全 文 ：HPLC法测定满山红滴丸中金丝桃苷的含量
赵承孝，梁泰刚，刘恩荔，李青山* (山西医科大学药学院，太原 030001;* 通讯作者，E-mail:Sxlqs2012@ 163． com)
摘要: 目的 建立 HPLC测定满山红滴丸中金丝桃苷含量的方法。 方法 HPLC测定满山红滴丸中金丝桃苷含量。选择
乙腈 －磷酸 －水系统，采用梯度洗脱的办法;检测波长为 355 nm;色谱柱:Diamonsil(钻石)C18(150 mm × 46 mm，5 μm);柱温
为 25 ℃;流速为 1． 0 ml /min。 结果 制剂中其他成分不干扰测定，杂质峰和主峰达到有效分离。金丝桃苷在 9． 60 － 192
μg /ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系，Y = 2 266 319． 24X － 19 602． 96(r = 0． 999 9) ，各项指标达到方法学要求。 结论
HPLC适用于测定满山红滴丸中金丝桃苷的含量，结果准确。
关键词: 高效液相色谱; 满山红滴丸; 金丝桃苷; 含量测定
中图分类号: Ｒ927． 2 文献标志码: A 文章编号: 1007 － 6611(2014)08 － 0729 － 04 DOI:10． 13753 / j． issn． 1007 － 6611． 2014． 08． 015
Content determination of hyperin in folium rhododendri daurici dropping pills with HPLC
ZHAO Chengxiao，LIANG Taigang，LIU Enli，LI Qingshan* (School of Pharmaceutical Science，Shanxi Medical University，Taiyuan
030001，China;* Corresponding author，E-mail:Sxlqs2012@ 163． com)
Abstract: Objective To establish a HPLC method for determining the content of hyperin in folium rhododendri daurici dropping
pills． Methods The analysis was conducted with a Dimonsil C18 column at 25 ℃ with acetonitrile － phosphoric acid － water solution
as mobile phase． The detection wavelength was set at 355 nm，and the flow rate was 1 ml /min． Ｒesults Hyperin was thoroughly sepa-
rated with its related substances． The calibrated linear curve of hyperin was in the range of 9． 60 － 192 μg /ml，Y = 2 266 319． 24X －
19 602． 96(r = 0． 9999)． Conclusion The method is accurate and reliable for determining the hyperin content in folium rhododendri
daurici dropping pills．
Key words: high performance liquid chromatography; folium rhododendri daurici dropping pills; hyperin; content determina-
tion
满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃的干燥叶
(Ｒhododendron dauricum L) ，满山红具有止咳、祛痰、
平喘的作用，用于治疗急、慢性支气管炎、哮喘［1］。
满山红滴丸是由其总黄酮有效部位开发而成的中药
新药［2］，有服用剂量小、速效等优点，药效肯定［3，4］，
满足急慢性支气管炎及哮喘快速释放的要求，剂型
选择合理。本研究的满山红滴丸保留并富集了满山
红的黄酮有效成分，金丝桃苷是满山红中镇咳的有
效成分。同分异构体异金丝桃苷与金丝桃苷结构相
似，仅存在糖环上羟基键构型的差异，HPLC 中较难
分离，往往包含在金丝桃苷主峰里。本试验制定滴
丸中金丝桃苷测定方法，通过梯度洗脱的方法将金
丝桃苷与异金丝桃苷分离开来，方法分辨效能高、灵
敏、准确，为质量控制提供依据。
1 仪器药品
1． 1 仪器
TU －1901 紫外吸收光谱仪(北京普析通用仪器
有限责任公司)，高效液相色谱仪(Waters 2695) ，
MP3002 分析天平(0． 1 mg)。
1． 2 药品与试药
满山红滴丸(山西医科大学药学院自制，批号:
20050811，20050812，20050813) ，金丝桃苷标准品
(中国生物制品药品检定所，批号:111521 －
200303) ，乙醇(新乡市三伟消毒有限公司) ;乙腈
(色谱纯，天津科密欧) ;四氢呋喃(色谱纯，天津科
密欧);其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 检测波长的选择
精密称取金丝桃苷标准品适量，加 50%甲醇溶
液制成浓度为 480 μg /ml的储备液。以 50%甲醇作
为空白对照，200 － 600 nm进行光谱扫描，吸收曲线
见图 1，选择(355 ± 2)nm作为检测波长。
图 1 金丝桃苷对照品溶液全程光谱扫描图
Figure 1 The absorption spectra of hyperin
·927·山西医科大学学报，2014 年 8 月，第 45 卷 第 8 期
2． 2 流动相的确定
经预试验，选择乙腈 －磷酸 －水系统，A为乙腈
(加 0． 05%磷酸)，B 为 0． 05%磷酸水，采用梯度洗
脱的办法将干扰小峰分开，确定的梯度洗脱系统见
表 1，此流动相系统可得到较理想的峰形和分离度。
表 1 流动相梯度系统
Table 1 Gradient system of mobile phase
时间 /min 流量 /(ml /min) A/% B /% 曲线
0． 01 1． 0 18． 0 82． 0 9
10． 00 1． 0 13． 0 87． 0 9
35． 00 1． 0 100． 0 0． 0 9
40． 00 1． 0 18． 0 82． 0 9
2． 3 色谱条件
色谱柱:Diamonsil(钻石)C18(150 mm ×46 mm，
5 μm);流速:1． 0 ml /min;柱温:25 ℃;检测波长:
355 nm。
2． 4 系统适应性试验
在选定条件下，金丝桃苷和样品中其他组份可
基线分离，金丝桃苷与其相邻色谱峰的分离度大于
1． 5，金丝桃苷出峰时间为 16． 5 min，对称因子为
1． 02，3 次连续进样峰面积 ＲSD = 0． 55%。金丝桃
苷对照品的图谱见图 2，金丝桃苷峰单一;满山红滴
丸样品的图谱见图 3，主峰良好分离，无干扰。
图 2 金丝桃苷的色谱图
Figure 2 The HPLC of hyperin
图 3 满山红滴丸的色谱图
Figure 3 The HPLC of folium rhododendri daurici dropping
pills
2． 5 提取方法的确定
2． 5． 1 滴丸提取方法及溶媒的确定 精密称取滴
丸粉末每份 40 mg，共 3 组，每组 3 份。第一组:置于
25 ml容量瓶，加水超声提取 40 min，放冷，定容，滤
过，取续滤液，作为供试液 A1。第二组:置于 25 ml
容量瓶，加 50%甲醇超声提取 40 min，放冷，定容，
滤过，取续滤液，作为供试液 A2。第三组:置于 25
ml容量瓶，加无水甲醇超声提取 40 min，放冷，定
容，滤过，取续滤液，作为供试液 A3。
上述供试液溶液进样 20 μl，按上述色谱条件测
定其中金丝桃苷的峰面积，按 2． 7 标准曲线计算其
含量，结果见表 2。
结果表明:A1 和 A2 测得含量更高，而水更安
全易得，故采用 A1 方法提取。
表 2 不同提取方法的比较
Table 2 Comparison of extractive effects by different
methods
供试液 序号
滴丸
重 /mg
峰面积
金丝桃
苷含量 /%
每组平均
含量 /%
A1 1 40． 0 1 366 582 1． 91 1． 88
2 39． 9 1 322 964 1． 86
3 39． 9 1 341 867 1． 88
A2 1 40． 6 1 338 158 1． 85 1． 88
2 40． 2 1 375 603 1． 92
3 40． 2 1 358 115 1． 89
A3 1 39． 5 1 178 435 1． 67 1． 73
2 40． 0 1 245 270 1． 74
3 40． 0 1 273 521 1． 78
2． 5． 2 滴丸提取时间的确定 精密称取满山红滴
丸粉末每份 40 mg，共 3 组每组 3 份，操作同 2． 5． 1
中第一组。第一组:超声 20 min，作为供试液 B1;第
二组:超声 40 min，作为供试液 B2;第三组:超声 60
min，作为供试液 B3。
上述供试液溶液进样 20 μl，按上述色谱条件测
定其中金丝桃苷的峰面积，按 2． 7 标准曲线计算其
含量，结果见表 3。结果表明，B2 组金丝桃苷含量
最高，故选用提取时间为 40 min。
最终提取条件为:精密称取滴丸粉末 40 mg，置
于 25 ml容量瓶，加水超声提取 40 min，定容滤过，
取续滤液。
2． 6 供试品溶液的制备
·037· J Shanxi Med Univ，Aug 2014，Vol 45 No 8
表 3 不同超声时间对提取的影响
Table 3 The extractive effects of different ultrasonic time
供试液 序号
滴丸
重 /mg
峰面积
金丝桃
苷含量 /%
每组平
均含量 /%
B1 1 39． 8 1 298 943 1． 83 1． 84
2 40． 8 1 347 168 1． 85
3 40． 2 1 321 323 1． 84
B2 1 40． 4 1 339 452 1． 86 1． 93
2 40． 0 1 365 176 1． 91
3 39． 9 1 454 175 2． 04
B3 1 40． 6 1 428 564 1． 97 1． 91
2 39． 7 1 361 581 1． 92
3 40． 6 1 328 871 1． 83
精密称定满山红滴丸粉末 40 mg 置 25 ml 容量
瓶中，用蒸馏水超声 40 min 溶解并定容，摇匀，滤
过，取续滤液备用。
2． 7 标准曲线及线性范围的考察
分别精密量取标准品储备液 0． 2，0． 5，1． 0，
2． 0，4． 0 ml至 10 ml 容量瓶中，以蒸馏水稀释至刻
度，分别进样 20 μl，记录色谱图，测定其峰面积，并
以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线
方程:Y = 2 266 319． 24X － 19 602． 96(r = 0． 999 9)。
在9． 60 －192 μg /ml范围内，金丝桃苷的峰面积与进
样量有良好的线性关系。
2． 8 稳定性试验
取供试品溶液，分别于 0 h，4 h，8 h，24 h，48 h
分别进样 20 μl，测定样品中金丝桃苷峰面积值，
ＲSD值为 2． 7%，结果见表 4。
试验表明:供试品溶液在 48 h内稳定性良好。
表 4 稳定性考察结果
Table 4 The stability of the solutions
时间 /h 金丝桃苷峰面积 ＲSD /%
0 1 365 823 2． 7
4 1 323 634
8 1 279 747
24 1 354 113
48 1 304 693
2． 9 精密度试验
取上述标准品溶液(0． 048 mg /ml)，进样 20 μl，
重复 6 次，记录各组金丝桃苷峰面积，ＲSD 值为
0． 65%，结果见表 5。
试验表明，精密度良好。
表 5 精密度考察结果
Table 5 The precision of the determination method
时间 /h 金丝桃苷峰面积 ＲSD /%
1 2 407 759 0． 65
2 2 428 902
3 2 440 453
4 2 407 796
5 2 399 113
6 2 410 312
2． 10 重复性试验
平行制备 5 份供试品溶液，分别进样 20 μl 测
定，测定峰面积值，计算平均含量为 1． 87%，ＲSD 值
为 2． 2%(见表 6)。试验表明，重复性良好。
表 6 重复性考察结果
Table 6 The repeatability of the determination method
序号 称样量 /mg 金丝桃苷峰面积 含量 /% ＲSD /%
1 40． 0 1 365 823 1． 91 2． 2
2 40． 3 1 302 118 1． 81
3 40． 3 1 328 647 1． 85
4 39． 8 1 341 670 1． 89
5 40． 2 1 349 960 1． 88
2． 11 加样回收率试验
精密称取已知含量的满山红滴丸粉末约 10
mg，按照金丝桃苷含量的 80%、100%、120%，加入标
准品适量，置 10 ml容量瓶中，用蒸馏水超声 40 min
溶解并定容，摇匀，滤过，制备 3 组滴丸供试液共 9
份，分别吸取供试液各 20 μl注入高效液相色谱仪，
记录金丝桃苷峰面积，计算回收率。试验结果表明，
本法具有良好的回收率(见表 7)。
2． 12 滴丸中金丝桃苷的含量测定
精密称取满山红滴丸粉末 40 mg 三份，按 2． 6
方法制备供试液进行含量测定，计算滴丸中金丝桃
苷的含量。结果显示，满山红滴丸中金丝桃苷平均
含量为 1． 87%，三批样品中金丝桃苷含量稳定，ＲSD
为 1． 9%(见表 8)。
3 讨论
本研究建立了高效液相含量测定单一成分金丝
桃苷的方法，对其流动相条件进行了探索，最终选择
乙腈(加 0． 05%磷酸)∶0． 05%磷酸水为流动相，进
行梯度洗脱。滴丸中金丝桃苷的含量为 1． 87%。
含量测定方法可靠、数据完整。
·137·山西医科大学学报，2014 年 8 月，第 45 卷 第 8 期
表 7 加样回收率考察结果
Table 7 The recovery of the determination method
取样量 /mg 已知量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
10． 0 0． 187 0． 145 0． 322 93． 67 96． 05 2． 6
9． 8 0． 183 0． 145 0． 320 94． 85
9． 9 0． 185 0． 145 0． 320 93． 33
10． 0 0． 187 0． 181 0． 361 96． 45
9． 9 0． 185 0． 181 0． 366 100． 27
10． 3 0． 193 0． 181 0． 370 98． 06
10． 1 0． 189 0． 217 0． 394 94． 79
10． 1 0． 189 0． 217 0． 393 94． 33
10． 3 0． 193 0． 217 0． 407 98． 68
表 8 满山红滴丸中金丝桃苷的含量测定
Table 8 The contents of hyperin in samples
批号 称重 /mg 峰面积 含量 /% 平均含量 /% ＲSD /%
20050811 40． 3 1 344 663 1． 87 1． 87 1． 9
20050812 40． 3 1 321 626 1． 84
20050813 40． 2 1 369 263 1． 91
金丝桃苷和杜鹃素都是满山红药材中的有效成
分，其中金丝桃苷的含量比杜鹃素高约 5 倍［5］，而
更利于定量测定。中国药典 2010 版一部采用
HPLC 法测定满山红药材中杜鹃素的含量，但本文
在实验时，经多方尝试都未能获得杜鹃素标准品。
本研究选择金丝桃苷作为指标成分，参考有关文
献［6，7］建立高效液相法测定金丝桃苷在满山红滴丸
中的含量，为滴丸的质量控制提供标准，也为满山红
药材质量控制提供新的参考。
色谱条件经预试验发现，使用文献报道多用的
流动相系统，如甲醇∶3%冰醋酸水(45:55)，金丝桃
苷主峰的峰形有拖尾，降低有机相比例后，发现主峰
后面又出现一个小峰，试验不同比例的甲醇 －水、
乙腈 －水、四氢呋喃 －水等流动相系统，也都不能实
现很好的分离，但乙腈 －水系统在峰形和样品分离
度方面明显优于甲醇 －水系统，加入磷酸有利于改
善峰形，故选择乙腈 －磷酸 －水系统。最后采用梯
度洗脱的办法将小峰分开，流动相系统可得到较理
想的峰形和分离度。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部) ［M］． 北京:化
学工业出版社，2010．
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［3］ 赵承孝，杨飞，康永，等．满山红滴丸急性毒性试验和主要药效
学试验［J］．中国医院药学杂志，2008，28(12) :973 － 975．
［4］ 赵承孝，杨飞，梁泰刚，等．满山红滴丸的平喘抗炎作用［J］．中
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［5］ 张振杰． 中药满山红的药学研究［D］． 太原:山西医科大学，
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［6］ 刘恩荔，梁泰刚，赵承孝．盐酸特拉唑嗪胶囊溶出度研究［J］．
山西医科大学学报，2010，41 (3) :227 － 230．
［7］ 梁泰刚，梁垿，赵承孝，等． ＲP － HPLC 法测定东北地区不同产
地满山红中齐墩果酸与熊果酸［J］． 中草药，2008，39(8) :
1255 － 1257．
作者简介: 赵承孝，男，1982 － 04 生，硕士，讲师，E － mail:
zhaocx6@ 163． com．
［收稿日期: 2014 － 07 － 11］
·237· J Shanxi Med Univ，Aug 2014，Vol 45 No 8