全 文 ：紫外分光光度法测定满山红总黄酮含量
方　芳1 ,于　峰2 ,刘　娟 1 ,方洪壮 1
( 1.佳木斯大学化学与药学院 ,黑龙江 佳木斯 154007, 2.哈尔滨制药总厂 ,黑龙江 哈尔滨 150086)
摘要: 目的:建立满山红总黄酮含量的紫外分光光度法。 方法:以芦丁为总黄酮代表物 ,用准确度、重复性、专属性、线性与
范围等分析效能指标进行方法学验证 ;与比色法作对比测定样品。结果:测定波长为 360nm,芦丁在 6. 210～ 31. 05μg /m L浓度
范围内 ,吸光度与浓度线性关系良好 ,相关系数为 0. 9998。 高中低三种不同浓度的回收率分别为: 100. 2% 、 100. 1% 、 99. 5% ,
RSD分别为 0. 65% 、 0. 71% 、 0. 95%。 结论:建立紫外分光光度法可准确地测定满山红中总黄酮的含量 ,该方法较现有的比色
法简便、快速。
关键词: 紫外分光光度法 ;满山红 ;总黄酮
中图分类号: R927. 2　文献标识码 : B　文章编号: 1008- 0104( 2007) 06- 0033- 02
　　满山红 ( Rhododendron dauricum L. ) ,又名映山红 ,达子
香 ,为杜鹃花科杜鹃属兴安杜鹃的干燥叶 [1 ] ,具有疗效高、副
作用小、资源丰富等特点。满山红中主要含有黄酮类、香豆素
类 ,有机酸类和挥发油四类化合物 [2]。其中 ,黄酮类化合物药
理作用较明显。 中药中总黄酮的定量多为比色法 ,也有紫外
法 [3] ,满山红中总黄酮测定的现行方法为三氯化铝比色
法 [4]。基于紫外法较比色法简便、快速等优点 ,本实验建立了
可用于满山红中总黄酮含量测定紫外分光光度法。实验结果
表明 ,所建立的方法的各项分析效能指标符合定量要求 ,可
用于满山红中总黄酮的定量。
1　仪器与试药
1. 1　仪器
UV- 2501( PC) S紫外可见分光光度计 (日本岛津制造
所 ) ; UV- V IS 756M C紫外可见分光光度计 (上海第三分析
仪器厂 ) ; KQ- 250DE型医用数控超声波清洗器 (昆山市超
声仪器有限公司 ) ; ES- 180 J电子分析天平 (沈阳龙腾电子
称量仪器有限公司 )。
1. 2　药材与试剂
满山红药材 2005年 9月采集于黑龙江省不同产地。芦丁
对照品 (中国药品生物制品检定所 ) (批号 0080- 9705) ;乙醇
(天津市凯通化学试剂有限公司 ) (批号 20050308) ,所用试剂
均为分析纯。
2　实验方法
2. 1　供试品溶液制备
分别取满山红药材粗粉约 1. 0g ,精密称定 ,置 100mL具
塞锥型瓶中 ,精密加 60%乙醇 50mL ,称定重量 ,超声 15min,
放冷 ,再称重量 ,加 60%乙醇补足损失重量 ,摇匀 ,滤过 ,精密
量取样品续滤液 5. 00m L,置 25m L量瓶中 ,加 60%乙醇至刻
度 ,摇匀。精密量取 1. 00m L,置 10m L量瓶中 ,用于紫外法测
定。 另按中国药典方法制备供试液用于比色法测定。
2. 2　对照品贮备液
取经五氧化二磷减压干燥至恒温重的芦丁对照品约
6. 0mg ,精密称定 ,置 100mL量瓶中 ,加 60%乙醇适量使溶
解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 (每 1毫升含无水芦丁约 60μg )。
2. 3　吸光度测定
按中国药典 2005版第一部附录中规定方法 ,对供试品溶
液和对照品贮备液稀释液分别在 360 nm波长处测定吸收度
用于紫外法。 另按中国药典方法 [4] ,在 420nm处测定吸收度
用于比色法定量。
3　结果
3. 1　测定波长
芦丁对照品的紫外吸收曲线及加显色剂后的吸收曲线
分别如图 1。由图 1可知 ,对照品芦丁在紫外 -可见光区间有
三个吸收峰 ,其中 360nm处的吸收峰最平缓 ;鉴于该峰为黄
酮类的特征吸收峰 ,故紫外分光光度法选择 360nm为测定波
长。
3. 2　线性与范围
精密吸取对照品液贮备液 1. 00mL , 2. 00mL , 3. 00mL ,
4. 00m L, 5. 00m L,分置 10mL容量瓶中 ,加 60%乙醇至刻度 ,
摇匀 ,以 60%乙醇做空白在选定的波长处测定吸光度 A。测得
的 5个吸光度值分别为: 0. 188、 0. 381、 0. 577, 0. 75和 0. 954。
以吸光度 A为横坐标 ,浓度 C为纵坐标 ,进行一元线性回归 ,
得到回归方程为: C = 32. 65 A + 1. 855× 10- 2 ,芦丁在 6. 21
～ 31. 05μg /m L浓度范围内 ,吸光度与浓度线性关系良好 ,相
关系数为 0. 9998。
图 1　芦丁的紫外 -可见吸收光谱
3. 3　稳定性
取满山红药材样品的粗粉 ,按 2. 1项下样品溶液制备方
法 ,制备紫外法测定的供试液 ,分别于配制后 0、 0. 5、 1、 2、 3、
4, 5和 6 h ,依紫外分光光度法测定吸光度 ,结果表明 ,供试液
的吸光度在 6 h内不发生变化 , RSD= 0. 4%。
3. 4　精密度
取约 2. 0g , 1. 0g , 0. 5g的满山红药材粗粉各 3份 ,按 2. 1
项制备供试液 ,用紫外分光光度法测定吸光度 ,并通过相应
的工作曲线计算样品中总黄酮的含量 ,得到日精密度 RSD分
别为 1. 0% 、 1. 2% 、 1. 5% ;另取样品的粗粉约 2. 0g , 1. 0g ,
0. 5g ,按 2. 1项制备供试液 ,避光冷藏。分别于不同日 ,取供试
液、用紫外分光光度法分别测定 ,得到日间精密度 RSD ( n=
3)分别为 1. 1% 、 1. 3% 、 1. 8%。
·33·HEILONGJIANG M EDICINE AND PHARM ACY Dec. 2007, Vo l. 30 No. 6　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
3. 5　加样回收率
取芦丁对照品约 250mg ,精密称定 ,置 25m L量瓶中 ,用
60%乙醇溶解并定容 ,备用。另取 9份已知含量的满山红样品
粗粉各约 1. 0g ,精密称定 ,分别置 100m L具塞锥型瓶中 , 3份
编为 1组 ,分别精密加入芦丁对照品溶液 1. 00m L、 2. 00mL、
3. 00m L,补充 60%乙醇至 50m L,按 2. 1供试品溶液制备项
下 ,自称定重量后操作 ,并测定吸光度 ,同时测定对照品贮备
液稀释液的吸光度 ,按对照法计算供试液中总黄酮量。 满山
红中总黄酮高、中、低含量的回收率结果见表 1。
表 1　回收率实验结果
No 含总黄酮 ( g ) 加入量 ( mg ) 测得量 ( mg) 回收率 (% ) 平均回收率 (% ) RSD(% )
1 0. 0253 10. 15 35. 40 99. 5
2 0. 0252 10. 15 35. 20 98. 5 99. 5 0. 95
3 0. 0253 10. 15 35. 50 100. 4
1 0. 0253 20. 30 45. 80 100. 9
2 0. 0253 20. 30 45. 60 100. 0 100. 1 0. 71
3 0. 0250 20. 30 45. 20 99. 5
1 0. 0251 30. 60 56. 00 100. 9
2 0. 0250 30. 60 55. 50 99. 6 100. 2 0. 65
3 0. 0251 30. 60 55. 80 100. 3
3. 6　样品测定
6个不同产地满山红药材紫外法及比色法的测定结果见
表 2。 由表 2可知 , 6个满山红药材中总黄酮含量均在 2%以
上。对两种方法的结果成对比较 t检验 ,两种方法测定准确度
上无显著性差异 (P > 0. 05)。
表 2　不同样品总黄酮百分含量 (% )
No. 总黄酮含量 (紫外法 ) 总黄酮含量 (比色法 )
1 4. 29 4. 31
2 3. 56 3. 26
3 2. 32 2. 58
4 4. 51 4. 53
5 4. 72 4. 79
6 3. 74 3. 90
4　结论
对满山红中总黄酮的定量 ,文献及有关标准中均为比色
分光光度法 ,该方法虽可准确测定总黄酮的含量 ,但操作较
繁杂。 所建立的满山红中总黄酮新的测定方法 ,经分析方法
学验证 ,有关的分析效能指标均符合含量测定要求 ,并且该
方法无需显色处理 ,简便、易行 ;紫外分光光度法同三氯化铝
比色分光光度法比较 ,两种方法在准确度上无明显的差异 ,
可应用于满山红中总黄酮的含量测定。所建立的紫外法为今
后满山红中相关的研究增加一种总黄酮定量方法。
参考文献:
[1 ]宋立人 ,洪恂 ,丁绪亮 ,等 .满山红 [S ] .现在中药学大辞典 .北京:
人民卫生出版社 , 2001, 2290
[2 ]傅丰永 ,刘永氵隆 ,梁晓天 ,等 .满山红化学成分的研究 [ J] .化学学
报 , 1976, 34( 3): 223- 227
[3 ]王强 ,罗集鹏 .中药分析 [M ] .北京:中国医药科技出版社 , 2005,
352- 354
[4 ]国家药典委员会 .华人民共和国药典 [ S] . 2000版 ,一部 .北京:化
学工业出版社 , 2000, 296- 297
(收稿日期: 2007- 09- 27)
黑龙江省中医药资助项目 ,课题编号 ZHY06- Z43
作者简介: 方芳 ( 1979～ )女 ,黑龙江佳木斯人 ,在读硕士研究生。
Determination of total f lavonoids in Rhododendron dauricum L
by ultraviolet spectrometry
FANG Fang
1
,YU Feng
2
, LIU Juan
1
, FANG Hong - zhuang
1
( 1. Th e Chemist ry and Pharmacy College of Jiamusi Universi ty, Jiam usi 154007, China; 2. Harbin General Pharmaceut ical Factory, Harbin
150086, China)
Abstract: Objective: To establish the method fo r the determina tion of the to tal f lav onoids in
Rhododendron dauricum L by ul t ravio let spectrometry. Methods: The methodolog y valida tion was ca rried
w ith rutin as representative mat ter ( sample ) by using accuracy, reproducibi li ty , selectivi ty, linearity and
linea r range as the perfo rmance pa rameters. The sample was determined in contrast wi th cur rent
colo rimetry. Results: The ult raviolet detection w as selected at w aveleng th of 360nm. The absorbance and
concentra tion o f rutin show ed a bet ter linear co rrelation a t i ts concentra tions f rom 6. 210～ 31. 05μg /mL,
w ith the cor relation coefficient as 0. 9998. The average recovery w as 100. 2% , 100. 1% and 99. 5% at
di fferent concentrations and RSD was 0. 65% , 0. 71% and 0. 95% , respectiv ely. Conclusion: Our ult raviolet
spect rometry can exact ly determine the content of the to tal f lav onoids of Rhododendron dauricum L.
Compared wi th colo rimetry the method is simple and rapid.
Key words: ult raviolet spect rometry; Rhododendron dauricum L; to tal flavonoids
·34·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　黑龙江医药科学　 2007年 12月第 30卷第 6期