全 文 ：蔡坤秀，陈振东，林宗铿，等．叶底红组织培养和快速繁殖条件的优化 ［Ｊ］．福建农业学报，２０１２，２７ （６）：６２１－６２５．
ＣＡＩ Ｋ－Ｘ，ＣＨＥＮ Ｚ－Ｄ，ＬＩＮ Ｚ－Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｈｙｌｌａｇａｔｈｉｓ ｆｏｒｄｉｉ ［Ｊ］．Ｆｕｊｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，２７ （６）：６２１－６２５．
叶底红组织培养和快速繁殖条件的优化
蔡坤秀，陈振东，林宗铿，林秀香，郑少缘
（福建省热带作物科学研究所，福建 漳州 ３６３００１）
收稿日期：２０１２－０４－０６初稿；２０１２－０４－２７修改稿
作者简介：蔡坤秀 （１９７６－），女，助理研究员，主要从事园艺植物组织培养的研究与应用
通讯作者：陈振东 （１９６６－），男，高级农艺师，主要从事园林花卉引种栽培研究与推广
基金项目：福建省科技计划重点项目 （２００４Ｎ０１２）
摘 要：应用正交试验方法研究６－ＢＡ，ＮＡＡ及ＫＴ等３个因子对叶底红组培苗增殖系数的影响，同时考查了
ＩＢＡ、ＮＡＡ和活性炭等３个因子对叶底红组培苗生根培养的影响，试验均按正交表Ｌ９ （３４）形成三因素、三水
平的不同配比。结果表明：适宜叶底红增殖的培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ １．２ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ ０．４ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ ０．１
ｍｇ·Ｌ－１，平均增殖系数３．６２；适于生根的培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．５ｍｇ·Ｌ－１＋活性炭１．０ｇ·Ｌ－１。以泥炭土
和珍珠岩 （２∶１）作为移栽基质，移栽成活率可达９０％以上。
关键词：叶底红；组织培养；快速繁殖；正交试验
中图分类号：Ｓ ６８２ 文献标识码：Ａ
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｈｙｌｌａｇａｔｈｉｓ ｆｏｒｄｉ
ＣＡＩ Ｋｕｎ－ｘｉｕ，ＣＨＥＮ Ｚｈｅｎ－ｄｏｎｇ，ＬＩＮ Ｚｏｎｇ－ｋｅｎｇ，ＬＩＮ Ｘｉｕ－ｘｉａｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｓｈａｏ－ｙｕａｎ
（Ｆｕｊｉａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ，Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ ３６３００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃａｒｂｏｎ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ Ｐｈｙｌｌａｇａｔｈｉｓ
ｆｏｒｄｉｉ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ．Ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｆｒｏｍ ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ［Ｌ９ （３４）］．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ（ａ）ＭＳ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ６－ＢＡ １．２
ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ ０．４ｍｇ·Ｌ－１＋ＫＴ ０．１ｍｇ·Ｌ－１ ｗａｓ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；（ｂ）１／２ＭＳ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ
ｗｉｔｈ ＩＢＡ ０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃａｒｂｏｎ １．０ｇ·Ｌ－１ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ；ａｎｄ（ｃ）ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ
ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ９０％ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｏ ａ ｓｏｉｌ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２／３ｐｅａｔ ａｎｄ １／３ｐｅｒｌｉｔｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｈｙｌｌａｇａｔｈｉｓ ｆｏｒｄｉｉ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
叶 底 红 Ｐｈｙｌｌａｇａｔｈｉｓ ｆｏｒｄｉｉ （Ｈａｎｃｅ）
Ｃ．Ｃｈｅｎ，别名野海棠 （《中国高等植物图鉴》）、叶
下红、大毛蛇、血还魂、沙崩草、还魂红、假紫苏
等，原产中国，分布浙江、江西、广西、广东、福
建、贵州、香港，为野牡丹科锦香草属常绿直立亚
灌木状草本植物，全株可供药用，具有通经活血、
清热燥湿、化积消食等功效［１－２］。叶底红株型低矮
小巧，叶背及花瓣均呈紫红色，植株密披红棕色柔
毛和长腺毛，形态优美，色泽艳丽，是盆栽的佳
品，适宜作室内盆栽观赏，又有家庭保健功能，极
具市场开发前景。但在叶底红的栽培与引种驯化过
程中，受常规种子播种所需的时间较长、种子发芽
成活率极低等因素的影响，难于满足生产需求，组
织培养可大大提高繁殖效率，为进一步开展相关研
究提供技术和材料保障［３－４］。
在野牡丹科植物中，组织培养技术的应用研究
开展较晚，２０００～２００４年马国华等［５－７］对野牡丹、
多花野牡丹、毛稔、地稔和银毛野牡丹建立了有效
的芽繁殖体系和植株再生体系，之后相继报道了铺
地锦、紫毛野牡丹等的组培快繁研究［８－１２］。本研
究旨在探索和建立叶底红组培技术优化体系，以期
为叶底红种质资源的保护和应用开发利用提供技术
和方法。
福建农业学报２７（６）：６２１～６２５，２０１２
Ｆｕｊｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
文章编号：１００８－０３８４ （２０１２）０６－６２１－０５
１ 材料与方法
１．１ 外植体的培养
选取饱满的叶底红成熟种子，在洗洁精水中浸
泡２０ｍｉｎ，自来水冲洗３０ｍｉｎ，于超净工作台上
用７０％酒精表面消毒３０ｓ，置于０．１％升汞中浸泡
１２ｍｉｎ，无菌水冲洗５次，用接种刀剥除种壳，将
种子播种于不添加激素的１／２ＭＳ培养基中培养成
无菌苗，备用。
１．２ 增殖培养基筛选
从无菌苗继代培养后获得的丛生芽中切取高为
１ｃｍ左右的芽作为增殖材料。用Ｌ９ （３４）正交设
计［１３］，选择６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＫＴ ３因素的３种浓度
水平，根据增殖系数分析不同因素、不同水平的差
异显著性，对效果显著的因子进行多重比较。基本
培养基为 ＭＳ，蔗糖３０．０ｇ·Ｌ－１。每处理接种５０
个材料，３次重复。培养基添加组合成分见表１。
调查从１个芽上产生的新芽数即增殖系数 （有效芽
高≥１ｃｍ）［１４］。
表１ 增殖培养正交试验因素水平表Ｌ９（３４）
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９（３４）ｆｏｒ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平
（培养基代号）
因素
Ａ：６－ＢＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｂ：ＮＡＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｃ：ＫＴ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｍ１ ０．４ ０．０ ０．０
Ｍ２ ０．４ ０．２ ０．１
Ｍ３ ０．４ ０．４ ０．２
Ｍ４ ０．８ ０．０ ０．１
Ｍ５ ０．８ ０．２ ０．２
Ｍ６ ０．８ ０．４ ０．０
Ｍ７ １．２ ０．０ ０．２
Ｍ８ １．２ ０．２ ０．０
Ｍ９ １．２ ０．４ ０．１
１．３ 生根培养基的筛选
在组织培养丛生芽中切取高为２ｃｍ的芽进行
生根培养。采用 Ｌ９ （３４）正交设计，观察ＩＢＡ、
ＮＡＡ、活性炭等３个因素对生根的影响，基本培
养基为１／２ＭＳ，分别添加蔗糖３０ｇ·Ｌ－１。每处理
接种５０个材料，３次重复。培养基添加组合成分
见表２。培养６０ｄ后调查生根情况，包括根数、根
长、苗高等，将不同配方培养出的生根苗分开移栽
于相同的基质中，管理方法一致，１个月后调查移
栽成活率。
表２ 生根培养正交试验因素水平表Ｌ９（３４）
Ｔａｂｌｅ ２ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９（３４）ｆｏｒ
ｒｏｏｔｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平
（培养基代号）
因素
Ａ：ＩＢＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｂ：ＮＡＡ／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｃ：活性炭／
（ｇ·Ｌ－１）
Ｒ１ ０．０ ０．０ ０．０
Ｒ２ ０．０ ０．１ １．０
Ｒ３ ０．０ ０．３ ２．０
Ｒ４ ０．３ ０．０ １．０
Ｒ５ ０．３ ０．１ ２．０
Ｒ６ ０．３ ０．３ ０．０
Ｒ７ ０．５ ０．０ ２．０
Ｒ８ ０．５ ０．１ ０．０
Ｒ９ ０．５ ０．３ １．０
１．４ 培养条件
接种后的材料放在温度为２５±２℃的培养室中
培养，光照强度为１ ５００ｌｘ，每日光照１２ｈ。
１．５ 数据分析
试验数据采用ＤＰＳ统计分析软件进行分析。
２ 结果与分析
２．１ 植物生长调节剂对叶底红增殖的影响
对添加不同激素水平正交设计的组合进行极差
和方差分析，得出的结果见表３。极差分析显示，
６－ＢＡ因子是对试验结果影响最大的因素，ＫＴ次
之；方差分析结果也表明６－ＢＡ对芽的增殖作用有
极显著影响，同时 ＮＡＡ、ＫＴ的影响效果也达到
极显著。由结果可以看出，随６－ＢＡ、ＮＡＡ浓度的
增加，增殖系数也相应提高；而 ＫＴ浓度在０～
０．１ｍｇ·Ｌ－１间二者呈正比关系，而浓度达到０．２
ｍｇ·Ｌ－１时增殖系数反而下降。试验过程中 Ｍ１、
Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ９均可诱导
分化出不定芽，但增殖系数存在极显著差异。Ｍ８
和 Ｍ９上不定芽诱导数最多，增殖系数分别达到
３．６２、３．４０。各种培养基上芽的长势也存在差别，
在 Ｍ８、Ｍ９上长势最好，芽高２．５ｃｍ以上的分别
达到３８％和４２％，其他培养基均在２０％以下；且
在这２个培养基上长出的芽粗壮，叶面宽最大可达
１．２ｃｍ，叶面浓绿带绒毛、叶背紫红色，能正常表
现出叶底红原有的性状 （图１－ａ）。
由极差分析和方差分析得出最佳的激素配比组
２２６ 福建农业学报 第２７卷
合是Ａ３Ｂ３Ｃ２，这恰与该次正交试验中增殖系数最
高的９号处理相同。因此，叶底红增殖培养基的最
佳激素配比为６－ＢＡ １．２ ｍｇ·Ｌ－１ ＋ＮＡＡ ０．４
ｍｇ·Ｌ－１ ＋ＫＴ ０．１ ｍｇ·Ｌ－１，平均增殖系数
３．６２。
２．２ 不同添加物对叶底红生根壮苗的影响
生根培养方差分析结果 （表４）显示，叶底红
不定芽在 Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、
Ｒ９这９个培养基上都有根的生长，但各处理在根
数、根长、苗高、移栽成活率这４个观察指标均存
在极显著差异。在Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３上长出的根又细又
短，苗细弱，叶色淡绿，移栽成活率明显低于其他
培养基的生根苗；Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９上的生根苗健壮，
根粗且二级根较多，叶片能表现出叶底红原有的性
状 （叶面浓绿带有绒毛，叶背紫红色） （图１－ｂ、
ｃ），移栽成活率都在９０％以上，特别是Ｒ７、Ｒ９的
生根苗移栽成活率分别达到９５％、９４％。
极差分析结果 （表４）表明，ＩＢＡ对试验结果
影响最大，由Ｒ值大小比较各因子的主次顺序是：
ＩＢＡ＞活性炭＞ＮＡＡ。由此认为，ＩＢＡ是影响叶
底红生根壮苗的关键因子。
由试验结果分析并结合实际应用，筛选出叶底
红生根壮苗最佳的处理组合为 Ａ３Ｂ１Ｃ２，即ＩＡＢ
０．５ｍｇ·Ｌ－１＋活性炭１．０ｇ·Ｌ－１。
２．３ 试管苗的炼苗和移栽
将生根好的试管苗在温室内先炼苗７ｄ，然后
逐渐旋松瓶盖炼苗２ｄ后，将生根试管苗移出，用
清水洗净根部培养基，用０．１％多菌灵浸泡２～５
ｍｉｎ，移栽至装有泥炭土和珍珠岩 （２∶１）混合基
质的苗盘内，浇足定根水，初期用小拱棚覆盖薄膜
７～１４ｄ保湿，
图１ 叶底红组织培养和生根培养结果
Ｆｉｇ．１ Ｒｅｓｕｔｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ
Ｐｈｙｌｌａｇａｔｈｉｓ ｆｏｒｄｉ
注：ａ－增殖；ｂ－生根瓶苗；ｃ－生根苗
表３ 增殖培养正交试验设计与极差分析结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ ｒａｎｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
试验号
因 素
Ａ Ｂ Ｃ
平均增殖
系 数
芽长势
１ １ １ １ １．４８Ｃ 弱小，叶偏黄，无绒毛
２ １ ２ ２ １．８０Ｃ 弱小，叶淡绿，无绒毛
３ １ ３ ３ １．５６Ｃ 弱小，叶偏黄，无绒毛
４ ２ １ ２ ２．５２Ｂ 较粗壮，叶较绿，有绒毛，叶背微紫色
５ ２ ２ ３ １．７９Ｃ 弱小，叶淡绿，无绒毛
６ ２ ３ １ ２．７２Ｂ 较粗壮，叶较绿，有绒毛，叶背微紫色
７ ３ １ ３ ２．５６Ｂ 较粗壮，叶较绿，有绒毛，叶背微紫色
８ ３ ２ １ ３．４０Ａ 粗壮，叶深绿，绒毛粗，叶背紫红色
９ ３ ３ ２ ３．６２Ａ 粗壮，叶深绿，绒毛粗，叶背紫红色
Ｋ１ １．６１ ２．１９ ２．５３
Ｋ２ ２．３４ ２．３３ ２．６５
Ｋ３ ３．１９ ２．６３ １．９７
Ｒ １．５８ ０．４５ ０．６８
ＳＳ １１．２５ ０．９４ ２．４１
ｄｆ ２ ２ ２
ＭＳ ５．６３ ０．４７ １．２０
Ｆ １４８．４７ １２．４２ ３１．７７
差异显著性 ＊＊ ＊＊ ＊＊
３２６第６期 蔡坤秀等：叶底红组织培养和快速繁殖条件的优化
表４ 生根培养正交试验设计与极差分析结果
Ｔａｂｌｅ ４ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ ｒａｎｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
试验号
因 素
Ａ Ｂ Ｃ
平均
根数
平均根长
／ｃｍ
平均苗高
／ｃｍ
移栽成活率
／％
根长势
１ １ １ １ ８．６０ １．７１ ４．６２ ５８ 根细弱
２ １ ２ ２ ８．６５ １．６６ ４．７１ ６１ 根细弱
３ １ ３ ３ ８．９０ ２．８６ ４．５９ ６２ 根细弱
４ ２ １ ２ １８．３３ ３．６３ ５．５３ ８３ 根较粗壮
５ ２ ２ ３ ２１．４ ４．１４ ４．６９ ８６ 根较粗壮
６ ２ ３ １ １７．３７ ３．２１ ４．６５ ８２ 根较粗壮
７ ３ １ ３ ２０．０３ ４．９９ ５．６０ ９５ 根粗壮，长势旺
８ ３ ２ １ １８．２７ ４．０１ ５．１５ ９１ 根粗壮
９ ３ ３ ２ １９．４ ４．２５ ５．９１ ９４ 根粗壮，长势旺
根数 Ｋ１ ８．７１ １５．９９ １４．４１
Ｋ２ １８．３０ １５．７０ １５．４６
Ｋ３ １９．５７ １４．８９ １６．７１
Ｒ １０．８５ １．１０ ２．３０
根长 Ｋ１ ２．０７ ３．４４ ２．９７
Ｋ２ ３．６６ ３．２７ ３．１８
Ｋ３ ４．４１ ３．４４ ３．９９
Ｒ ２．３４ ０．１７ １．０２
苗高 Ｋ１ ４．６４ ５．２６ ４．８１
Ｋ２ ４．９６ ４．８５ ５．３８
Ｋ３ ５．５６ ５．０５ ４．９７
Ｒ ０．９２ ０．４１ ０．５８
３ 讨 论
前人研究表明同科野牡丹、铺地锦、多花野牡
丹、毛稔、地稔、银毛野牡丹和紫毛野牡丹等野牡
丹科等７个种均适用 ＭＳ基本培养基，且６－ＢＡ与
ＮＡＡ按一定的配比使用对野牡丹科各种芽有较理
想的 增 殖 效 果，６－ＢＡ 适 用 浓 度 为 ０．１～５．０
ｍｇ·Ｌ－１，ＮＡＡ浓度为０．０１～１．０ｍｇ·Ｌ－１［５－１２］。
本研究结果表明：６－ＢＡ是叶底红增殖的关键因子，
与ＮＡＡ 的最佳浓度分别为１．２ｍｇ·Ｌ－１、０．４
ｍｇ·Ｌ－１，与前人研究结果一致；本研究还发现，
配合使用０．１ｍｇ·Ｌ－１ ＫＴ对叶底红的增殖系数有
显著的促进作用，６－ＢＡ、ＮＡＡ和 ＫＴ ３种生长调
节剂配合使用效果更佳。
不定根的形成是组织培养过程中一个非常关键
环节，它直接影响到组培苗移栽成活率的高低，关
系到组织培养成败［１５］。叶底红与上述几种同科的
植物一样，生根都比较容易。在增殖培养过程中，
有些芽长至３ｃｍ以上在芽节会有根的形成，但根
细弱、每个芽节只有１～２条根，这样的生根芽直
接进行移栽无法成活。同时，在移栽过程中，移栽
成活率与苗的粗壮程度及根数成正比关系。因此，
要生产出可移栽的生根苗，生根培养这个环节是必
不可少的。添加０．５ｍｇ·Ｌ－１ＩＢＡ既能生产出粗壮
的生根苗，活性炭对叶底红生根培养具有重要的作
用。活性炭在植物组织培养特别是生根培养的积极
作用：一是提供了黑暗条件，二是吸附并排除培养
基中的有害物质［１６］。在组织培养过程中，一般是
植物自身产生了有害物质，培养基才会出现褐化现
象［１７］。在叶底红的组织培养过程中，很少发现褐
化现象，因此可能是叶底红生根培养过程需要黑暗
条件，而活性炭提供黑暗条件，所以对生根起到促
进的作用。
叶底红组培苗叶片较大，在炼苗和移栽过程中
很容易因失水而萎蔫，直接影响到移栽成活率。因
此，在炼苗时采用逐渐旋松而不去掉瓶盖，让组培
苗对外界环境的温湿度有一个逐渐适应的过程；移
栽后覆盖薄膜７～１４ｄ，并每天叶面喷雾，以减少
４２６ 福建农业学报 第２７卷
叶片水分蒸发，提高移栽成活率；以泥炭土和珍珠
岩 （２∶１）作为移栽基质，移栽成活率可达９０％
以上。
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（责任编辑：黄爱萍）
５２６第６期 蔡坤秀等：叶底红组织培养和快速繁殖条件的优化