全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2010, 22:326-329
文章编号:1001-6880(2010)02-0326-04
　
　
　收稿日期:2009-03-18　　　接受日期:2009-06-17
＊通讯作者 Tel:86-21-62232019;E-mail:wjqu@bio.ecnu.edu.cn
杜香不同提取部位的镇痛抗炎作用研究
张　敏 ,赵旌旌 ,武文斌 ,赵　赟 ,朱兴磊 ,瞿伟菁＊
华东师范大学生命科学学院 ,上海 200062
摘　要:采用小鼠醋酸扭体法和角叉菜胶致小鼠足掌肿胀模型筛选杜香三种提取部位镇痛抗炎作用。 结果显
示 , 甲醇提取物(10.0、1.0 mg/kg)和水提物(10.0 mg/kg)能显著抑制醋酸引起的小鼠扭体反应和角叉菜胶引
起的小鼠足趾水肿。水提物(10.0mg/kg)在致炎后 2 ～ 4 h内效果接近吲哚美辛。高效液相色谱结果提示甲醇
提取物的镇痛抗炎效果可能通过其所含黄酮类化合物实现。
关键词:杜香;提取;镇痛;抗炎;黄酮
中图分类号:R285.5;Q946.91 文献标识码:A
AnalgesicandAnti-inflammatoryActivitiesofExtracts
fromLedumpalustreL.inMice
ZHANGMin, ZHAOJing-jing, WUWen-bin, ZHAOYun, ZHUXing-lei, QUWei-jing＊
SchoolofLifeScience, EastChinaNormalUniversity, Shanghai200062 , China
Abstract:Inthepresentstudy, wehaveinvestigatedtheanalgesiceffectoftheessentialoil, methanolextractandaque-
ousextractofLedumpalustrebyusingmodelofaceticacid-inducedwrithingresponseandanti-inflammatoryefectof
thesethreeextractsbyusingmodeloflambda-carrageenan-inducedpawademainmice.Intheanalgesictest, methanol
extract(10.0 and1.0 mg/kg)andaqueousextract(10.0 mg/kg)decreasedtheaceticacid-inducedwrithingre-
sponse.Inanti-inflammatorytest, methanolextract(10.0 and1.0 mg/kg)andaqueousextract(10.0 mg/kg)de-
creasedthepawedemaatthesecond, third, fourth, fifth, andsixthhourafterlambda-carrageenanadministration.High
performanceliquidchromatographyresultsuggestedthattheanalgesicandanti-inflammatoryefectsofmethanolextract
mightberelatedtoitsflavonoidcomponents.
Keywords:analgesic;anti-inflammatory;aqueousandmethanolextracts;flavonoid;LedumpalustreL.
　　杜香(LedumpalustreL.)系杜鹃花科杜香属植
物 [ 1] 。我国野生杜香资源丰富 ,主要分布在中国东
北的长白山和大小兴安岭等地区 ,为我国北方蒙古
族和朝鲜族传统民药 , 别名白山苔 、喇叭茶 [ 2, 3] 。
枝 、叶入药 [ 2] ,主治 “活血调经;化痰止咳[ 4] 。”杜香
挥发油具有明显的镇咳 、祛痰作用 [ 3] 。杜香嫩枝煎
剂具有解痛 、祛痰 、脱敏等作用 [ 5] 。而杜香甲醇提
取物功效未见报道 ,本实验通过醋酸诱导小鼠扭体
反应模型和角叉菜胶诱导小鼠足趾肿胀模型比较杜
香不同提取部位的急性镇痛 、抗炎作用。同时 ,通过
高效液相色谱法探讨杜香甲醇提取物有效成分及其
镇痛抗炎机制。
1　材料和方法
1.1　材料
1.1.1　植物材料
杜香 (LedumpalustreL.), 采自吉林省安图县
(吉林省白河林业局提供),经本单位植物分类学研
究室李宏庆副教授鉴定 。
1.1.2　药品
吲哚美辛(上海新帕斯制药有限公司);λ-角叉
菜胶(λ-carageenan, SigmaCo.);芦丁(rutin,上海恒
信化学试剂公司);槲皮素(quercetin,上海恒信化学
试剂公司);杨梅素(myricetin, SigmaCo.);山柰酚
(kaemferol, SigmaCo.);异鼠李素(isorhamnetin,中
国药品生物制品检定所);甲醇:色谱纯;其他试剂
均为分析纯。
1.1.3　动物
实验 ICR小鼠体重 20 ～ 22 g(上海西普尔-必
凯实验动物有限公司 ,沪动合证字 153号)。
1.1.4　仪器
高效液相色谱仪(Agilent1100 series);Kromasil
C18液相色谱柱 (250×4.6 mm, 5 μm);电子天平
(SartoriusBP-211D);游标卡尺(精度 0.02 mm)。
1.2　方法
1.2.1　杜香各化学部位提取
杜香枝叶采摘后置于阴凉处风干 , 200g材料粉
碎为粗粉 ,水蒸气法蒸馏 4 h后收集精油;回收杜香
材料 ,常温下挥干 ,石油醚 70 ℃脱脂 2次 ,每次 2h;
脱脂后材料常温下挥干 ,分别用 1 L甲醇 70 ℃回流
提取 3次 ,每次 2 h,合并提取液;再次将材料于常温
下挥干 ,分别用 1 L蒸馏水 95 ℃回流提取 3次 ,每
次 2 h,合并提取液。抽真空浓缩 ,将提取物冷冻干
燥 , -4℃低温密封保存备用。
1.2.2　杜香提取物对醋酸诱发的小鼠扭体反应的
影响
参照 Koster法 [ 6] ,略作改动:取健康小鼠 96只 ,
雌雄各半 ,体重 20 ～ 25 g,随机分成 8组 ,每组 12
只 ,实验前 12 h禁食 。腹腔注射(i.p.)待测药物
(精油 0.02, 0.01mg/kg;甲醇提取物 10.0 , 1.0mg/
kg;水提物 10.0, 1.0mg/kg;v/v, 10mL/kg体重);注
射生理盐水组作为空白对照;吲哚美辛组作为阳性
对照药 。 30 min后腹腔注射 0.6%醋酸 (v/v, 10
mL/kg体重),观察给药后 20 min内小鼠扭体次数 ,
并计算抑制率 ,抑制率(%)=(生理盐水组平均扭
体次数 -给药组平均扭体次数)/生理盐水组平均
扭体次数 ×100%。
1.2.3　杜香提取物对 λ-角叉菜胶引起小鼠足趾肿
胀的影响
参照 Winter法[ 7] ,并略作改动:取健康雄性小
鼠 96只 ,体重 20 ～ 25g,随机分为 8组 ,每组 12只 ,
实验前 24 h禁食。腹腔注射待测药物(精油 0.02,
0.01mg/kg;甲醇提取物 10.0, 1.0 mg/kg;水提物
10.0, 1.0 mg/kg;v/v, 10 mL/kg体重);注射生理盐
水组作为空白对照;吲哚美辛组作为阳性对照
药 [ 8] 。 30min后从小鼠右后足掌心向踝关节方向
进针皮下注射 1% λ-角叉菜胶(生理盐水溶解)50
μL,其后分别用游标卡尺测量 1、2、3、4、5、6 h后小
鼠足掌心至足背厚度 。以致炎后不同时间的足掌厚
度减去给药前足掌厚度之差作为炎性肿胀度。
1.2.4　统计分析
数据以 “mean±S.D.”表示 ,用 SPSS软件进行
方差分析(One-WayANOVA)。
1.2.5　高效液相色谱法对杜香甲醇提取物定性分
析
色谱条件:流动相 ,甲醇 /0.4%磷酸溶液(60∶
40),流速 1.0 mL/ min,柱温 20 ℃,进样体积 20μL,
检测波长 368nm。样品液制备:用色谱纯甲醇溶解
甲醇提取物冷冻干粉配成 2%溶液 ,溶液用滤纸过
滤 ,上柱前 10000转离心 10 min。
2　结果
2.1　杜香提取物对醋酸诱发的小鼠扭体反应的影
响
表 1结果表明:10.0 mg/kg杜香甲醇提取物 ,
10.0 mg/kg水提物及吲哚美辛均能极显著 (P<
0.01)地减少醋酸腹腔注射所致小鼠扭体次数 ,抑
制率分别为 29.30%、53.50%及 72.5%。所有提取
物中 , 10.0mg/kg水提物止痛效果最佳 ,但不如阳性对
照药吲哚美辛 ,与之相比有显著差异(P<0.01)。
表 1　杜香提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应的镇痛效果
Table1　AnalagesiceffectoftheextractsofleavesofLedum
palustreonaceticacid-inducedwrithingresponsein
mice
组别
Group
剂量 Dose
(mg/kg, i.p.)
扭体次数
No.ofwrithing
(x±s.)
抑制率
Percentage
inhibition(%)
生理盐水 – 76.8±16.7 –
吲哚美辛 10.00 21.1±6.0＊＊ 72.50
精油 0.02 65.6±16.1 14.60
精油 0.01 67.1±12.3 12.60
甲醇提取物 10.00 54.3±16.6＊＊ 29.30
甲醇提取物 1.00 60.9±12.8＊ 20.70
水提物 10.00 35.7±14.7＊＊ 53.50
水提物 1.00 66.3±14.6 13.67
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=12。
2.2　杜香提取物对 λ-角叉菜胶引起小鼠足趾肿胀
的影响
表 2结果显示:10.0、1.0 mg/kg杜香甲醇提取
物 , 10.0 mg/kg水提物在 λ-角叉菜胶注射后 2 ～ 6 h
内 ,均能极显著地(P<0.01)抑制小鼠足趾肿胀。
其中以 10.0mg/kg水提物效果最强 ,在致炎后 2 ～ 4
h内 ,效果近似于吲哚美辛(与吲哚美辛组比较 , P>
0.05)。 1.0mg/kg水提物在致炎后 3 ～ 6 h内能极
显著地(P<0.01)抑制小鼠足趾肿胀。此外 , 0.02
mg/kg精油在致炎后 3 h时 , 0.01 mg/kg精油在致
炎后 3 ～ 4 h内也有一定的消肿作用(P<0.05),但
效果不持续。
327Vol.22 　　　　　　张　敏等:杜香不同提取部位的镇痛抗炎作用研究 　
表 2　杜香提取物对 λ-角叉菜胶引起小鼠足趾肿胀的影响
Table2　EfectoftheextractsofleavesofLedumpalustreonhindpawedemainducedbyλ– carrageenaninmice
组别
Group
剂量
Dose
(mg/kg, i.p.)
致炎后不同时间小鼠后掌肿胀度 Changesofedemavolume(mm, x±s)
1h 2h 3h 4h 5h 6h
生理盐水 - 1.22±0.26 1.88±0.24 2.17±0.17 1.94±0.20 1.78±0.19 1.65±0.17
吲哚美辛 10.00 1.127±0.33 0.96±0.31＊＊ 0.85±0.41＊＊ 1.06±0.41＊＊ 0.69±0.38＊＊ 0.78±0.36＊＊
精油 0.02 0.98±0.32＊ 1.75±0.39 1.89±0.35＊ 1.72±0.39 1.64±0.40 1.45±0.36
精油 0.01 1.31±0.15 1.89±0.14 1.94±0.13＊ 1.90±0.16＊＊ 1.84±0.13 1.79±0.14
甲醇提取物 10.00 1.30±0.31 1.38±0.24＊＊ 1.48±0.32＊＊ 1.31±0.32＊＊ 1.27±0.27＊＊ 1.26±0.31＊＊
甲醇提取物 1.00 1.10±0.29 1.26±0.15＊＊ 1.30±0.17＊＊ 1.17±0.27＊＊■ 1.12±0.23＊＊ 1.16±0.30＊＊
水提物 10.00 1.20±0.06 1.05±0.15＊＊■ 1.02±0.16＊＊■ 1.02±0.15＊＊■ 1.03±0.21＊＊ 1.03±0.22＊＊
水提物 1.00 1.15±0.21 1.93±0.26 1.67±0.30＊＊ 1.29±0.36＊＊ 1.27±0.41＊＊ 1.12±0.40＊＊
　　注:与对照组比较 , ＊ P<0.05, ＊＊ P<0.01;与吲哚美辛组比较 , ■ P>0.05;n=12。
2.3　高效液相色谱法对杜香甲醇提取物定性分析
结果如图 1A所示:检测波长 368nm下 , 5种黄
酮标准品保留时间(min)分别为:芦丁 3.480、杨梅
素 4.634、槲皮素 7.005、山柰酚 11.269和异鼠李素
12.106。
图 1　高效液相色谱法对杜香甲醇提取物定性分析
Fig.1　QualityanalysisofmethanolextractsofLedumpalustre
byhighperformanceliquidchromatography
A.5种黄酮类化合物标准品(芦丁、杨梅素 、槲皮素 、山柰酚和异
鼠李素)高效液相色谱图;B.杜香甲醇提取物高效液相色谱图;C.
标准品加入杜香水提物形成的叠加色谱图 A.HPLCchromatograms
ofstandards(rutin, myricetin, quercetin, kaempferolandisorhamne-
tin);B.HPLCchromatogramsofmethanolextractsofleavesofLedum
palustre;C.OverlappingHPLCchromatogramsofmethanolextractsof
leavesofLedumpalustreaddedwithstandards
　　图 1B显示:杜香甲醇提取物在同样条件下 ,在
保留时间为 3.605, 4.718, 7.002和 12.201min处有
吸收峰存在 ,且添加标准品溶液后 ,显示上述四个吸
收峰与标准品吸收峰有叠加(如图 C所示),判断样
品中存在芦丁 、杨梅素 、槲皮素和山柰酚 4种黄酮 。
用同样方法将杜香水提物与标准品 HPLC色谱
图比对 ,并在杜香水提物中添加标准品溶液后 ,获得
一个叠加峰 ,推测杜香水提物中可能含有槲皮素 。
3　讨论
　　药用植物中黄酮类和萜类化合物的镇痛 、抗炎
作用引人关注 [ 9, 10] ,其效果通过抑制炎症过程中多
种关键酶的活性实现 [ 11] , 并与非甾醇类抗炎药物
(non-steroidalanti-inflammatorydrugs, NSAIDs)靶点
类似 。
杜香精油的主要组分是萜类化合物[ 3] ,具一定
毒性 [ 2] , 10.0, 1.0 mg/kg精油(i.p.)在实验中发现
致死现象(结果未显示)。 0.02、0.01mg/kg杜香精
油(i.p.)为安全剂量 ,但对小鼠扭体和小鼠足趾肿
胀均无明显药效。杜香甲醇提取物能极显著地抑制
小鼠扭体反应以及小鼠足趾水肿 ,其中黄酮类化合
物含量达 29.3%±8.5%(分光光度法测定 [ 12] ,结
果未显示)。高效液相色谱结果显示:杜香甲醇提
取物中存在芦丁 、杨梅素 、槲皮素和山柰酚 4种黄
酮。这四种黄酮单体均见报道具有一定的镇痛 、抗
炎作用[ 11, 13, 14] ,提示:黄酮类化合物可能是杜香甲醇
提取物镇痛 、抗炎的药效部位 。而通过标准品比对 ,
推断杜香水提物中可能存在槲皮素。其他有效成分
有待进一步鉴定。
本实验采用的醋酸诱导的小鼠扭体反应是一种
内脏性疼痛模型[ 6] ,由 COX释放花生四烯酸和前列
328 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.22
腺素致痛[ 15] 。阳性对照药吲哚美辛具有抑制 COX
活性 ,减少前列腺素生成的作用[ 16] 。杜香甲醇提取
物 、水提物镇痛效果不及吲哚美辛 ,其作用靶点和作
用量效关系尚待深入研究 。
角叉菜胶诱导小鼠足趾肿胀实验是常用的急性
炎症模型。角叉菜胶注射会激发肝脏组织内自由基
积累 、血管舒缓激肽(bradykinin)释放 [ 17]以及血清
COX含量增加[ 18]等多条途径 ,促使前列腺素合成 ,
前列腺素和其他内分泌物积累是导致炎症水肿的主
要原因 [ 19] 。非甾醇类抗炎药吲哚美辛对角叉菜胶
诱导的水肿药效显著 [ 20] 。在本实验中 ,杜香甲醇提
取物和水提物均能显著地抑制局部水肿 ,且作用效
果持久 ,致炎后 2 ～ 6h内与对照组比较均有极显著
差异。 1mg/kg甲醇提取物在致炎后 3 h, 10 mg/kg
水提物在致炎后 2 ～ 4 h内抑制效果接近吲哚美辛 。
综合以上结果 ,杜香甲醇提取物具有一定的镇
痛 、抗炎效果 。黄酮类化合物可能是杜香镇痛 、抗炎
的主要药效部位。而其效果是通过抑制 COX,还是影
响前列腺素生成的其他环节 ,则有待于进一步研究。
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