全 文 ：极显著低于新昌对照 ,与其他 4地点对照无显差异 。
原因可能是其种源是浙中优良种源区的边缘地带 ,
没有比较优势 ,而且 b值大于 1,产量不稳定 ,它需
要重复试验才能定论 。
2.3 　根茎优形率　各地点各品种的小区优形率汇
总于表 10,方差分析结果汇总于表 11 ,多点试验方
差分析结果如表 12 ,各品种平均优形率差异显著性
检验结果如表 13。
多点汇总和各地点方差分析结果 ,品种 、品种与
地点互作效应达到极显著或显著水平 ,说明本试验
显示有优良品种及其适生地区 ,即浙术 1号的优形
率极显著或显著优于安吉 、嵊州 、临安和文成当地的
对照样本 , 分别高 165.36%、 60.68%、 59.93%和
25.09%,而与新昌的对照无显著差别。它的回归系
数很小 ,表示在各地的优形率高又十分稳定的优质
类型 。浙术 2号的优形率高于安吉 、嵊州 、文成和临
安 ,其中安吉达到极显著 ,但明显低于新昌对照 ,它
的回归系数大于 1,表明优形率的稳定性差 ,明显不
如浙术 1号 ,只能作为继续观察对象。
3　结论与讨论
3.1　综合植株存活率 、根茎产量及其优形率三个
主要指标 ,浙术 1号在大多数试点显著优于当地对
照 ,可在安吉 、文成 、嵊州和临安 4个县及与该试点
条件相似的地段试推广 。但浙术 1号只是优良产地
内未经选择的混合群体 ,可进一步加以选育 。
3.2　由于白术植株存活率 、根茎产量及优形率三
个主要性状与环境关系十分密切 ,各地区在不同海
拔高度和不同地段的土壤又有明显差别 ,因此 ,有必
要在各县选择有代表性地点作进一步多年试验。
(2007-01-29收稿)
阴香愈伤组织的诱导及继代培养
张　晨 ,刘志伟 ,曾庆坚
(嘉应学院生物系 ,广东梅州 514015)
　　摘要　以阴香枝条为外植体 ,诱导愈伤组织 , 探索生产右旋龙脑的途径。实验已获得第一步成果 , 成功诱导出
愈伤组织及愈伤组织继代培养的条件。
关键词　阴香;愈伤组织;诱导;继代培养
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)11-1363-03
基金项目:嘉应学院自然科学重点项目作者简介:张晨(1971-),女 ,浙江杭州人 ,副教授 ,硕士 ,主要从事生物化工等研究 , E-mail:jyzhangchen@sina.com。
　　右旋龙脑又名天然冰片 、梅片 ,具有通诸窍 、散
郁火 、去翳明目 、消肿止痛 、开窍醒脑 、清热解毒 ,主
治中风口噤 、热病神昏 、气闭耳聋 、喉痹 、痈肿等疾
患 ,还有抗癌作用;龙脑也是名贵的定香剂和配制高
级香水重要原料 ,有去腐防腐 、驱避虫类的效力 ,还
用作清凉饮料添加剂 〔1〕。本品原产印尼苏门答腊
群岛 ,从龙脑香树的树脂提取 , 我国历来依靠进
口 〔2〕。近年来 ,湖南新晃 、江西吉安 、广东梅州等地
相继发现富含天然右旋龙脑的樟科植物 〔3〕 ,但受自
然条件等限制 ,产品不能满足市场需要。本研究探
讨植物组织培养生产右旋龙脑 ,采用梅州地区的一
种产右旋龙脑的樟科植物阴香 Cinnammoniabur-
manni的化学型(Typusphysiologicalcinnanloni)梅
片树诱导愈伤组织并成功继代培养。
1 　材料与方法
取梅州产右旋龙脑的阴香枝条 ,经灭菌后 ,作为
外植体 ,斜插或平放于培养基 。
1.1　愈伤组织的诱导　MS培养基加 6.5 g/L的
琼脂粉及 30 g/L的葡萄糖 ,并加入适量的生长调节
剂(见表 1), pH值 5.8, 121℃灭菌 3 min。
　表 1 　诱导培养基及生长调节剂(mg/L)
2, 4-D KT
0 0.5 1.0 1.5 2.0
0 1# 6# 11# 16# 21#
0.5 2# 7# 12# 17# 22#
1.0 3# 8# 13# 18# 23#
1.5 4# 9# 14# 19# 24#
2.0 5# 10# 15# 20# 25#
1.2　愈伤组织的继代培养　将愈伤组织诱导培养
基的 25种生长调节剂配比的浓度 ,分别再取原浓度
的 0、20、40、60、80、100%组成继代培养基。把同一
配比生长调节剂诱导得到的愈伤组织转接到相同浓
1363中 药 材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 11期 2007年 11月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.11.010
度生长调节剂的继代培养基上培养。
1.3 　培养条件　温度 25±2℃,光照 12 h/d,光强
度 340Lux。
2 　结果与讨论
2.1　接种方式　外植体枝条 ,用平放接种较斜插
接种 ,由于能更好吸收营养成分 ,愈伤组织长势好 ,
长出的细胞量较多(图 1)。
2.2　诱导愈伤组织培养基　阴香枝条接种 30d后
a.斜插诱导的愈伤组织 b.平放诱导的愈伤组织
图 1　不同接种方法的愈伤组织
　表 2 　培养基组合与愈伤组织诱导
编号 有效外植体 愈伤数 诱导率(%) 褐化数 褐变率(%) 始愈期(d) 长势
1 19 0 0 0 0 0 　　0
2 20 4 20 1 5 7 --++
3 20 6 30 0 0 10 ---+
4 16 10 62.5 0 0 9 --+++
5 18 9 50 0 0 9 --+++
6 20 2 10 0 0 9 ---+
7 16 4 25 0 0 7 --+++
8 19 19 100 0 0 9 --+++
9 20 20 100 2 10 15 --+++
10 19 19 100 1 5.3 12 --++
11 20 4 20 0 0 12 ---+
12 20 6 30 0 0 19 --++
13 17 17 100 1 5.9 8 --++
14 18 18 100 1 5.6 12 --+++
15 20 20 100 2 10 9 ---+++
16 20 6 30 0 0 9 ---+
17 20 10 50 0 0 15 ---+++
18 20 20 100 1 5 9 --+++
19 18 18 100 0 0 9 --+++
20 18 18 100 0 0 8 -+++
21 20 2 10 6 30 12 ---+
22 10 3 30 5 50 9 ---+
23 20 6 30 7 35 20 ---++
24 15 6 40 7 46.7 9 ---++
25 18 9 50 6 33.3 9 ---++
　　注:“ -”表示生长速度;---慢 , --一般 , -快;“ +”表示愈
伤量:+少;++一般;+++多
图 2　愈伤组织的诱导率和褐变率
结果:2, 4-D的浓度为 1.0 ～ 2.0mg/L, KT的浓度为
0.5 ～ 1.5 mg/L时 ,愈伤组织的诱导率升高 ,生长速
度增快;在 2 , 4-D的浓度为 2.0 mg/L, KT浓度为
1.5 mg/L时 ,愈伤组织诱导率最高 ,褐变率最低 ,始
愈期也比较短 ,且生长速度最快;当 2, 4-D的浓度小
于 1.0 mg/L或 KT的浓度小于 0.5 mg/L时 ,愈伤
组织的诱导率下降 ,生长速度减慢;当 KT的浓度大
于 1.5 mg/L时 ,枝条和愈伤组织的褐变率明显上
升。实验结果表明 ,诱导阴香愈伤组织的最适培养
基为 MS+KT1.5 mg/L+2, 4-D2.0 mg/L,即编号
20培养基。列于表 2及图 2。
2.3　最适继代培养基　阴香愈伤组织继代培养结
果表明 ,当 2, 4-D浓度为 0.5 ～ 1.2 mg/L, KT浓度
为 0.5 ～ 1.5 mg/L时 ,存活率比较高 ,生长速度比较
快 ,褐变率也比较低 。在 2, 4-D浓度为 1.0 mg/L,
KT浓度为 1.5 mg/L时 ,愈伤组织继代培养的存活
率最高 ,生长速度最快 ,褐变率也比较低;当 KT和
2, 4-D缺一时 ,不利于愈伤组织生长 ,最终死亡;当
KT或 2, 4-D浓度太高时 ,愈伤组织的褐变率上升。
在改变葡萄糖 、KT或 2, 4-D含量的多种培养基中试
验结果 ,最终确定阴香愈伤组织继代培养的最适培
养基为 MS+KT1.5 mg/L+2, 4-D1.0mg/L+葡萄
糖 30 g/L,而且该培养基可以继代培养从不同培养
基上诱导出来的愈伤组织。
3　结论
阴香枝条诱导愈伤组织的最适条件为:MS+KT
1.5 mg/L+2、4-D2.0 mg/L+葡萄糖 3.0% +琼脂
粉 0.65%;愈伤组织继代培养的最适条件为:MS+
KT1.5mg/L+2、4-D1.0mg/L+葡萄糖 3.0%+琼
脂粉 0.65%;均为光暗各 12 h/d, 光照强度 340
1364 中 药 材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 11期 2007年 11月
Lux,温度为 25±2℃。本实验结果为组培育苗和细
胞培养生产右旋龙脑打下了基础。
参 考 文 献
[ 1] 宋永芳 ,孙秀泉 , 罗嘉梁 ,等 .天然龙脑的开发与应用 .
香料香精化妆品 , 1998(3):33-36.
[ 2] 欧阳少林 , 龙光远 ,黄璐琦 , 等.天然冰片的新资源.江
西林业科技 , 2005(5):38.
[ 3] 李飞 .中国樟树精油资源与开发利用 .北京:中国林业
出版社 , 2000.
(2006-11-13收稿
2007-07-17修回)
·资源 ·
南充地区不同叶型半夏的指纹图谱分析
任碧轩 1 ,白　权2 ,王朝莉 1 ,陈　果 1 ,李　丽1 ,敬保迁 1 ,张大容 1 ,冯　莉1 ,唐恩洁 1＊
(川北医学院　1.免疫与分子生物学研究所;2.附属医院药剂科 ,四川南充 637000)
　　摘要　目的:比较南充地区野生芍药叶型和竹叶型半夏的指纹图谱并鉴定差异分子。方法:采用 RAPD扩增 、
分析不同叶型半夏指纹图谱 , 并对典型特异扩增条带进行克隆和测序分析。结果:36条随机引物中有 22条扩增出
清晰条带。芍药叶型半夏基因组 DNA扩增出 157条带 , 竹叶型半夏基因组 DNA扩增出 161条带。芍药叶型半夏
基因组 DNA扩增的差异带 3条 , 竹叶型半夏基因组 DNA扩增的差异带 7条。差异条带 AOPN-14300经克隆测序证
实为非编码区序列 , Genbank登记号为 EF417577。结论:南充野生不同叶型半夏基因组存在差异 , 已将部分典型差
异基因组 DNA片段进行克隆 ,为从分子水平鉴别本地区半夏奠定基础 。
关键词　半夏;基因组 DNA;RAPD;指纹图谱;克隆
中图分类号:R282.71　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)11-1365-03
基金项目:四川省科技厅应用基础研究项目(04JYO29-014-1)作者简介:任碧轩 ,女 ,高级实验师 ,从事分子生物学研究 , Tel:13990889827。＊通讯作者:唐恩洁 ,教授 , Tel:0817-2242780。
　　天南星科半夏 Pineliaternata(Thunb)Breit干
燥块茎 ,具有燥湿化痰 、降逆止呕 、消痞散结作用 ,多
用于痰多咳喘 、风痰眩晕 、呕吐反胃等症的治疗 〔1〕。
半夏野生资源已近枯竭 ,我国部分地区已开始人工
栽培 , 但是不同种源半夏及其药效存在显著差
异 〔2、 3〕。四川南充野生半夏有芍药叶型和竹叶型两
种 ,均在临床上使用 ,但两者的基因型 、种质特征和
药效差别目前均不清楚。本文采用 RAPD技术分析
两种叶型半夏基因组指纹图谱 , 并对典型特异性
RAPD产物进行克隆。为优质半夏的选育提供分子
生物学鉴别方法 。
1 　材料和方法
1.1 　材料　两种半夏由本院药剂科白权教授采自
南充市西山同一玉米地的野生半夏成株期新鲜叶
片 ,并根据文献〔4 ～ 6〕鉴定为 “芍药叶型 ”(以下简称
A)和 “竹叶型 ”(以下简称 B)。植物基因组 DNA抽
提试剂盒购自华舜生物工程公司 ,随机引物购自北
方同正公司 , PCR扩增试剂购自晶美生物公司 ,琼
脂糖凝胶 DNA回收试剂盒购自北京天为科技公司 ,
质粒提取试剂盒购自 OMEGA公司 , pMD18-Tvector
购自宝生物工程公司。
1.2　DNA提取　分别取半夏新鲜叶片 ,用液氮研
磨 ,按植物 DNA抽提试剂盒说明提取基因组 DNA,
用 0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定 ,核酸蛋白检测仪测
定含量及纯度 。
1.3　RAPD扩增反应　取上述制备的 DNA为模
板 ,扩增总体积 20μl,含 10×bufer2 μl、MgCl2 1.9
mM, dNTP0.5 mM, 随机引物 1.5 μM, 模板 DNA
100 ng, Taq酶 2.5μ。于 PCR仪(eppendorfMaster-
cyclergradient)进行扩增 。扩增程序为 95℃ 3 min
预变性后 , 95℃ 30 s、30℃ 30 s、72℃ 1 min35个循
环 , 72℃ 6min。产物于 2%琼脂糖凝胶电泳并分析
结果 。
1.4　差异片段的纯化 、扩增 、克隆和测序　使用琼
脂糖凝胶 DNA回收试剂盒 ,按使用说明回收经电泳
证实为种特异的 PCR扩增条带 ,克隆入 pMD18-T
vector载体并送往上海基康生物公司进行测序。
2　结果与分析
2.1　模板 DNA提取与电泳分离 、分析　提取的基
因组 DNA, 经测定 OD260与 OD280的比值为 1.8 ～
1365中 药 材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 11期 2007年 11月