全 文 ：18)，41. 66(C-19)，26. 98(C-20)，51. 50(C-21)，72. 42(C-
22)，37. 30(C-23)，22. 52(C-24)，17. 28(C-25)，18. 49(C-
26)，17. 40(C-27)，16. 41(C-28)，29. 78(C-29)，31. 45(C-
30)。其波谱数据与文献报道的何伯烷-6α，22-二醇的数据
一致［3］，因此鉴定为何伯烷-6α，22-二醇。
化合物 4:黄色针状晶体(甲醇)，mp 275 ～ 277 ℃。1H-
NMR(CD3COCD3，400 MHz，δ):7. 01(2H，d，J = 8. 6 Hz，H-
3，，5，)，8. 15(2H，d，J = 8. 6 Hz，H-2′，6′)，6. 28(1H，d，J = 2.
0 Hz，H-6)，6. 55(1 H，d，J = 2. 0 Hz，H-8)。 13 C-NMR
(CD3COCD3，100 MHz，δ):146. 13(C-2)，135. 16(C-3)，175.
17(C-4)，156. 11(C-5)，98. 24(C-6)，163. 89(C-7)，93. 34
(C-8)，160. 21(C-9)，103. 12(C-10)，121. 88(C-1′)，129. 24
(C-2′)，115. 16(C-3′)，159. 14(C-4′)，115. 15(C-5′)，129. 24
(C-6′)。以上数据与文献［4］报道一致，确定该化合物为山柰
酚(Kaempfero1)。
化合物 5:黄色粉末状结晶，mp 313 ～ 314 ℃。1H-NMR
(CD3SOCD3，400 MHz，δ):12. 49(1H，s，5-OH)，10. 86(1H，
s，7-OH)，9. 64(1H，s，3-OH)，9. 40(1H，s，4′-OH)，9. 36(1H，
s，3′-OH)，7. 54(1H，d，J = 8. 0 Hz，H-6′)，7. 78(1H，s，H-
2′)，6. 89(1H，d，J = 8. 0 Hz，H-5′)，6. 43(1H，s，H-8)，6. 19
(1H，s，H-6)，其熔点及波谱数据与文献［5］报道的槲皮素一
致，与槲皮素对照品对照多种溶剂系统展开 Rf 值一致，故鉴
定为槲皮素。
化合物 6:白色粉末状固体。 1H-NMR(CD3OD，400
MHz，δ):5. 56(1H，d，J = 1. 6 Hz，H-1)，7. 61(1H，d，J =
2. 3 Hz，H-3)，3. 11-3. 46(5H，m，H-2′-H-5′，H-5)，1. 75(1H，
m，H-6a)，1. 62(1H，m，H-6b)，4. 34-4. 44(2H，m，H-7)，5. 56
(1H，m，H-8)，2. 70(1H，m，H-9)，5. 26(1H，m，H-10a)，5. 31
(2H，m，H-10b)，4. 67(1H，d，J = 7. 8 Hz，H-1′)，3. 90(1H，
dd，J = 12. 2，1. 2 Hz，H-6′)，3. 65(1H，dd，J = 12. 2，6. 8
Hz，H-6′)。13C-NMR(CD3COD，100 MHz，δ):98. 40(C-1)，
154. 42(C-3)，106. 46(C-4)，28. 82(C-5)，26. 31(C-6)，70. 17
(C-7)，133. 76 (C-8)，44. 16 (C-9)，121. 35 (C-10)，
100. 10(C-1′)，75. 09(C-2′)，78. 24(C-3′)，71. 90(C-4′)，
78. 74(C-5′)，63. 08(C-6′)，168. 95(C = O)，其波谱数据与
獐牙菜苷(sweroside)的数据一致［6］，故鉴定为獐牙菜苷。
参考文献:
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尼泊尔酸模 α-葡萄糖苷酶抑制活性及抗菌活性研究
康文艺， 刘瑜新， 宋艳丽， 张 丽
(河南大学中药研究所，河南 开封 475004)
收稿日期:2010-01-12
基金项目:河南省教育厅基础研究计划(2008A360002);河南省教育厅青年骨干教师资助计划(2008-755)
作者简介:康文艺(1971 －)，男，理学博士，副教授、硕士生导师，从事天然活性成分的研究。Tel:(0378)3880680 E-mail:kangweny@ hot-
mail. com
关键词:尼泊尔酸模;地上部分;根;α-葡萄糖苷酶;抗菌活性
摘要:目的:对尼泊尔酸模根和地上部分的不同溶剂提取物的 α-葡萄糖苷酶抑制作用及抗菌活性进行研究。方法:采用
索氏提取法提取尼泊尔酸模不同部位，以 96 微孔板法测定 α-葡萄糖苷酶抑制作用，采用纸片扩散法测定其抑菌圈及
MIC值。结果:尼泊尔酸模根和地上部分各提取物均有较好的 α-葡萄糖苷酶抑制作用，各提取物的 IC50值大小为:RNAE
(2. 13 μg /mL)、RNAM(2. 13 μg /mL)、RNRE(3. 83 μg /mL)、RNRM(22. 5 μg /mL)、RNRP(36. 01 μg /mL)和 RNAP(56. 59
μg /mL)，远低于阳性对照 Acarbose(1 081. 27 μg /mL)。抑制动力学实验表明，尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物的
抑制类型为非竞争性抑制，其甲醇提取物为混合型抑制。尼泊尔酸模根石油醚和乙酸乙酯部分有抑菌活性，尼泊尔酸模
根石油醚部分对 SA、MRSA、ESBLs的MIC分别为 0. 25、0. 25、0. 125 mg /disc;尼泊尔酸模根乙酸乙酯部分对 SA、MRSA的
MIC分别为 0. 25、0. 25 mg /disc。结论:尼泊尔酸模各提取物对 α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果均很好，尼泊尔酸模根的
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抑菌活性较好。
中图分类号:R284. 1;Q946. 91 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)07-1249-03
尼泊尔酸模(Rumex nepalensis Spreng.)为蓼科酸模属植
物，分布于河南、陕西、甘肃、青海、湖北、四川、云南和西藏
等省。全草入药，有清热解毒、凉血止血之效［1］。尼泊尔酸
模干燥根是贵州土大黄的植物来源［2］。文献研究表明，尼泊
尔酸模的研究报道很少，未见其化学成分研究报道。药理研
究表明，尼泊尔酸模根含活性蛋白-凝集素，能使 3%兔红血
球发生凝集反应［3］。Ghosh L. 等在 2002 年和 2003 年连续
报道了尼泊尔酸模根甲醇提取物具有泻下和镇静作用［4-5］。
本文利用体外筛选模型对尼泊尔酸模根和地上部分的
提取物进行了 α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗菌活性研究，以
期为尼泊尔酸模开发利用提供科学依据。
1 仪器与材料
Multiskan MK3 酶标仪(美国 Thermo Electron 公司);
LRH-150 恒温培养箱(上海一恒科技有限公司);DELTA 320
型 PH 计(美国 Mettler-Toledo 公司);LRH-150 生化培养箱
(上海一恒科学仪器有限公司);LDZX-30KB 立式压力蒸汽
灭菌器(上海申安医疗器械厂)。
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，EC 3. 2. 1. 20);4-硝基苯-
α-D-吡 喃 葡 萄 糖 苷 (4-N-trophenyl-α-D-glucopyranoside，
PNPG，026K1516);阿卡波糖(Acarbose，Lot 16869)和二甲
亚砜(DMSO)均购自美国 Sigma 公司。金黄色葡萄球菌
(Staphlococcus aureus，SA)ATCC25923 购买于上海天呈生物
信息有限公司(批号 TC-26)，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌
(Methcillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)和 ESBLs由
河南大学附属淮河医院临床分离得到，经全自动微生物分析
仪 VITEK-AMS 鉴定，符合率 99%。
尼泊尔酸模样品于 2007 年 11 月采于河南省开封地区，
经河南大学中药研究所生药教研室李昌勤副教授鉴定为蓼
科酸模属植物尼泊尔酸模(R. nepalensis Spreng)。
2 实验部分
2. 1 提取
干燥的尼泊尔酸模根和地上部分粉碎，称取 30 g，石油
醚浸泡 12 h后，于索氏提取器中连续回流提取 3 次，每次 1
h，得根石油醚提取物(RNRP)和地上部分石油醚提取物
(RNAP)。挥干溶剂后，按上面的方法用乙酸乙酯提取，得
尼泊尔酸模根乙酸乙酯提取物(RNRE)和地上部分提取物
(RNAE)。挥干溶剂后，同样方法甲醇提取，得甲醇提取物
(RNRM和 RNAM)。尼泊尔酸模不同溶剂提取物的得率见
表 1。
2. 2 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法
以本课题建立的 96 微孔板筛选方法，405 nm 处检测其
OD值［6-8］。
尼泊尔酸模对 α-葡萄糖苷酶抑制的动力学实验
按照文献［7］，分别加入不同浓度的底物(分别为 10，5，
2. 5，1. 25 mmol /L和0. 625 mmol /L)按照上述方法测定不同
底物浓度下的反应速度。同时测定不加抑制剂时不同底物
浓度的反应速度，分别绘制提取物的抑制作用动力学曲线，
确定抑制类型。
表 1 尼泊尔酸模的 α-葡萄糖苷酶抑制活性(n =3)
提取物
提取率
/%
浓度
/(mg /mL)
抑制率
/ I%
IC50
/(μg /mL)
抑制类型
RNRP 0. 77 1. 5 102. 19 ± 1. 28 36. 01 NT
RNRE 2. 18 1. 5 97. 50 ± 0. 98 3. 83 NT
RNRM 28. 38 1. 5 100. 83 ± 1. 21 22. 50 NT
RNAP 2. 45 1. 5 102. 66 ± 0. 07 56. 59 NT
RNAE 1. 43 1. 5 101. 17 ± 1. 02 2. 13 非竞争型
RNAM 9. 41 1. 5 100. 42 ± 2. 12 2. 13 混合型
Acarbose — 1. 5 68. 43 ± 1. 12 1 081. 27 NT
注:NT表示未测定。
2. 3 抗菌实验方法
2. 3. 1 抑菌圈的测定
按照文献［9］的方法，用微量加样器分别取 5 μL 样品加
到直径 6 mm的圆形滤纸片上，挥干溶剂后，置于含菌平板，
同时用溶剂做空白对照。37℃恒温培养 24 h，观察结果，记
录抑菌圈的大小。每份样品平行操作 3 次，结果取平均值。
所有操作均在无菌条件下进行。
2. 3. 2 最低抑菌浓度(MIC)的测定
将出现抑菌圈的样品进行对半稀释，按 2. 3. 1 项操作进
行，每个浓度平行操作 3 次，取平均值。用相应溶剂作空白
对照;出现抑菌圈的最低样品浓度即为 MIC 值。所有操作
均在无菌条件下进行。
3 结果与讨论
3. 1 各提取物的 α-葡萄糖苷酶抑制活性
对尼泊尔酸模根和地上部分的石油醚、乙酸乙酯和甲醇
部分在相同浓度下(1. 5 mg /mL)测定其 α-葡萄糖苷酶的抑
制活性(表 1)。从表 1 可以看出尼泊尔酸模根和地上部分
在浓度为 1. 5 mg /mL时各提取物对 α-葡萄糖苷酶的抑制活
性均较高(抑制率接近 100%)，且均高于阳性对照药阿卡波
糖(68. 43%)，表明尼泊尔酸模具有较好的 α-葡萄糖苷酶抑
制活性。
为进一步研究抑制活性，对尼泊尔酸模各提取物的初筛
终浓度依次对半稀释进行 IC50值计算(表 1)。从表 1 可以
看出，各提取物的 IC50 值大小为:RNAE(2. 13 μg /mL)、
RNAM(2. 13 μg /mL)、RNRE(3. 83 μg /mL)、RNRM(22. 5
μg /mL)、RNRP(36. 01 μg /mL)和 RNAP(56. 59 μg /mL)，远
低于阳性对照 Acarbose(1081. 27 μg /mL)。
不同溶剂比较，尼泊尔酸模的乙酸乙酯提取物的 IC50值
最小，显示其抑制效果最好，其次为甲醇提取物，石油醚提取
物的 IC50值最大;不同部位比较，尼泊尔酸模地上部分的乙
酸乙酯提取物抑制活性(IC50 = 2. 13 μg /mL)和甲醇提取物
抑制活性(IC50 = 2. 13 μg /mL)较其根的同溶剂提取物抑制
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活性(IC50 = 23. 83 μg /mL 和 22. 50 μg /mL)高，但其石油醚
提取物抑制活性(IC50 = 56. 59 μg /mL)较根(IC50 = 36. 01
μg /mL)的弱。说明尼泊尔酸模的地上部分是其主要的药用
部位。
3. 2 提取物浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响
结果还显示，尼泊尔酸模不同部位不同溶剂的提取物对
α-葡萄糖苷酶的抑制活性均呈剂量依赖性，其中地上部分石
油醚提取物在终浓度小于 0. 2 mg /mL 时达到最大抑制率
100%，此后再增加提取物浓度抑制率不再变化，其他提取物
在终浓度小于 0. 1 mg /mL 时，其抑制率就达到了最大值
100%，此后，再增加提取物浓度抑制率也不再变化。
3. 3 酶抑制动力学［10］
通过绘制抑制剂的 Lineweave-Burk 双倒数曲线(如图
1)，得到不加抑制剂时的 α-葡萄糖糖苷酶的线性方程:y =
14. 218x + 4. 6123，求得其 Km = 3. 08 mmol /L，1 /Vmax =
4. 6123。
根据文献，由图 1 可知尼泊尔酸模地上部分的乙酸乙酯
提取物的抑制类型为非竞争性抑制类型，反应速度 Vmax随着
抑制剂浓度的增大而变小，米氏常数 Km 保持不变。并根据
非竞争性抑制动力学方程:1 /V′max = 1 /Vmax(1 +
［I］/Ki)，求得
尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物浓度为 2. 93 mg /mL
时，1 /V′max = 21. 854，Ki = 0. 7837 μg /mL;浓度为1. 46 mg /mL
时，1 /V′max = 8. 4754，Ki = 0. 794 5 μg /mL。抑制剂浓度越大，
Ki 值越小，抑制愈强。而其甲醇部分则属于混合型抑制类
型，当其浓度为 2. 93 mg /mL 时，1 /V′max = 63. 539，Km =
0. 888 μg /mL，当其浓度为浓度为 1. 46 mg /mL 时，1 /V′max =
11. 4600，Km =1. 663 6 μg /mL，反应速度 Vmax随着抑制剂浓度
的增大而变小，米氏常数 Km 也随抑制剂浓度的增大而降低。
尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物
尼泊尔酸模地上部分甲醇提取物
图 1 尼泊尔酸模地上部分乙酸乙酯提取物与甲醇提取物
的 Lineweave-Burk双倒数曲线
3. 4 抗菌活性
研究尼泊尔酸模根和地上部分不同提取部位对金黄色
葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和
β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs)的抑菌活性，结
果显示:其地上部分抑菌活性不明显，根具有较好的抑菌活
性(表 2 和表 3)。
表 2 尼泊尔酸模根提取物对各受试菌种的
抑菌圈(样品浓度均为 0. 25 mg /disc)
样品 部位
抑菌圈 /mm
SA MRSA ESBLs
尼泊尔酸模根 石油醚 8 8 9
乙酸乙酯 8 8 NA
甲醇 NA NA NA
注:NA表示无抑菌活性。
表 3 尼泊尔酸模根提取物对受试菌种的 MIC (mg/disc)
样品 部位
抑菌圈 /mm
SA MRSA ESBLs
尼泊尔酸模根 石油醚 0. 25 0. 25 0. 125
乙酸乙酯 0. 25 0. 25 NT
甲醇 NT NT NT
注:NT表示未测定。
4 结论
实验结果表明，尼泊尔酸模根和地上部分的乙酸乙酯提
取物具有较高的 α-葡萄糖苷酶抑制活性;尼泊尔酸模地上
部分的乙酸乙酯部分的抑制类型为非竞争性抑制，其甲醇部
分为混合型抑制。尼泊尔酸模根的抑菌活性较好，其活性部
位为石油醚部位和乙酸乙酯部位。
参考文献:
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