全 文 ：亮毛杜鹃组织培养技术研究初探
梁晓华 李晓刚
(楚雄师范学院 , 云南 楚雄 675000)
摘 要:本文主要研究了亮毛杜鹃组织培养过程中表面灭菌剂和培养基的选取。实验通过 H2O2 、 Br2 (溴
水)、 NaClO、 HgCl2四种表面灭菌剂对亮毛杜鹃灭菌效果的比较 , 得到 HgCl2的灭菌效果好;同时用四种培养基分
别对茎尖 、 叶片 、 花芽和带侧芽的茎端作组织培养 , 得到叶片在 1/10MS 培养基中生长状况良好。
关键词:亮毛杜鹃;组织培养;表面灭菌剂;MS 培养基
中图分类号:S68 文章标识码:A 文章编号:1671-7406 (2003)06-0065-02
亮毛杜鹃(Rododendron microphyton)是杜鹃花科植物 , 常绿 , 花冠漏斗型 , 蔷薇色有红色或紫色斑点 , 主要分布
在云南气候温凉 , 海拔 2000-2800 米处。近年来 , 由于自然生态环境的破坏 , 也危及到这种植物 , 而植物组织培养对
于保存物种资源及帮助育种工作增加诱变手段 , 提高选育效率等方面都有重要的意义。在我国杜鹃的组织培养于 1982
年杨乃博就作了报道 , 1985年杨志云 、 厥国宁等也作了研究 , 但亮毛杜鹃的组织培养在国内尚属首次。[ 1]
1.材料及方法
1.1 主要仪器与药品
千分天平 、 高压灭菌锅 、 超菌台 、 温度湿度计 、 培养皿。
灭菌剂:洗衣粉 、 酒精 、 过氧化氢 、 溴水 、 次氯酸钠 、 氯化汞。
药品:NH4NO3 、KNO3 、(NH4)2SO4、CaCl2.2H2O、MgSO4.7H2O、KH2PO4、NaH2PO4.H2O、FeSO4.7H2O、
Na2EDTA、FeNa.DTPA、H3BO3 、MnSO4.7H2O、ZnSO4.7H2O、Na2MO4.2H2O、CuSO4.5H2O、CoCl2.6H2O、KI、肌醇 、盐酸硫氨素 、蔗
糖。
1.2 实验材料
亮毛杜鹃 (从禄丰樟木箐林场采回)
1.3 实验方法
1.3.1 表面灭菌:将外植体分为 4 组 (亮毛杜鹃的嫩叶 、 茎尖 、 带侧芽的茎端 、 花芽各为一组 , 每组 6—10 个),
先用自来水冲洗 , 洗去表面的粉尘 , 然后在超菌台上分别用:HgCl2 (1%)、 NaClO (2%)、 Br2 (溴水) (2%)、 H2O2
(10%)溶液灭菌 10min , 然后分别用无菌水冲洗 5次 , 其中用 HgCl2灭菌的材料冲洗 8次 , 然后分别接种于各种培养基
上。
1.3.2基本培养基的选取:培养基选用 ECONOMOU&.Read (1984)、 Anderson (1975)、 杨乃博 (1985)、 1/10MS , 附
加同浓度的NAA、 肌醇 、 烟酸各 10ml/ L。
1.3.3 培养条件:PH5—6 , 培养温度为 23—26℃光照强度2000Lx。
2.结果与讨论
2.1 第一次是分别用茎尖 、 花芽和叶片来进行实验 , 表面灭菌剂是 HgCl2 (1%), 培养基用 1/ 4ER、 1/4A、 杨乃
博三种培养基 , 实验两天后 , 叶片全部出现大面积黑斑 , 茎尖变黑 , 花芽无明显变化。
致使实验失败的主要因素有:HgCl2去菌效果好 , 无霉变 , 但由于外植体密生纤毛升汞较难除去 , 灭过菌的材料
中残留有少量的升汞;光照强度不够。
2.2 第二次实验分别用茎尖 、 叶片 、 带侧芽的茎段进行实验 , 表面灭菌剂是 HgCl2 (1%)时间减为 8min , 冲洗
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第十八卷第三期 楚 雄 师 范 学 院 学 报 Vol.18 No.3
2 0 0 3 年 6 月 JOURNAL OF CHUXIONG NORMAL UNIVERSITY Jun.2003
云南省教委基金资助项目 (02ZY095)收稿日期:2002-09-14作者简介:梁晓华 , 女 , 楚雄师范学院化学系高级讲师。
时加适量洗衣粉 , 培养基用 ER、 A、 杨乃博 、 1/10MS 四种培养基 , 前三种培养基的 PH 值在 5—6 之间 , 实验三天后
出现枯斑 , 一星期后枯死;1/10MS 培养基的 PH值接近 6 , 在 18天后枯死。
致使实验失败的主要原因是培养基浓度的影响 , 从用四种不同的培养基进行实验的结果可以看出 , 在 ER、 A 、 杨
乃博三种培养基中的样本在一星期后枯死 , 而在 1/10MS 培养基中的样本在 18 天后枯死 , 说明浓度对亮毛杜鹃组织培
养的影响较大 , 培养基浓度过大对样本起抑制和毒害作用。此外 , 还受到灭菌 、 光照强度和 PH 值的影响。
2.3 第三次实验用叶片和带侧芽的茎段进行实验 , 表面灭菌剂分别是:NaClO (2%)、 H2O2 (10%)、 Br2 (2%),
培养基用 1/10MS , PH 值约是 5 , 本次实验大部分外植体在一周后长霉 , 3 周后死亡 , 少部分存活下来。在实验中发
现溴水的灭菌效果不理想 , 致使培养 6天后带侧芽的茎和叶片出现霉变 , 霉变率达 67%, NaClO和 H2O2灭菌的霉变率
达 11%。
3.结论
用 Br (溴水)、 NaClO、 H2O2的灭菌效果不理想 , 样本在一周后长霉 , HgCl2对亮毛杜鹃的灭菌效果好但不易除去;
而通过四种培养基的使用比较得到外植体特别是叶片在 1/ 10MS 培养基中生长状况良好 , 此外 , 光照为 3000Lx 、 PH 值
为 5较适宜。
参考文献:
[ 1] 谭文澄 , 戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.中国林业出版社 , 1998年 8 月.205 页.
[ 2] 陈碧华.`香水 白鹤芋组织培养快速繁殖的研究.福建林学院学报 2000 , 20 (3).
[ 3] 陈正光.园艺植物离体培养学.北京:中国农业出版社 , 1996.80—86.
(责任编辑 陆 华)
Researches into the tissue culture technology of rododerdron microphyton
LIANG Xiaohua &LI Xaiogang
Abstract:This paper is a study of the selection of surface sterilants and culture media in the course of tissue culture of rododerdron
microphyton.The result of the comparison between the effectiveness of four surface sterilants , i.e., H2O2 , Br2 , NaClO and HgCl2 ,
shows that HgCl2 is the best of all.Moreover , tests were made with the above four culture media upon stem apex , leaves , blossom bud
and lateral bud.The result shows that leaves grow best in the 1/10MS culture medium.
Key Words:rododerdron microphyton , tissue culture , surface sterilant , MS culture medium.
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楚雄师范学院学报 2003年第 3期