全 文 ：收稿日期：２０１５－１０－２６
基金项目：福建省林业厅科研项目“沉水樟种质资源收集与无性繁殖技
术研究”（编号：闽林科［２０１２］２号）。
作者简介：陈碧华（１９６７—），男，福建龙海人；博士，教授级高级工程师，
主要从事林业生物技术和森林培育研究。
沉水樟组织培养技术研究
陈碧华１，２，　张　娟１，２，　范辉华１，２
（１．福建省林业科学研究院，　福建 福州３５００１２；
２．国家林业局南方山地用材林培育重点实验室，　福建 福州３５００１２）
Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ　Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ　ｍｉｃｒａｎｔｈｕｍ
ＣＨＥＮ　Ｂｉｈｕａ１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｊｕａｎ１，２，ＦＡＮ　Ｈｕｉｈｕａ１，２
摘　要：沉水樟外植体诱导加入Ｖｃ可以减少褐化，并采用暗培
养。试验表明：适宜沉水樟外植体诱导培养基为：ＭＳ＋ＢＡ　５．０
ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ，诱导率达到３５％；继代培
养基为：改良 ＭＳ＋ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ
＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ，平均增殖率达到２．８倍、平均茎芽高度达到
３．９ｃｍ；生根培养基为：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ，瓶内平均生根
率达到７３．３％，温室移栽成活率达到８２％以上。
关键词：沉水樟；组织培养；外植体诱导培养基；
继代培养基；生根培养基
ＤＯＩ编码：　１０．１６５９０／ｊ．ｃｎｋｉ．１００１－４７０５．２０１６．０２．１２１
中图分类号：　Ｓ　７９２．２３　　　文献标志码：　Ａ
文章编号：　１００１－４７０５（２０１６）０２－０１２１－０３
沉水樟（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｎ　ｍｉｃｒａｎｔｈｕｍ）别名水樟，是
我国樟科樟属的经济树种，为我国大陆和台湾的间断
分布种。长期以来对沉水樟资源的人为破坏，导致资
源锐减，目前除福建建瓯万木林自然保护区分布有较
大面积的沉水樟外，其余多被破坏殆尽，沉水樟种群已
处于濒危状态，１９８２年被列为国家三级濒危保护植
物［１］。沉水樟木材纹理通直，结构均匀细致，气味芳
香，是优良的船舶、家具用材。植株可提取芳香油，主
含黄樟油素，是重要的工业原料。沉水樟为树形高大
雄伟、干形通直、枝叶繁茂的常绿乔木。由于沉水樟属
自花授粉，雌雄花发育成熟期不一致，因而结实率很
低，用作城市园林绿化树种时，这反而成了一个优
点———可避免大量的落花落果，易于保持地面清洁。
１５年生沉水樟才能开花结果，果实在成熟前大量落
果，果实成熟后其空壳率高达７５％以上，种子多油、寿
命短，难贮存，发芽率低［２］。
组织培养特点是繁殖速度快、繁殖后代整齐一致并
能保持原有品种的优良性状，可在人工控制的条件下进
行周年生产而不受自然环境中季节和恶劣天气的影响，
可以克服沉水樟种子寿命短，难贮存，发芽率低等问题。
因此，开展沉水樟组培技术研究具有重要意义。
国内仅见河南翟晓巧等《沉水樟体外植株再生体系
的建立》和罗坤水等《沉水樟组织培养研究》的报道［３－４］。
１　材料与方法
１．１　材　料
取沉水樟小苗顶芽或半木质化枝条作为试验的外
植体。
１．２　方　法
１．２．１　外植体表面灭菌
取沉水樟外植体经自来水冲洗１５～２０ｍｉｎ，再用
洗涤粉溶液浸泡２０～３０ｍｉｎ，然后用自来水流水冲洗
干净。在超净工作台上先用７０％～７５％酒精浸泡６０ｓ，
０．１％ＨｇＣｌ２ 消毒１２～１３ｍｉｎ，无菌水洗涤４次。剔除顶
芽基部或茎段上下两端，保留长度约为１．５ｃｍ的茎段，
接种于预先配置好的外植体诱导培养基上［５］。
１．２．２　培养条件
外植体诱导试验采用暗培养；继代培养光照强度
１　０００～１　５００ｌｘ；生根培养光照强度从１　０００～１　５００ｌｘ增
加到炼苗光照２　０００～５　０００ｌｘ。培养温度为（２４±２）℃，
光照时间为１２ｈ／ｄ。
１．３　试验设计
１．３．１　外植体诱导
外植体诱导培养基：１）ＭＳ＋ＢＡ　５．０ｍｇ／Ｌ（以下
生长调节剂浓度相同）＋ＩＢＡ　０．１＋Ｖｃ（抗坏血酸）
５ｍｇ／Ｌ；２）改良 ＭＳ＋ＢＡ　５．０＋ＩＢＡ　０．１＋Ｖｃ　５ｍｇ／
Ｌ。以上均附加白糖３０ｇ／Ｌ（“田趣”牌，下同）和琼脂
粉５．５ｇ／Ｌ，ｐＨ＝６．０。每个处理接种３０瓶（广口瓶规
格２００ｍＬ），每瓶接种１个芽（或茎段），３次重复，培
养３０ｄ后观察污染和诱导率［６－１０］。
１．３．２　继代培养基
继代培养基：３）ＭＳ＋ＢＡ　５．０＋ＩＢＡ　０．１＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ
·１２１·
应用技术　　陈碧华 等：沉水樟组织培养技术研究
表１　沉水樟外植体诱导试验结果分析
培养基号 基本培养基 ＢＡ（ｍｇ／Ｌ）
ＩＢＡ
（ｍｇ／Ｌ）
平均诱导率
（％）
外植体表现
１ ＭＳ　 ５．０　 ０．１　 ３２．２±０．８７ａ 愈伤组织多、芽大、长得快
２ 改良 ＭＳ　 ５．０　 ０．１　 １３．３±０．６４ｂ 愈伤组织少、芽小、长得慢
表２　沉水樟增殖培养基试验结果分析
培养基
编号
基本
培养基
ＢＡ
（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ
（ｍｇ／Ｌ）
平均增殖率
（倍）
平均茎芽高度
（ｃｍ）
茎芽生长表现
３ ＭＳ　 ５．０　 ０．１　 ３．５±０．１５３ｂ １．５±０．１００ｃ 　　愈伤组织多，芽多且小，多数芽顶枯死
４ ＭＳ　 ０．５　 ０．１　 ２．３±０．１００ｄ ３．２±０．１５３ｂ 　　愈伤组织多，芽数适中，多数芽顶枯死
５ 改良 ＭＳ　 ５．０　 ０．１　 ４．１±０．１５３ａ １．９±０．０５８ｃ 　　愈伤组织少，芽多且小，少数芽顶枯死
６ 改良 ＭＳ　 ０．５　 ０．１　 ２．８±０．０６７ｃ ３．９±０．１００ａ 　　愈伤组织少，芽数适中，少数芽顶枯死
表３　沉水樟生根培养基试验结果分析
培养基编号 基本培养基 ＩＢＡ（ｍｇ／Ｌ）
平均生根率
（％）
植株生根状况
７　 １／２ＭＳ　 ０．１０　 １３．３±０．６５６ｄ 　　根条数少、植株生长缓慢
８　 １／２ＭＳ　 ０．２５　 ２３．３±０．４３６ｃ 　　根条数少、植株生长中等
９　 １／２ＭＳ　 ０．５０　 ４６．６±０．５５７ｂ 　　根条数少、植株生长中等
１０　 １／２ＭＳ　 １．００　 ７３．３±０．４０４ａ 　　每株根数３～５条、植株生长快
＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ；４）ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．１＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ
＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ；５）改良 ＭＳ＋ＢＡ　５．０＋ＩＢＡ　０．１＋Ｖｃ　５
ｍｇ／Ｌ＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ；６）改良ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．１＋
Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ。以上基本均附加白糖３０ｇ／
Ｌ和琼脂粉５．５ｇ／Ｌ，ｐＨ＝６．０。每个处理接种３０瓶
（广口瓶规格２００ｍＬ），每瓶接种３个茎芽，３次重复，
培养３０ｄ后观察增殖系数和茎芽高度［４－８］。
１．３．３　生根培养基
生根基本培养基：７）１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１０；８）１／２
ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２５；９）１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５；１０）１／２ＭＳ＋
ＩＢＡ　１．０。以上基本培养基均添加白糖２０ｇ／Ｌ和琼脂
粉６．０ｇ／Ｌ，ｐＨ＝６．０。每个处理接种１０瓶，每瓶接种
３个茎芽，３次重复。
１．３．４　炼　苗
经培养２５ｄ后的生根苗，搬到玻璃温室炼苗１５ｄ。
光照度３　０００～５　０００ｌｘ。生根培养４０ｄ后观察统计根
长、根数、生根率和高度茎芽。
１．３．５　移　栽
栽培基质采用红心土，装入营养袋，移入温室中，
以０．２‰高锰酸钾溶液消毒土壤。炼苗后的沉水樟瓶
苗，植株根部的培养基经自来水洗净，经７０％甲基托
布津可湿性粉剂１　２００倍液浸泡１５ｍｉｎ消毒后，移植
于营养袋内，浇透水后立即用薄膜覆盖保湿。叶片每
天喷水１次、２周后可揭开薄膜，并以后每天喷１～３
次，并逐步过渡到每天
１次。
试 验 数 据 采 用
ＳＰＳＳ　１１．５软件进行单
因素方差分析，置信度
为０．０５。
２　结果与分析
２．１　外植体表面灭菌
沉水樟外植体消毒
比较困难，加上外植体
容易褐化，外植体诱导
困难，诱导成功率只有
１２％～３５％。
２．２　外植体诱导培养
基选择
　　沉水樟外植体诱导
结果见表１。试验过程
发现，外植体褐化严重，
加入 Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ 以减
少褐化，并采用暗培养［６］。ＳＰＳＳ分析结果表明：培养
基１号平均诱导率达到３２．２％，培养基２号仅为
１３．３％，２个培养基之间具有显著差异。该２种培养基
除了基本培养基不同，其余激素等添加物完全相同，所
以选择培养基１号：ＭＳ＋ＢＡ　５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ
＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ作为外植体诱导基本培养基。
２．３　继代培养基选择
于无菌操作台上，切下外植体诱导出的新芽，淘汰
老组织，接种到继代培养基，试验结果列于表２。分析
结果表明：培养基３～６号的平均增殖率分别达到３．５
倍（ｂ）、２．３倍（ｄ）、４．１倍（ａ）和２．８倍（ｃ），四者之间具
有显著差异；对于平均茎芽高度，４种培养基分别为
１．５ｃｍ（ｃ）、３．２ｃｍ（ｂ）、１．９ｃｍ（ｃ）和３．９ｃｍ（ａ），四者之
间除了３号和５号培养基没有显著差异外，其余均有
显著差异。由于培养基３、４号导致茎芽基部愈伤组织
多而且茎顶枯死较多，因此不选择 ＭＳ作为继代基本
培养基。由于培养基５号平均茎芽高度达不到工厂化
育苗的要求，只有培养基６号茎芽高度３．９ｃｍ符合要
求；虽然培养基６号增殖率达仅为２．８倍，已经符合组
培工厂化育苗技术要求，所以选择培养基６号：改良
ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．１＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ，作
为沉水樟继代培养基。
２．４　生根培养基选择
增殖培养获得的沉水樟合格生根茎芽接种到生根
·２２１·
第３５卷　第２期　２０１６年２月　　　　　　　　　　　　　种　子　（Ｓｅｅｄ）　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３５　Ｎｏ．２　Ｆｅｂ．　２０１６
试验培养基上，于培养室培养２５ｄ，接着炼苗１５ｄ，观
察统计植株生根状况，结果见表３。结果表明：培养基
７～１０号生根率之间具有显著差异，其中培养基１０号
的平均生根率最高，达到７３．３％，所以选择培养基１０
号：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ作为沉水樟生根培养基。
２．５　组培苗移栽
沉水樟组培瓶苗经过１５ｄ炼苗，倒出并洗净根部
培养基，然后移栽到温室，移栽基质采用红心土，基质
提前３ｄ用０．２‰高锰酸钾溶液消毒，移栽后立即覆盖
薄膜保湿和加强病虫害防治，３０ｄ后统计成活率达到
８２％以上。
３　结论和讨论
３．１　确定适宜沉水樟外植体诱导培养基为：ＭＳ＋ＢＡ
５．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ，诱导率达到
３５％；增殖培养基为：改良 ＭＳ＋ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ
０．１ｍｇ／Ｌ＋Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ＋Ｂ２５ｍｇ／Ｌ，平均增殖率达到
２．８倍、平均茎芽高度达到３．９ｃｍ；生根培养基为：１／２
ＭＳ＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ，平均生根率达到７３．３％。
３．２　试验中加入Ｖｃ　５ｍｇ／Ｌ并采用暗培养可以减轻
沉水樟外植体褐化。外植体诱导、增殖培养过程中茎
芽基部始终有愈伤组织团存在和褐化现象出现，一定
程度上影响茎芽的增殖和生长。瓶内生根率有待于进
一步提高。
参考文献：
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《种子》编委会成员名单
（按拼音顺序排列）
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编　委
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孙世贤　万育麟　徐本美　颜启传　周介雄　张太平　周政贤　　　　　　　　
主　编：张太平
副主编：钱晓刚　彭　义　周介雄（常务）
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应用技术　　陈碧华 等：沉水樟组织培养技术研究