全 文 ：HPLC法测定秦岭柴胡及其不同提取物中柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d
卫 昊1， 刘 清1， 卫伟光2， 崔春利1， 张 倩1
(1． 陕西中医学院药学院，陕西 咸阳 712046;2． 陕西省西安植物园，陕西 西安 710061)
收稿日期:2012-08-16
基金项目:陕西省教育厅科学研究计划项目 (2010JK499) ;咸阳市科技发展计划项目 (2010-K14-02 (5)
作者简介:卫 昊 (1979—) ，男，硕士，讲师，研究方向:中药物质基础与药效毒理的相关性。Tel: (029)38185165，E-mail:
weihao217@ 163． com
摘要:目的 建立 HPLC法测定秦岭柴胡及其不同溶剂提取部位中柴胡皂苷 a和 d的方法。方法 色谱柱为 Diamonsil
C18 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，以乙腈-水 (25 ∶ 75)为流动相，体积流量为 1 mL /min，检测波长 210 nm。结果 柴
胡皂苷 a在 2. 16 ～ 28. 875 μg 内线性关系良好，相关系数为 0. 999 9;平均回收率为 98. 31%，RSD为 1. 04%;柴胡皂
苷 d在 0. 144 ～ 1. 8 μg内线性关系良好，相关系数为 0. 999 9;平均回收率为 97. 00%，RSD为 1. 12%;东太白秦岭柴
胡的柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d含有量高于西太白秦岭柴胡。65%乙醇提取液柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d含有量大于水提
取液中的含有量。结论 此方法简便、快速、准确，为秦岭柴胡质量控制和深入研发提供实验依据。
关键词:秦岭柴胡;柴胡皂苷;定量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)02-0342-04
Determination of saikosaponin a，d in different extracts of Bupleurum longicaule
Wall． ex DC． var． giraldii Wolff by HPLC
WEI Hao1， LIU Qing1， WEI Wei-guang2 ， CUI Chun-li1， ZHANG Qian1
(1． College of Pharmacy，Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046，China;2． Xian Botanical Garden of Shaanxi Prov-
ince，Xian 710061，China)
KEY WORDS:Bupleurum longicaule Wall． ex DC． var． giraldii Wolff;saikosaponin;quantitative analysis;HPLC
秦岭柴胡 Bupleurum longicaule Wall． ex DC．
var． giraldii Wolff． 又称金柴胡 (太白) ，系伞形科
柴胡属多年生草本植物，与 2010 年版 《中国药
典》一部中收载的柴胡同属不同种，属于高山珍
稀药用植物。主产秦岭太白山、光头山及佛坪等
地，在甘肃天水、武山，青海的民和、玉树和山西
也均有分布。味苦，性微寒，归肝经。现代药理研
究表明秦岭柴胡有保肝，解热，抗菌，抗病毒，消
炎，镇咳，预防消化道溃疡等作用［1-2］。柴胡属植
物化学成分有三萜皂苷、黄酮类、植物甾醇、香豆
精类、木脂类及少量挥发油［3-4］，其中皂苷类成分
中含有量较高的有柴胡皂苷 a、c、d。药理实验研
究表明皂苷 a、d 具有明显的药理活性［5］，目前柴
胡皂苷 a、d 已成为检验药用柴胡质量的标准［6］。
因此对柴胡皂苷 a、d 进行定量分析，可作为评价
秦岭柴胡生药质量的重要依据。然而，现有文献
中，关于 HPLC法测定柴胡皂苷 a 的报道较多，但
未见有对秦岭柴胡中柴胡皂苷 a、d 同时进行定量
测定的报道。故本研究采用 HPLC法，选择合适的
色谱条件同时对生长在东、西太白山上的秦岭柴胡
中柴胡皂苷 a、d 进行定量测定研究，以期为今后
秦岭柴胡的开发和应用提供一定的实验基础。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 2695 高效液相色谱仪，配 Wa-
ters 2996DAD，Empower色谱工作站，BT25s (十万
分之一)电子天平 (北京赛多利斯仪器有限公
司) ，LD—4 型高速中药粉碎机 (浙江省温岭市大
海药材器械厂) ，CQ—250 型超声清洗器 (上海超
声仪器厂)。
1. 2 试药 柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d 对照品 (中
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国药品生物制品检定所，供定量测定用，批号依次
为:110777-200507、110778-200505)。秦岭柴胡:
1 号药材样品采自东太白山 (陕西眉县)海拔
3 400 ～ 3 500 m 处;2 号药材样品采自西太白山
(陕西太白县)海拔 3 400 m 左右处。均经陕西中
医学院王继涛高级实验师鉴定为伞形科植物秦岭柴
胡 Bupleurum longicaule Wall． ex DC． var． giraldii
Wolff的全草。乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其余
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱 (250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-水 (25 ∶ 75) ;体
积流量 1. 0 mL /min;检测波长 210 nm;柱温 29
℃;进样量 10 μL。
2. 2 柴胡皂苷 a、d对照品溶液的制备 取柴胡皂
苷 a、柴胡皂苷 d对照品各适量，精密称定，加甲
醇制成每 1 mL含柴胡皂苷 a 1. 075 mg、含柴胡皂
苷 d 0. 072 mg的对照品溶液，摇匀，即得。
2. 3 秦岭柴胡不同溶剂提取液的制备 取秦岭柴
胡 1 号、2 号样品各约 250 g，精密称定，分别加
水煎煮 2 次，每次 2 h，过滤，合并滤液，加热浓
缩，分别定容于 250 mL 量瓶中;另取秦岭柴胡 1
号、2 号样品各约 250 g，精密称定，分别以 65%
乙醇及 95%乙醇为溶剂加热回流 2 次，过滤，合
并滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩定容至 250mL
量瓶中。
2. 4 供试品溶液的制备
2. 4. 1 秦岭柴胡药材供试品溶液的制备 取秦岭
柴胡 1 号、2 号样品粉末 (过四号筛)各约 1 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加入含 5%浓氨试液
的甲醇溶液 25 mL，密塞，30 ℃ 水温超声处理
(功率 200 W，频率 40 kHz)30 min，滤过，用甲
醇 20 mL分 2 次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合
并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至 5
mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤
液，即得，临用前过 0. 45 μm 滤膜，作为进样
溶液［7］。
2. 4. 2 秦岭柴胡不同溶剂提取供试品溶液的制备
精密吸取 2. 3 项下秦岭柴胡 1 号、2 号样品水提
取浓缩液 5 mL，65%乙醇提取浓缩液 2 mL，95%
乙醇提取浓缩液 4 mL，置于分液漏斗中，以乙醚
脱脂 3 次，每次 20 mL，并以水饱和正丁醇萃取 3
次，每次 30 mL，再以正丁醇饱和的水洗涤 2 次，
每次 30 mL，将得到的上层液在蒸发皿中水浴挥干
正丁醇，再以甲醇溶解并将经上述处理的水提取物
定容至 2 mL 量瓶，65%乙醇、95%乙醇提取物均
定容至 5 mL量瓶，摇匀，均以 0. 45 μm 的微孔滤
膜过滤，作为供试品溶液［8-11］。
2. 5 系统适用性试验 精密吸取柴胡皂苷 a 对照
品溶液、柴胡皂苷 d对照品溶液、东太白秦岭柴胡
65%乙醇提取液制得的供试品溶液，注入 HPLC 色
谱仪，色谱图见图 1，在选定的色谱条件下柴胡皂
苷 a和柴胡皂苷 d 的理论塔板数均不少于 6 000，
与其他峰的分离度均大于 1. 5。
A． 柴胡皂苷 a对照品 B． 柴胡皂苷 d 对照品 C． 秦岭柴
胡 1 号样品 65%乙醇提取物的供试品
A． saikosaponin a B． saikosaponin d C． 65% ethanol extract
of Bupleurum cultured in East Taibai Mountain
图 1 高效液相色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms
2. 6 方法学考察
2. 6. 1 标准曲线的制备 精密吸取 2. 2 项下的柴
胡皂苷 a 对照品溶液和柴胡皂苷 d 对照品溶液各
2、4、8、12、16、20、25 μL 注入高效液相色谱
仪，测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，
绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表 1。
表 1 标准曲线
Tab. 1 Standard curve
对照品 回归方程 相关系数 线性范围 /μg
柴胡皂苷 a A =39 368. 64C －5 304. 523 0. 999 9 2. 16 ～ 28. 875
柴胡皂苷 d A =314 266. 9C －589. 016 0. 999 9 0. 144 ～ 1. 80
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2. 6. 2 精密度试验 精密吸取 1. 075 mg /mL 的柴
胡皂苷 a对照品溶液和 0. 072 mg /mL的柴胡皂苷 d
对照品溶液，按同样色谱条件进行 HPLC 分析，各
连续进样 5 次，每次 10 μL，计算峰面积，RSD 分
别为 1. 6%和 0. 62%，表明本法精密度良好。
2. 6. 3 稳定性试验 精密吸取秦岭柴胡 1 号样品
65%乙醇提取物的供试品 10 μL，在 0、4、8 h 分
别进样分析，记录色谱峰面积，结果柴胡皂苷 a 和
柴胡皂苷 d 峰面积的 RSD 值分别为 0. 08% 和
1. 58%。结果表明，供试品在本实验条件下稳定性
良好。
2. 6. 4 重复性试验 取秦岭柴胡药材 1 号样品粉
末 5 份，每份约 2 g，按 2. 3 项和 2. 4. 2 项 65%乙
醇回流提取方法制备，并进样分析，记录色谱峰面
积，结果柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 峰面积的 RSD
值分别为 1. 59%和 1. 00%。结果表明，本方法重
复性较好。
2. 6. 5 加样回收率试验 取柴胡皂苷 a (1. 075
mg /mL)对照品溶液 5. 3 mL、柴胡皂苷 d (0. 072
mg /mL)对照品溶液 7 mL 加入秦岭柴胡药材 1 号
样品粉末中，按 2. 3 项和 2. 4. 2 项 65%乙醇回流提
取方法制备的供试品溶液分别于 10 mL量瓶，混合
均匀，定容至刻度，然后进行 HPLC 分析，结果柴
胡皂苷 a 的平均回收率为 98. 31%，RSD 为
1. 04%;柴胡皂苷 d 的平均回收率为 97. 00%，
RSD为 1. 12%。结果见表 2 和表 3。
表 2 柴胡皂苷 a回收率试验结果
Tab. 2 Results of recovery tests of saikosaponin a
取样
量 / g
样品中
量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
RSD /%
1. 001 3 5. 706 3 5. 697 5 11. 209 0 97. 58
1. 000 4 5. 703 7 5. 697 5 11. 319 2 98. 56
1. 002 1 5. 708 6 5. 697 5 11. 360 5 99. 20 1. 04
1. 000 9 5. 705 2 5. 697 5 11. 287 6 98. 98
0. 999 7 5. 701 7 5. 697 5 11. 292 7 98. 13
1. 001 5 5. 706 9 5. 697 5 11. 370 8 99. 41
表 3 柴胡皂苷 d回收率试验结果
Tab. 3 Results of recovery tests of saikosaponin d
取样量 /
g
样品中
量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
mg
RSD /%
1. 001 3 0. 533 9 0. 504 1. 023 1 97. 06
1. 000 4 0. 533 4 0. 504 1. 020 8 96. 71
1. 002 1 0. 534 3 0. 504 1. 017 9 95. 95 1. 12
1. 000 9 0. 533 7 0. 504 1. 033 0 99. 07
0. 999 7 0. 533 0 0. 504 1. 021 5 96. 92
1. 001 5 0. 534 0 0. 504 1. 019 4 96. 31
2. 7 东西太白秦岭柴胡比较 分别取秦岭柴胡 1
号、2 号样品药材，按 2. 3 项下方法制备 (2 号样
品即西太白秦岭柴胡定容于 2 mL 量瓶中) ，精密
吸取供试品溶液 10 μL 注入高效液相色谱仪，按
2. 1 项下色谱条件测定，计算柴胡皂苷 a 和柴胡皂
苷 d的量，结果见表 4 和 5。
表 4 药材供试品溶液中柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 测定
结果
Tab. 4 Determination results of saikosaponin a and saiko-
saponin d in samples of different extracts
药材来源 取样量 /g
柴胡皂
苷 a /%
柴胡皂
苷 d /%
柴胡皂苷
(a + d)/%
平均值
东太白秦岭柴胡 1. 007 8 0. 398 1 0. 023 3 0. 421 4 0. 409 7
1. 000 4 0. 368 7 0. 029 2 0. 397 9
西太白秦岭柴胡 1. 003 6 0. 248 8 0. 004 7 0. 253 5 0. 242 6
1. 004 6 0. 227 5 0. 004 2 0. 231 7
表 5 不同提取部位柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d测定结果
Tab. 5 Determination results of saikosaponin a and saiko-
saponin d in samples of different extracted parts
提取物
柴胡皂
苷 a /%
柴胡皂
苷 d /%
柴胡皂苷
(a + d)/%
平均值
秦岭柴胡 1号样品水提物 0. 147 6 0. 006 1 0. 153 7
0. 136 8 0. 005 5 0. 142 3 0. 148 0
秦岭柴胡 2号样品水提物 0. 105 7 0. 002 9 0. 108 1
0. 099 8 0. 003 3 0. 103 1 0. 1056
秦岭柴胡 1号样品 65%乙醇提取物 0. 287 8 0. 008 0 0. 295 8
0. 279 1 0. 008 8 0. 287 9 0. 2919
秦岭柴胡 2号样品 65%乙醇提取物 0. 220 0 — 0. 220 0
0. 222 0 — 0. 222 0 0. 221 0
秦岭柴胡 1号样品 95%乙醇提取物 0. 155 4 — 0. 155 4
0. 159 3 — 0. 159 3 0. 1573
秦岭柴胡 2号样品 95%乙醇提取物 0. 190 3 0. 006 0 0. 196 3
0. 188 7 0. 007 7 0. 196 4 0. 196 3
3 讨论
柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d结构中的环氧结构在
高温或酸性条件下易开环，转化成柴胡皂苷 b1 和
b2，因此提取条件需要加以注意，最好在碱性条
件下低温提取，因此制定了 2. 4. 1 项下的药材供试
品溶液制备方案。而在工业生产中，提取溶媒通常
为水和乙醇，所以本实验在供试样品制备中采用
2. 3 项下的提取方案。柴胡皂苷结构见图 2。
一般采用 50% ～ 70%乙醇提取中等极性的成
分，85% ～95%乙醇提极性较小成分，本实验采用
水、65%乙醇和 95%乙醇来提取药材，是为了后
续进一步进行其药效学评价和量效关系而设计的提
取方案。从表 5 中可以看出，65%乙醇提取物中柴
胡皂苷 a和 d 的含有量高于水和 95%乙醇提取物
中的柴胡皂苷 a和 d。由于柴胡皂苷在含水丁醇或
戊醇中溶解度较好［12］，因此本实验将正丁醇作为
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图 2 柴胡皂苷结构
Fig. 2 Structures of saikosaponins
萃取柴胡皂苷的溶剂。
在 2. 7 项下进行西太白秦岭柴胡中柴胡皂苷 d
测定时，由于在拟定的供试品制备条件下峰面积太
小，低于线性范围的下限，因此，将其最终定容体
积确定为 2 mL，使得测定的峰面积处于线性范围
内，保证了测定结果的准确性。
本实验采用 HPLC法对不同生长区域的秦岭柴
胡及其不同溶剂提取物中柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d
进行了测定，其分析方法简便可行。但柴胡皂苷 d
峰面积小，含有量低，其中，以秦岭柴胡 2 号样品
65%乙醇提取物，秦岭柴胡 1 号样品 95%乙醇提
取物中柴胡皂苷 d 峰型最小，经计算 S /N (信噪
比)小于 10，峰面积不可靠，不能有效计算其量。
表 5 结果表明:不同溶剂系统的提取物中柴胡皂苷
a和柴胡皂苷 a、d 之和的差异较大，不能单用柴
胡皂苷 a的含有量来评价柴胡的质量，最好两者兼
顾。另外，本实验通过对两种产地的秦岭柴胡不同
提取物中柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d的测定，也为下
一步开展药理作用中量效关系研究提供了一定的实
验依据。
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