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竹叶柴胡与北柴胡解热镇痛作用的比较



全 文 :一步研究牙髓炎的动物模型提供基础。
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[收稿日期]2012-09-12
[基金项目]国家科技部2010年度科技型中小企业技术创新基金(编号:10C26214204534) [作者简介]杜士明,男,博士在读,主任药师,电
话:0719-8801163,E-mail:dsmch@126.com [通讯作者]陈科力,男,博导,教授,E-mail:kelichen@126.com
竹叶柴胡与北柴胡解热镇痛作用的比较
杜士明1,2,杜婷1,王刚1,叶方1,孙荣进1,陈科力2 (1.湖北医药学院附属十堰市太和医院,湖北 十堰,442000;2.湖
北中医药大学中药资源和中药复方教育部重点实验室,湖北 武汉,430065)
[摘要] 目的:比较竹叶柴胡与北柴胡解热镇痛作用的差异。方法:采用2,4-二硝基苯酚致热大鼠模型比较2种柴胡水煎液
的解热作用;采用醋酸扭体试验及热板法比较2种柴胡水煎液及醇提液的镇痛作用。结果:竹叶柴胡和北柴胡的水煎液均具
有明显的解热作用,两者解热作用没有显著性差异(P>0.05);醋酸扭体试验的结果表明竹叶柴胡和北柴胡的水煎液、醇提液
均有镇痛作用,且两者差异没有显著性;热板法试验结果表明2种柴胡的水煎液有镇痛作用且无明显差异(P>0.05),但醇提
液无明显镇痛作用。结论:竹叶柴胡与北柴胡解热镇痛作用相似。
[关键词] 北柴胡;竹叶柴胡;解热;镇痛
[中图分类号]R961  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2013)07-0526-04
Comparative study on the antipyretic and analgesic effects between Bupleurum chinense DC.and
Bupleurum marginatum Wal.ex DC.
DU Shi-ming1,2,DU Ting1,WANG Gang1,YE Fang1,SUN Rong-jin1,CHEN Ke-li 1(1.Department of Phar-
macy,Taihe Hospital of Hubei Medical University,Hubei Shiyan 442000,China;2.Hubei University of Chinese Medicine,
Hubei Wuhan 430065,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To compare the antipyretic and analgesic effects between Bupleurum chinense DC.and Bupleurum
marginatum Wal.ex DC.METHODS The antipyretic effects of Bupleurumdecoction were observed by 2,4-dinitrophenol-
induced rat pyrexia,and the analgesic effect was verified by the test of HAc-induced writhing response in mice and hot-plate.
RESULTS The decoction of Bupleurum chinense DC.and Bupleurum marginatum Wal.ex DC.al showed significant antipy-
retic effects,and there was no significant difference between them(P>0.05);Both the decoction and alcohol extract of Bup-
·625· 中国医院药学杂志2013年第33卷第7期Chin Hosp Pharm J,2013Apr,Vol 33,No.07
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2013.07.008
leurum chinense DC.and Bupleurum marginatum Wal.ex DC.possessed the analgesic effect in the test of HAc-induced writ-
hing response;The decoction of Bupleurum chinense DC.and Bupleurum marginatum Wal.ex DC.al showed the analgesic
effect in the test of hot-plate and there were no significant differences(P>0.05),but alcohol extracts of them had no signifi-
cant analgesic effect.CONCLUSION There were similar antipyretic and analgesic effects between Bupleurum chinense DC.
and Bupleurum marginatum Wal.ex DC.
KEY WORDS:Bupleurum chinense DC.;Bupleurum marginatum Wal.ex DC.;antipyretic effect;analgesic effect
  竹叶柴胡(Bupleurum marginatum Wal.ex
DC.)为伞形科柴胡属植物,主要分布于四川、湖北、
陕西、云南、贵州、湖南等地[1]。长期以来,鄂西北地
区所产的柴胡习惯以“北柴胡”之名经销全国各地,
并在中药市场上享有较高的声誉。但本课题组对鄂
西北地区柴胡资源调查结果表明,本地区野生柴胡
品种均为竹叶柴胡,尚未发现有野生和人工栽培的
北柴胡[2]。《中国药典》2010年版收载的柴胡品种
为北柴胡(Bupleurum chinense DC.)或狭叶柴胡
(B.scorzonerifolium Wild.南柴胡)的干燥根入
药,而竹叶柴胡被云南、四川、贵州等省的地方标准
所收载[3]。文献报道鄂西北地区所产竹叶柴胡皂苷
含量较高[4],本课题组前期研究也表明鄂西北各产
地竹叶柴胡的皂苷含量均符合药典北柴胡含量测定
项下的有关规定,本实验在此基础上进一步比较竹
叶柴胡和北柴胡的解热及镇痛药理作用,观察其是
否有差异,为竹叶柴胡的临床应用和后续的开发研
究提供借鉴和依据。
1 材料与试剂
JJ200电子天平(美国兄弟公司);MH-1000
调温型电热套(北京科伟永兴仪器有限公司);RE-
52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);MT-
101型电子体温计(杭州世佳电子有限公司 );501
型超级恒温器(上海市实验仪器厂)。
竹叶柴胡,产地:湖北房县,购于湖北神农本草
中药饮片有限公司(批号20111220);北柴胡,产地:
山西运城,由山西运城北柴胡种植基地提供(批号
20111020),上述饮片经湖北中医药大学陈科力教授
鉴定分别为竹叶柴胡 (Bupleurum marginatum
Wal.ex DC.)与 北 柴 胡 (Bupleurum chinense
DC.);2,4-二硝基苯酚;氢氧化钠;醋酸;对乙酰氨
基酚 片 (四 川 省 旺 林 堂 药 业 有 限 公 司,批 号
120202)。
SD大鼠,体质量(200±20)g,雌雄各半,动物合
格证号:No.4200900016;昆明种小鼠,体质量(20±
2)g,雌雄兼取,动物合格证号:No.4200900008,实
验动物使用许可证号:SYXK(鄂)2011-0031,均由
湖北医药学院动物实验中心提供。
2 方法
2.1 饮片提取液的制备
2.1.1 水煎液的制备 分别称取适量竹叶柴胡和
北柴胡,加8倍量的水煎煮2次,每次1.5h,过滤、
合并滤液,减压浓缩,加水调配成浓度为每毫升相当
于0.5g生药的储备液,备用。
2.1.2 醇提液的制备 分别称取适量竹叶柴胡和
北柴胡,加8倍量的60%乙醇(调pH 7~8),80℃
回流2h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,合并
滤液,减压浓缩至无乙醇味[5],加水调浓度制成每毫
升相当于0.5g生药的储备液,备用。
2.2 大鼠解热作用研究
2.2.1 2,4-二硝基苯酚溶液制备 称取2,4-二硝
基苯酚150mg,加80mL生理盐水,滴加5mol·
L-1的氢氧化钠溶液,边加边搅拌使之溶解,再加生
理盐水至100mL,摇匀,备用。
2.2.2 实验动物的筛选 参照文献[6]中的方法,
实验前用电子体温计测正常肛温,每天2次,连续3
d,测量肛温(插入大鼠肛门距离2cm左右)。将体
温变化(ΔT>0.5℃)及单次体温高于38℃的大鼠
剔除。
2.2.3 实验方法 筛选出体温合格的大鼠48只,
随机分为6组,每组动物8只,分别为竹叶柴胡水煎
液高剂量(ZG,5.0g·kg-1·d-1)、低剂量组(ZD,2.5
g·kg-1·d-1);北柴胡水煎液高剂量(BG,5.0g·
kg-1·d-1)、低剂量组(BD,2.5g·kg-1·d-1);正常
对照组(K)、模型对照组(M)给予同等容量的纯化
水(10.0mL·kg-1)。实验前24h大鼠禁食不禁
水,造模前称重,1h内测大鼠直肠温度2次,取均
值作为基础体温值。每天灌胃1次,连续给药4d,
末次灌胃给药60min后,除正常对照组外,其他各
组大鼠按0.1mL·kg-1背部皮下注射0.15%的2,4-
二硝基苯酚溶液,然后于0.5,1,1.5,2,2.5,3h测
体温一次,以基础体温为基数,计算各测定时间点大
鼠的体温变化ΔT(℃)。以时间为横坐标,ΔT为纵
坐标绘制体温变化曲线,并计算各实验组在体温达
到峰值后的下降幅度ΔT′(℃)。
2.3 小鼠镇痛试验
·725·中国医院药学杂志2013年第33卷第7期Chin Hosp Pharm J,2013Apr,Vol 33,No.07
2.3.1 热板法 调节超级恒温器,控制温度在(55
±0.5)℃,用秒表记录小鼠自投入热板后第一次出
现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛阈值。挑选在5
~30s内反应稳定、不跳跃的小鼠80只备用。
将80只小鼠随机分成10组,每组8只,分别为
竹叶柴胡水煎液高、低剂量组(剂量为10.0g·kg-1
和5.0g·kg-1);竹叶柴胡醇提液高、低剂量组(剂量
为10.0g·kg-1和5.0g·kg-1);北柴胡水煎液高、低
剂量组(剂量为10.0g·kg-1和5.0g·kg-1);北柴胡
醇提液高、低剂量组(剂量为10.0g·kg-1和5.0g·
kg-1);阳性对照组给予0.2g·kg-1的对乙酰氨基
酚,每天灌胃1次,连续给药4d,模型对照组给予等
容量的纯化水。于末次给药后1.0h分别测定各鼠
痛阈值,计算痛阈抑制率。痛阈抑制率(%)=(给药
后痛阈值-给药前痛阈值)/给药前痛阈值×100%。
2.3.2 扭体法 小鼠80只,随机分为10组,每组
8只,雌雄各半,称重并记录,分组给药同“2.3.1”
项,每天灌胃1次,共4d。末次给药后1.0h,腹腔
注射0.5%醋酸10mL·kg-1,观察15min内各组动
物扭体反应(腹部收缩,身体扭曲,伸展后肢,臀部抬
高)次数,计算扭体抑制率。扭体抑制率(%)=(阴
性对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/对
照组平均扭体次数×100%,比较各组受试药物之间
的扭体抑制率。
2.4 数据处理 实验数据均用珚x±s表示,采用
SPSS 11.0统计学软件对各组参数进行单因素方差
分析,比较显著性差异。
3 结果
3.1 解热作用 如图1、表1所示,各组大鼠皮下
注射2,4-二硝基苯酚后,2.0h内体温显著上升,1.5
~2.0h达到峰值,与基础体温比较,除正常对照组
外,各组大鼠的体温变化均大于0.8℃,表明造模成
功。与模型组比较,竹叶柴胡、北柴胡给药组大鼠体
温变化(ΔT,T1.5h与T3.0h体温差值)、ΔT1.5h(T1.5h
与基础值体温差值),计算体温下降幅度(%)=ΔT/
ΔT1.5h×100%)均有显著性差异(P<0.05),表明2
种柴胡均有降低大鼠体温的作用;竹叶柴胡与北柴
胡给药组之间比较结果表明,两者降低大鼠体温的
作用差异无显著性(P>0.05),提示竹叶柴胡与北
柴胡的解热作用相似;不同剂量组竹叶柴胡与北柴
胡给药组的解热作用差异也无显著性(P>0.05),
见表2。
图1 各实验组大鼠不同时间点的体温变化趋势
—◆—K;—■—M;—▲—BG;—□—BD;—○—ZG—●—ZD
Fig 1 The changing trend of the temperature at different time inter-
vals
—◆—K;—■—M;—▲—BG;—□—BD;—○—ZG—●—ZD
3.2 热板致痛模型镇痛作用的比较 表3表明,与
模型对照组比较,竹叶柴胡、北柴胡水煎液组差异均
有显著性(P<0.05),而两者醇提液组差异均无显
著(P>0.05),提示2种柴胡水煎液均有镇痛作用,
而醇提液镇痛作用不明显;痛阈抑制率比较结果表
明,竹叶柴胡与北柴胡水煎液之间差异无显著性(P
>0.05)。
3.3 醋酸致痛模型镇痛作用的比较 表4结果显
示,与模型组比较,各给药组扭体百分率均有显著性
差异(P<0.05),提示2种柴胡的水煎液和醇提液
对醋酸所致疼痛模型的小鼠均有镇痛作用;北柴胡
与竹叶柴胡之间差异无显著性(P>0.05);2种柴胡
不同剂量组间的镇痛效果差异也无显著性(P>
0.05),表明北柴胡与竹叶柴胡在醋酸致痛模型的镇
痛作用方面相近。
4 讨论
研究表明,柴胡挥发油部分、黄酮部分和其他物
质在解热效应中发挥重要作用,能协同增强解热效
果;而皂苷部分具有明显的拮抗作用[7]。本实验前
期研究表明,柴胡醇提液中皂苷含量较高,而水煎液
与临床常用的剂型更为接近,所以在考察解热作用
表1 各治疗组大鼠不同时间点体温的变化(珚x±s,n=8)
Tab 1 The change of the temperature at different time intervals(珚x±s,n=8)
组别
剂量
/g·kg-1
不同时间点(min)的体温(℃)
基础值 30  60  90  120  150  180
正常对照组(K) 等容量 37.96±0.20  37.0±0.5  37.17±0.27  37.3±0.5  37.2±0.6  37.0±0.6  37.0±0.4
模型组(M) 等容量 36.9±0.4  37.30±0.11  37.9±0.5  38.6±0.5  38.4±0.7  38.3±0.4  38.18±0.30
竹叶柴胡水液(ZG) 5.0  37.4±0.4  37.4±0.5  38.2±0.6  38.6±0.5  38.1±0.5  37.56±0.30 37.76±0.26
      (ZD) 2.5  37.29±0.21  36.8±0.4  38.08±0.31  38.6±0.7  38.6±0.4  37.90±0.28 37.56±0.34
北柴胡水煎液(BG) 5.0  37.2±0.4  37.28±0.30  37.9±0.4  38.4±0.7  38.2±0.4  37.6±0.4  37.42±0.33
      (BD) 2.5  37.0±0.4  37.2±0.4  37.6±0.5  38.0±0.4  37.3±0.4  37.3±0.4  37.09±0.23
·825· 中国医院药学杂志2013年第33卷第7期Chin Hosp Pharm J,2013Apr,Vol 33,No.07
表2 各实验组大鼠体温的下降幅度(n=8)
Tab 2 The drop of the temperature(n=8)
组别 ΔT/℃ ΔT1.5h/℃ 下降幅度/%
正常对照组(K) 0.30±0.22  0.32±0.237  93.75
模型对照组(M) 0.38±0.36  1.6±0.6  23.45
北柴胡组
 高剂量(BG) 1.00±0.32a 1.2±0.5  83.78
 低剂量(BD) 1.02±0.31a 1.3±0.5  79.30
竹叶柴胡组
 高剂量(ZG) 0.95±0.30a 1.2±0.5  79.17
 低剂量(ZD) 0.8±0.4  0.9±0.4  94.18
注:与模型组比较,aP<0.05
表3 热板试验结果(n=8)
Tab 3 The results of hot plate test(n=8)
组别
剂量
/g·kg-1
痛阈/s
给药前 给药后
痛阈抑
制率/%
模型对照组 等容量 33.0±9.5  39.3±12.4  19.19
阳性对照组 0.2  23.5±8.0  25.6±9.2  8.87
竹叶柴胡水煎液 10  24.2±6.6  36.7±10.8  51.43a
5  18.8±8.7  37.0±8.2  97.33b
竹叶柴胡醇提物 10  26.3±10.1  30.8±7.9  16.88
5  34.9±12.4  37.8±11.6  7.50
北柴胡水煎液 10  34.0±11.4  46.2±12.1  36.03a
5  22.0±9.7  51.7±13.5  134.8b
北柴胡醇提物 10  32.2±10.4  37.0±10.3  13.06
5  41.4±13.0  45.2±12.6  8.47
注:与模型组比较,aP<0.05,b P<0.01
表4 醋酸致痛试验结果(n=8)
Tab 4 The results of HAc-induced writhing response(n=
8)
组别
剂量
/g·kg-1
扭体次数
(次/15min)
扭体抑制率
/%
模型对照组 等容量 60.1±15.5  0
阳性对照组 0.2  29.8±8.4  50.37b
竹叶柴胡水煎液 10  39.0±9.7  35.14a
5  33.0±11.0  45.12a
竹叶柴胡醇提物 10  41.7±10.8  30.71a
5  30.4±8.5  49.48b
北柴胡水煎液 10  34.1±13.1  43.25a
5  20.5±7.9  65.91b
北柴胡醇提物 10  33.2±12.6  44.70a
5  30.8±11.7  48.86b
注:与模型组比较,aP<0.05,b P<0.01
时只选择了2种柴胡的不同提取液进行解热作用比
较。结果表明2种柴胡的不同提取液均有明显的解
热、镇痛作用,两者的解热作用相近,差异无显著性,
可能与2种柴胡的解热成分相似有关;研究也发现2
种不同剂量组之间解热作用无显著性差异,由于柴胡
解热作用是通过调节下丘脑体温调节中枢,影响致热
原、抗炎及调节机体免疫力实现的[8],这说明了这2
种柴胡可能通过调节下丘脑体温调节中枢,达到一定
的解热效应之后,与用药剂量无明显的相关性。
不同剂量的竹叶柴胡与北柴胡解热作用结果
(表2)表明,竹叶柴胡低剂量组大鼠体温降幅较为
显著(94.18%),更接近于基础体温,其他给药组在
第3小时节段体温均低于模型组,各组没有明显差
异。在热板法和醋酸扭体镇痛试验中,竹叶柴胡与
北柴胡低剂量组均有明显的镇痛作用,均好于高剂
量组,但2种柴胡各组之间差异无显著性(P>
0.05)。这些说明柴胡对用药剂量非常敏感,药用时
要根据不同的治疗用途进行辨证给药,当以解热为
主要用途时可用稍大的剂量,而以镇痛为主要用途
时应使用适当较小的剂量,以合理使用柴胡达到较
佳的治疗效果。
在镇痛试验中,热板法是经典快痛实验模型,适
合于评价中枢镇痛的药物,而醋酸扭体法是引起较
深的、大面积而持久的疼痛刺激,适合于外周镇痛研
究,故本实验采用热板法和醋酸扭体法综合考察竹
叶柴胡和北柴胡水煎液的镇痛作用。结果显示,竹
叶柴胡、北柴胡饮片的水煎液和醇提液在醋酸扭体
试验中均有镇痛作用,两者的水煎液和醇提液之间
无显著性差异;两者的水煎液在热板试验中均显示
出较好的镇痛作用,而醇提液无明显作用,提示镇痛
作用的活性成分以水溶性成分居多。
综合分析表明,2种柴胡不同提取液的药理作
用效果优于醇提液,说明柴胡饮片发挥作用时除柴
胡皂苷外,可能还有柴胡的挥发油、柴胡多糖以及多
种黄酮成分等综合发挥作用,说明柴胡采用传统中
药汤剂的药用方法具有科学性;而2种柴胡醇提部
分的镇痛作用可能偏向于外周神经作用,其具体作
用机制有待更深一步的研究。本实验前期对鄂西北
地区柴胡饮片的资源调查结果表明,鄂西北地区以
“北柴胡”之名广泛使用的柴胡实际为竹叶柴胡的
根,本实验表明竹叶柴胡与北柴胡解热镇痛作用相
似,其作用强度没有显著性差异,说明竹叶柴胡可以
作为北柴胡药用资源代替使用,这也为开发新的柴
胡饮片资源提供了理论基础。
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