 h，光强 2 000 lx。成活率(%)=萌发出叶片的
外植体个数 /接种外植体数 × 100%;增殖系数 =
增殖后的侧枝数 /接种的顶芽数;生根率 =生根外
植体数 /接种外植体数 × 100%。
表 1 初代培养基配方
编号
培养基的组成
(mg /L)
A1 MS + 6-BA 2 + NAA 0． 1
A2 MS + 6-BA 2 + NAA 0． 2
A3 MS + 6-BA 2 + NAA 0． 5
A4 1 /2MS + 6-BA 0． 2 + NAA 0． 1
A5 MS + 6-BA 3 + NAA 0． 2
A6 MS + 6-BA 0． 2 + NAA 0． 1
A7 MS + 6-BA 4 + NAA 0． 4
A8 MS + 6-BA 6 + NAA 0． 6
A9 MS + 6-BA 8 + NAA 0． 8
A10 MS + 6-BA 10 + NAA 1． 0
* 收稿日期:2010 － 12 － 29
辽 宁 农 业 科 学 2011 年
表 2 继代培养基配方
培养基编号 培养基的组成
B1 MS + 6-BA 2 mg /L + NAA 0． 02 mg /L
B2 MS + 6-BA 2 mg /L + NAA 0． 05 mg /L
B3 MS + 6-BA 1 mg /L + NAA 0． 02 mg /L
B4 MS + 6-BA 1 mg /L + NAA 0． 05 mg /L
B5 MS + 6-BA 3 mg /L + NAA 0． 03 mg /L
表 3 生根培养基配方
培养基编号 基本培养基
NAA
(mg /L)
IBA
(mg /L)
C1 1 /2MS 0 0
C2 1 /2MS 0． 01 0
C3 1 /2MS 0． 1 0
C4 1 /2MS 0． 5 0
C5 1 /2MS 0 0． 01
C6 1 /2MS 0 0． 02
C7 1 /2MS 0 0． 04
C8 1 /4MS 0． 1 0
C9 1 /4MS 0． 2 0
C10 1 /4MS 0． 3 0
2 结果与分析
2. 1 不同消毒处理对外植体成活率的影响
表 4 表明:对于幼嫩的顶芽，用酒精和升汞消
毒外植体比只用升汞消毒污染率要低。70%酒精
15 s + 0． 1% HgCl2 消毒 3 min 的污染率最高，达
80%;消毒 7 min，污染率虽然降低，只有 20%，但
死亡率达 40%;消毒 5 min比较适宜，成活率最高
为 60%，死亡率最低。对于较老的顶芽来说，用
酒精和升汞消毒外植体也比只用升汞消毒污染率
明显降低。70% 酒精 15 s + 0． 1% HgCl2 消毒
10 min的效果较好，死亡率低，成活率较高为
50%。
2. 2 不同激素组合对顶芽生长的影响
表 5 表明:最佳的初代培养基为 A2:MS + 6-
BA 2 mg /L + NAA 0． 2 mg /L。接入 A2 培养基后，
顶芽生长很快。14 d 后从原来的 1． 5 cm 长高到
4 ～ 5 cm，生长比较健壮，顶部的叶片随之长大，不
断有新叶长出。而且 A2 的成活率最高，达 72%
，A4 的成活率也比较高，达 68% ，不过生长速度
较慢。A1、A3、A5、A6 长势一般，生长缓慢。A7
～ A10 的效果一样，顶芽长势不明显。
2. 3 不同激素组合对增殖培养的影响
表 6 表明:最佳继代培养基为 B1:MS + 6-BA
1 mg /L + NAA 0． 02 mg /L，增殖系数为 3． 3。将初
代培养的顶芽切下接入继代培养基，大约 10 d 后
分化出侧枝(图 1)。侧枝生长很快，10 d 侧枝能
长高 2 cm，30 d后就能长满整个三角瓶(图 2)。
2. 4 不同培养基对生根培养的影响
从表 7 可以看出，最好的生根培养基是 C3:
1 /2MS + NAA 0． 1 mg /L，生根数较多，且根较粗
壮。从试验过程来看，三色堇生根较困难，需要时
间较长，至少 30 d 才能看到少许根长出。
表 4 不同外植体污染和成活情况
外植体 消毒剂
消毒时间
(min)
污染率
(%)
成活率
(%)
幼嫩顶芽 0． 1% HgCl 3 90 0
5 40 45
7 35 20
70%酒精 3 80 0
15s + 0． 1% 5 30 60
HgCl2 7 20 40
较老顶芽 0． 1% HgCl 8 50 30
10 40 40
12 30 20
70%酒精 8 40 45
15s + 0． 1% 10 35 50
HgCl2 12 25 30
表 5 不同激素组合对顶芽生长的影响
培养基编号
接种数
(瓶)
愈伤组织
生长情况
成活率
(%)
生长情况
A1 20 较少 45% 长势一般，生长速度一般
A2 20 较多 72% 较好，生长迅速，长势健壮
A3 20 没有 30% 长势一般，生长缓慢
A4 20 没有 68% 开始长势良好，但生长速度一般
A5 20 没有 20% 长势一般，生长缓慢
A6 20 没有 23% 长势一般，生长缓慢
A7 20 几乎没有 0% 不长高，低矮紧缩，时间长了黄花死亡
A8 20 几乎没有 0% 不长高，低矮紧缩，时间长了黄花死亡
A9 20 几乎没有 0% 不长高，低矮紧缩，时间长了黄花死亡
A10 20 几乎没有 0% 几乎不长高，低矮紧缩，时间长了黄花死亡
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第 1 期 王振民等:三色堇组培快繁技术研究
表 6 不同培养基对顶芽增殖的影响
培养基编号
培养基激素类别(mg /L)
6-BA NAA
继代前无根苗数 继代后无根苗数 增殖系数
B1 1． 0 0． 02 15 65 3． 3
B2 1． 0 0． 05 16 45 1． 8
B3 2． 0 0． 02 17 34 1． 0
B4 2． 0 0． 05 16 30 1． 9
B5 2． 0 0． 03 15 25 1． 7
图 1 10 d顶芽后长出侧枝 图 2 30 d后长满整个三角瓶
表 7 不同培养基对三色堇生根的影响
培养基编号 试验株数 生根株数 生根率 生根数量和情况
C1 20 3 15% 3 条，根较短 1 ～ 2 cm长
C2 20 12 60% 3 ～ 5 条，根较细短 1 ～ 1． 5 cm长
C3 20 10 50% 15 ～ 20 条，根粗壮，根长 2 ～ 4 cm
C4 20 0 0 未生根
C5 20 4 20% 2 ～ 3 条，0． 5 ～ 1 cm
C6 20 11 55% 2 ～ 5 条，根粗度中等，根长 1 ～ 2 cm
C7 20 5 40% 2 ～ 4 条，较细弱，1 ～ 2 cm
C8 20 2 10% 2 ～ 2 条，根很短 0． 5 ～ 1 cm
C9 20 0 0 未生根
C10 20 6 30% 2 ～ 3 条，根细弱，长 12 ～ 2 cm
3 讨论
为使组织培养获得成功，必须选择适宜的外
植体，应考虑接种材料的来源、器官或组织的类
型、外植体的大小、生理年龄等［7］。对多数一、二
年生草花来说，以幼嫩的组织和器官最好［2］。本
研究的结果显示，三色堇幼嫩的顶芽是比较容易
组培成功的外植体。
有研究表明，细胞分裂素与生长素的比值影
响着芽的诱导，其比值偏高时能显著诱导芽的分
化，反之则能明显促进根的生长。本研究发现，适
当浓度的 6-BA和 NAA组合对顶芽的生长起着关
键作用，6-BA 浓度为 2． 0 mg /L，NAA 浓度为
0． 2 mg /L的 MS 培养基对三色堇顶芽的生长起
到促进作用，在此培养基上芽生长健壮。在增殖
培养中，三色堇以 MS + 6-BA 1 mg /L + NAA
0． 02 mg /L培养基最好，三色堇的增殖方式属于
丛生芽增殖型，属于定芽成苗，遗传比较稳定，很
少发生变异。
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