全 文 ：420 中国医药指南 2008年 12月第 6卷 第 23期 Guide of China Medicine，December 2008，Vo6，No23


1 益母草（赤道面观） 1a 益母草（极面观） 2 细叶益母草（赤
道面观）
3 讨论
益母草属植物来源的药材，在外部形态、内部构造上都极相
似，甚难区分
[4, 9-10]
。鉴于 ITS 区序列在分子系统学和中药材鉴
定研究显示出的优势
[11]
，作者对益母草和细叶益母草的该序列进
行了研究和分析。结果表明，二者的 ITS1区差异率为 15.4%，ITS2
区较大，为 17.1%。把 ITS1 和 ITS2 序列结合一起能较好地反映
益母草与细叶益母草的区别，nrDNA ITS 序列特征可作为二者种
间鉴别的有效分子标记。
扫描电镜观察也表明，益母草的花粉粒在两端有喙，与细叶
益母草明显不同；二者的外壁纹饰也有所差异。将花粉粒的扫描
电镜观察与 ITS区序列分析相结合，可准确区分益母草与细叶益
母草这两种形态甚为近似的生药。
参考文献
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HPLC法测定满山红中牻牛儿酮的含量
方 芳 1 方洪壮 2 宗希明 2
【摘要】 目的 建立满山红中牻牛儿酮含量测定方法，并测定不同来源的满山红样品。 方法 采用高效液相色谱法， ZORBAX RX -C18
柱(150 mm×4.6mm，5mm) 色谱柱，流动相为 65%乙腈水溶液，流速 1.0 mL/min，检测波长 210 mm。结果 牻牛儿酮的线性范围为 0.030
24～3.024 µG（R=1.000），回收率为 98.6%～101.5%，RSD为 1.3%～0.6%，不同采集地的满山红中牻牛儿酮的含量在 0.0107～7.2862 mg/g
之间，不同月份的牻牛儿酮含量最多相差 1.5倍。结论 所建立的方法准确、重复性好，可用于满山红中牻牛儿酮的含量测定。不同采
集地的满山红中牻牛儿酮含量差异极大。不同月份的牻牛儿酮的含量差异相对校小。
【关键词】满山红；牻牛儿酮 ；含量测定；HPLC法
Determination of the Germacrone in Folium Rhododendri Daurici by HPLC
FANG HONG-ZHUANG
1
，FANG FANG
2
， ZONG XI-MING
2

(1.Department of Pharmacy, The First Affilated Hospital ,Jiamusi University, Jiamusi 154003, Chian; Chemical and
Pharmaceutical College, Jiamusi University, Jiamusi 154007，China)
[Abstract] Objective To develop a determination method of germacrone in the Folium Rhododendri daurici and determined
samples which brought from different area in province of Heilingjiang and from different month of one area. Methods HPLC
method was used with column of the Zorbax RX -C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm) and the mobile phase of 65% acetonitrile. The
velocity of flow was 1.0 ml/min and detection wavelength at 210nm. Results The linear range of germacrone is from 0.030
24µg to 3.024 µg.（r=1.000）. The recovery was 98.6% ～101.5% with RSD of 1.3%～0.6%. The germacrone contents of the
different area varied from 0.010 7 to 7.286 2 mg/g, while the different month reached 1.5 times. Conclusion The established

1.黑龙江佳木斯大学附属第一医院药剂科 （154003）
2.黑龙江佳木斯大学化学与药学院 （154007）
DOI:10.15912/j.cnki.gocm.2008.23.098
中国医药指南 2008年 12月第 6卷 第 23期 Guide of China Medicine，December 2008，Vo6，No23 421

method is accurate and reproducible, can be used for the determination of germacrone in Folium Rhododendri daurici. The
content of germacrone was obvious difference for the 13 area’s samples and was relatively near for the samples of 6 months.
[Key words] FOLIUM RHODODENDRI DAURICI；GERMACRONE；DETERMINATION；HPLC
中图分类号：R446 文献标识码： B 文章编号：1671-8194（2008）0421-04

中药满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃 RHODODENDRON
DAURICUM L. 的干燥叶，具有止咳，祛痰功效，用于治疗急、慢
性气管炎
[1]
。满山红中含有多种有效成分，长期认为其挥发油部
分的主要有效成分是牻牛儿酮
[2]
。新近的研究表明，由于产地、
品种的不同，满山红药材挥发油中的各成分及相对含量存在着较
大的差异，有时主要成分为杜松脑，并非牻牛儿酮
[3，4]
。满山红挥
发油中牻牛儿酮的测定，现有气相色谱法的报道
[5]
，但满山红叶
中牻牛儿酮含量及其直接定量方法的研究，尚未见报道。本文建
立了满山红中牻牛儿酮含量测定的 HPLC法，并用该法测定了 13
个采集地及同一采集地 6 个不同月份满山红样品的牻牛儿酮含
量，以期为满山红药材的质量控制与评价及其相关的研究提供基
础性资料。
1 仪器及材料
高效液相色谱仪（AGILENT 1100 系列）：四元泵，紫外可变
波长检测器，自动进样器，色谱工作站。ZORBAX RX -C18柱(150
mm×4.6mm，5mm； 250 mm×4.6mm，5mm)，Zorbax SB-C18柱(12.5
mm×4.6 mm, 5m m) 保护柱。0.45 mm针筒式微孔滤膜，UV-2501
（PC）紫外可见分光光度计(日本岛津制造所)。
满山红样品：2006 年采自黑龙江省，其中 13 份 9 月采集
于不同地区，6 份 6～11月月初于采集同一地区，阴干后密封冷
藏。全部样品经形态和显微鉴定为兴安杜鹃 RHODODENDRON
DAURICUM L.叶。牻牛儿酮对照品：中国药品生物制品检定所
（111665－200401）； 佳木斯大学天然药物教研室提供（含量
95.5%）。乙腈(色谱纯)，其它试剂均为分析纯；实验用水为二次
重蒸水。
2 方法与结果
2.1 对照液制备
牻牛儿酮对照品溶液。①取经五氧化二磷干燥的牻牛儿酮对
照品约 15mg，精密称定，用乙腈溶解并定容到 50mL，摇匀，备用。
牻牛儿酮对照品溶液。②精密量取牻牛儿酮对照品溶液。③1mL，
于 10mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2 供试液制备
取满山红粗粉 100g ，精密称定，置 2 000 mL圆底烧瓶中，
加 10倍水浸泡 12 h。按挥发油测定法（2005版药典一部附录ⅹD）
测定，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢入烧瓶中为止，
再加醋酸乙酯 5mL，加热至沸腾，并保持微沸 8 h，冷却，分取醋
酸乙酯层，测定器用醋酸乙酯洗涤 5 次，每次 5mL，合并醋酸乙
酯液，通过铺有无水硫酸钠的漏斗，转移至 50mL量瓶中，用少量
醋酸乙酯洗涤漏斗，并入同一量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，
即得。精密量取 1mL，置 10mL量瓶中, 用乙腈溶液稀释至刻度，
备用。
2.3 色谱条件与系统适应性条件
2.3.1 波长的选择 精密量取对照液②2.5 mL，用乙腈稀释成
10mL，以乙腈为参比，在分光光度计上，记录紫外光谱曲线如图
1。从中可知，牻牛儿酮在 210～215mm的吸收较大且相对平缓，
故选定 210mm为测定波长。
2.3.2 色谱柱的选择 取汤旺河产地的供试液 10mL进样，另取
供试液与对照液①各 10 mL 混合进样。得色谱图如图 2。比较对
照品加入前后的样品色谱图可知，样品在保留时间 9.05 min处有
一色谱峰。该峰在加入牻牛儿酮对照品后显著增高，可断定该色
谱峰为牻牛儿酮峰。以不同长度的色谱柱分离同一供试液的色谱
图如图 3。由图 3可知，色谱柱的长度由 250mm降低为 150mm，牻
牛儿酮与邻近的峰分离变化不大，但牻牛儿酮的出峰时间，缩短
近一半，所以最终选定 150mm长的色谱柱。

图 1 牻牛儿酮紫外光谱

图 2 对照品加入前(A)后(B)样品色谱图

图 3 不同长度色谱柱色谱图
2.3.3 流动相的选择 选用流动相时, 尝试了含 1‰、2‰、3‰
磷酸的水相乙腈等度洗脱。对牻牛儿酮的分离效果，与不含磷酸
水相洗脱的比较，无明显差别，故选用了无磷酸的水相为洗脱液。
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对于流动相的配比，尝试了 60%、65%、68及 70%的乙腈等度洗脱。
随着流动相中乙腈的比例增加，牻牛儿酮的出峰时间提前，但其
与相邻峰的分离度降低。最终确定以 65:35配比的乙腈－水作流
动相、等度洗脱。
2.3.4 系统适用性 在选定的色谱实验条件下，牻牛儿酮的理论
塔板数为 130 00，拖尾因子为 1，供试品中牻牛儿酮与前后相邻
峰分离度分别为 1.54和 1.91，相邻峰对牻牛儿酮峰的测定无干
扰。对照液②连续 5次重复进样的色谱峰面积的 RSD 为 0.17%，
色谱系统有较理想的重复性。
2.4 稳定性试验
取经微孔滤膜滤过的供试液，于 0、2、4、6、8、12、24、
36 h分别进样 20mL，考察样品中牻牛儿酮峰面积的变化，得 RSD
值为 2.7%，表明供试液中的牻牛儿酮在 36h内稳定。
2.5 线性考察
精密吸取对照液①5、8、10 mL，对照液②1、5、10、20mL
分别进样，按实验方法的色谱条件测定。以牻牛儿酮质量（X）对
牻牛儿酮峰面积（Y）进行回归计算。 结果表明，牻牛儿酮对照
品在 0.03024～3.024 µG范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系；
回归方程为，Y=10.35+2942.56X，R = 1（N = 7）。
2.6 重复性试验
按实验方法分别制备 6 份供试液，分别进样 20 mL，按测定
方法，测得峰面积并计算牻牛儿酮质量，牻牛儿酮的质量 RSD值
为 2.0 %。
2.7 加样回收试验
取一已知含量的满山红样品粗粉 9 份各 100g，精密称定，
其中 3 份精密加入对照液①3.0mL，余下的 6 份加入精密称定的
牻牛儿酮对照品适量，按 2.2项下的方法制备供试液，进样 20mL，
测定牻牛儿酮峰面积，经工作方程计算并求得回收率。3 个水平
的回收率分别为 98.6%、101.5%、99.8%，RSD分别为 1.3%、0.6%、
0.9%。结果见表 1。
表 1 牻牛儿酮回收率试验结果
样品含
量(mg)
加入量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
RSD(%)
1.082
1.097
1.046
1.051
1.111
1.087
1.064
1.051
1.098
0.9125
0.9125
0.9125
36.87
35.28
36.43
72.55
70.96
71.46
1.969
1.998
1.956
38.66
36.96
37.81
72.96
71.66
73.13
97.2
98.8
99.7
102.0
101.6
100.8
99.1
99.5
100.8

1.3


0.61


0.89


2.8 样品测定 取不同来源的满山红样品，按供试液制备方法制
备样品溶液，经微孔滤膜过滤后，进样 20mL，按上述色谱条件测
定，求出满山红样品中牻牛儿酮的含量（N=2）结果见表 2。
表 2 不同样品牻牛儿酮含量
编号 采集地 采集月份 含量(mg/g)
01
02
03
04
05
06
07
08
09
11
10
12
13
14
15
16
17
18
伊敏林场
翠岗林场
方正林业局
七台河林业局
绥化林业局
清河林业局
朗乡林业局
亮子河林场
申家店林场
佳木斯四丰山
南岔仙翁山
汤旺河林业局
浩良河后山
浩良河后山
浩良河后山
浩良河后山
浩良河后山
浩良河后山
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
7
9
6
7
8
9
10
11
0.0249
0.0107
7.2862
0.0301
1.5471
0.3356
0.0477
0.0694
0.0191
0.0327
6.1934
0.1391
0.0244
0.0175
0.0160
0.0198
0.0197
0.0243
3 讨论
3.1 由于不同采集地的满山红中化学成分的相对含量变化很大，
为了更好地反应出所建立方法的准确度，选取了牻牛儿酮的含量
相对较低的 02号样品用以回收率试验。样品测定时，对于超出方
法线性上限的样品溶液，在进样前将样品溶液再稀释 10 倍后测
定，以保证测定液的浓度在线性之内。
3.2 13个不同采集地的满山红中均含有牻牛儿酮，但在多数样
品中含量很低。不同采集地满山红中牻牛儿酮含量差异极大，
最多相差 680倍。文献
[4]
中，6种满山红油中有 4种未测得牻牛
儿酮的缘故，可能是由于部分满山红中的含量过低而引起。与
不同地点同一月份样品的含量差异比较，同一采集地不同月份
样品中牻牛儿酮的含量相对接近。同一地各月份样品中牻牛儿
酮的含量，以夏季时较低、8月份为最低，其原因有待于进步研
究。
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