全 文 ：HPLC测定长形肉豆蔻及其不同炮制品挥发油中甲基丁香酚 、异甲基丁
香酚及黄樟醚含量
赵启苗 , 　王远志 , 　贾天柱＊
(辽宁中医药大学 ,辽宁 大连 116600)
收稿日期:2008-08-01
作者简介:赵启苗(1983-),女 ,硕士 ,研究方向:中药炮制。 E-mail:176884637miao@sina.com
＊通讯作者:贾天柱 ,教授 ,博士生导师。Tel:(0411)87586038E-mail:tzjia@263.net
关键词:长形肉豆蔻;炮制品;甲基丁香酚;异甲基丁香酚;黄樟醚;HPLC
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)05-0801-02
　　长形肉豆蔻为肉豆蔻科植物长形肉豆蔻 Myristicaargent-
ea.Warb.的干燥种仁。同肉豆蔻具有相似的功效 , 温中行气 ,
涩肠止泻。用于脾胃虚寒 ,久泻不止, 脘腹胀痛, 食少呕吐。
在印度尼西亚市场上圆形的肉豆蔻(MyristicafragransHout.
)常作香料 ,而长形则作为药用 ,并且长形肉豆蔻在性状上与
肉豆蔻较为相近 ,其主要成分为挥发油和脂肪油等, 据文献报
道止泻成分为甲基丁香酚和异甲基丁香酚 , 毒性成分为黄樟
醚 [ 1 , 2]故本试验采用高效液相色谱法以甲基丁香酚, 异甲基丁
香酚 、黄樟醚为指标 ,测定长形肉豆蔻及其炮制品中这 3种成
分的含量变化 , 方法简便 、灵敏 、准确 ,为建立科学的长形肉豆
蔻及其炮制品的质量标准及炮制原理解析提供了依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　岛津LC-10AT高效液相色谱仪 ,日本岛津 Shim-
pack, VP-ODS(4.6 mm×150 mm, 5 μm), UV检测器。
1.2　试药　黄樟醚对照品为自行分离精制(经波谱鉴定和
高效液相色谱法面积归一化法测定 ,纯度 >98.0%);甲基丁
香酚(纯度 >98%, 购于百灵威公司 , 产品号:P1103), 和异
甲基丁香酚(纯度为 >98%,购于百灵威公司 , 产品号:ALR-
061N);甲醇为色谱纯 , 水为蒸馏水 , 磷酸为分析纯;长形肉
豆蔻购于安徽亳州药材市场 , 经辽宁中医药大学翟延君教授
鉴定为肉豆蔻科植物长形肉豆蔻(Myristicaargentea.Warb.)
的干燥种仁。
2　炮制品的制备
2.1　麸煨　取麦麸和肉豆蔻 , 同置热锅内 , 用文火加热 , 至
肉豆蔻表面呈棕黄色 , 麦麸呈黄色时 ,取出 ,筛去麦麸 , 放凉。
用时捣碎。每 100 kg肉豆蔻 , 用麦麸 50 kg。
2.2　泡后麸煨　取净肉豆蔻 ,先用适量清水浸泡 ,然后取出
稍晾 , 待表面无太多水迹时 , 与麦麸同置热锅内 , 用文火加
热 , 至肉豆蔻表面呈棕黄色 , 麦麸呈焦黄色时 , 取出 , 筛去麦
麸 , 放凉。用时捣碎。每 100 kg肉豆蔻 ,用麦麸 50kg。
2.3　面裹煨　取面粉加适量水 , 做成团块 , 压成薄片 ,将肉
豆蔻逐个包裹(包裹前先将肉豆蔻表面沾上少许滑石粉),
倒入已炒热的滑石粉或沙子中 , 拌炒至面皮呈焦黄色时 , 取
出 ,筛去滑石粉或沙子后 , 剥去面皮 , 放凉。每 100 kg肉豆
蔻 ,用滑石粉 50kg。
3　方法与结果
3.1　色谱条件
色谱柱:日本岛津 Shim-pack, VP-ODS(4.6 mm×150
mm, 5μm);流动相:甲醇 -0.2%磷酸 (70∶ 30), 流速 1
mL/min,柱温:40℃;检测波长:280 nm。
3.2　对照品溶液的制备
3.2.1　甲基丁香酚对照品溶液:精密称取甲基丁香酚对照
品 12.32 mg, 置 10 mL量瓶中 , 加甲醇溶解稀释至刻度 , 摇
匀。精密吸取 5 mL, 置 100 mL量瓶中 , 加甲醇溶解稀释至
刻度 ,摇匀。制成每 1 mL含 0.061 60 mg的溶液。
3.2.2　异甲基丁香酚对照品溶液:精密称取异甲基丁香酚
对照品 13.02 mg, 置 100 mL量瓶中 , 加甲醇溶解稀释至刻
度 ,摇匀。精密吸取 5 mL,置 100 mL量瓶中 , 加甲醇溶解稀
释至刻度 ,摇匀。制成每 1 mL含 0.006 510 mg的溶液。
3.2.3　黄樟醚对照品溶液:精密称取黄樟醚对照品 14.01
mg, 置 25 mL量瓶中 ,加甲醇溶解稀释至刻度 , 摇匀。制成
每 1mL含 0.560 4 mg的溶液。
3.3　线性关系考察
精密吸取甲基丁香酚对照品溶液和黄樟醚对照品溶液
1、3、5、7、9μL,以及精密吸取异甲基丁香酚对照品溶液 3、5、
7、9、11 μL溶液 , 按上述色谱条件测定峰面积 , 以峰面积积
分值为纵坐标 ,各对照品进样量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得
回归方程如下:甲基丁香酚:Y=60 177X-35 186, r=0.999 7。
甲基异丁香酚进样量在 0.061 60 ～ 0.554 4 μg范围内与峰
面积呈良好的线性关系。 异甲基丁香酚:Y=12 632X-
5 029, r=0.999 6。异甲基丁香酚进样量在 0.019 53 ～
0.071 61μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。黄樟醚:Y
=614 922X-443 742, r=0.999 8。黄樟醚进样量在 0.560 4
～ 5.043 6 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3.4　供试品溶液的制备
取长形肉豆蔻及其各种炮制品粉末(过 20目筛)20 g,
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2009年 5月
第 31卷　第 5期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
May2009
Vol.31　No.5
分别按 2005年版药典附录 XD挥发油提取方法 , 即置 1 000
mL圆底烧瓶中 ,加水 700 mL, 加热回流 2 h。所得挥发油用
约 40mL甲醇全部定容到 50 mL量瓶中 , 加 0.5 mL氯仿助
溶 , 然后加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 精密吸取此溶液 3 mL, 定
容到 25 mL量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,过 0.45μm的
超滤膜 , 即得供试品溶液。
3.5　精密度实验
精密吸取同一供试品溶液 10 μL, 注入高效液相色谱
仪 , 连续进样 5次 ,甲基丁香酚 、异甲基丁香酚 、黄樟醚色谱
峰峰面积的 RSD分别为 1.60%、1.59%、1.39%(n=5), 结
果表明精密度良好。
3.6　重复性实验
精密称取同一批样品各 5份 , 分别按供试品溶液制备方
法操作 , 精密吸取各供试品溶液 10 μL, 分别注入高效液相
色谱仪 , 测定。结果供试品中甲基丁香酚 、异甲基丁香酚 、黄
樟醚含量的 RSD分别为 1.57%、1.60%、1.42%(n=5), 结
果表明本方法重复性良好。
3.7　稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液 , 按 0、 2、4、 6、 8 h时间间隔 ,
分别进样 , 测定甲基丁香酚 、异甲基丁香酚 、黄樟醚色谱峰峰
面积积分值 RSD分别为 1.20%、1.80%、1.87%(n=5), 结
果表明 ,供试品溶液至少在 8 h内测定结果稳定。
3.8　回收率实验
取已知含量的长形肉豆蔻粉末(过 20目筛)20 g各 5
份 ,分别精密称定 , 精密加入甲基丁香酚 、异甲基丁香酚 、黄
樟醚对照品适量 ,按样品供试品溶液项下方法操作 ,测定 ,计
算甲基丁香酚的平均回收率为 98.63%, RSD为 1.80%, 异
甲基丁香酚的平均回收率为 98.98%, RSD为 1.20%, 黄樟
醚的平均回收率为 98.79%, RSD为 1.88%。
3.9　样品含量测定
取长形肉豆蔻的生品和不同炮制品 , 按供试品溶液的制
备方法制备 ,按上述色谱条件 , 精密吸取供试品溶液 10 μL
和对照品溶液 5 μL, 注入高效液相色谱仪 , 进行测定 , 结果
见表 1, 色谱图见图 1、2。
表 1　 长形肉豆蔻生品及不同炮制品的
含量测定结果(n=3)
样品 挥发油/%
甲基丁香酚
/%
异甲基丁香酚
/%
黄樟醚
/%
生品 3.9 0.069 17 0.010 26 0.737 7
麸煨 3.7 0.077 97 0.012 83 0.684 2
泡后麸煨 3.5 0.075 80 0.015 68 0.656 9
面裹煨 3.3 0.069 40 0.009 69 0.708 5
A B
图 1　混合对照品(A)和长形肉豆蔻生品(B)HPLC色谱
1.甲基丁香酚　 2.异甲基丁香酚　3.黄樟醚
4　讨论与小结
4.1　本实验中对流动相加以了考察 ,分别采用甲醇 -水(7∶
3),甲醇 -0.025mol/L磷酸三乙胺(7∶3), 甲醇 -2‰磷酸(7
∶3)为流动相 ,结果发现 , 在甲醇 -2‰磷酸(7∶3)条件下 , 供
试液中甲基丁香酚 、异甲基丁香酚和黄樟醚与相邻组分分离
度良好。且保留时间适宜。
4.2　长形肉豆蔻经炮制后其止泻成分甲基丁香酚均增加 ,
异甲基丁香酚有增有减 , 但对于甲基丁香酚和异甲基丁香酚
整体来说经炮制后其二者的含量之和均为增加 ,并且泡后麸
煨品和麸煨品优于面煨。对毒性成分黄樟醚 ,经炮制后其炮
制品含量均有降低 , 泡后麸煨降低最多 , 因此泡后麸煨优于
其他两种炮制品 , 为最佳的炮制方法。
4.3　长形肉豆蔻炮制后甲基丁香酚和甲基异丁香酚之和的
增加则使止泻作用增强 , 毒性成分黄樟醚降低使毒性降低 ,
进而揭示了炮制原理 ,具有减毒增效的作用。
4.4　据文献报道 ,长形肉豆蔻中黄樟醚含量较少 ,而肉豆蔻
醚含量较多 [ 4] ,本实验采用的长形肉豆蔻中这两种成分的含
量测量结果与之相反 , 特别是肉豆蔻醚含量极低 , 甚至有时
检测不到 ,故未选用肉豆蔻醚作为长形肉豆蔻的指标性成
分 ,而以甲基丁香酚 、异甲基丁香酚 、黄樟醚为指标性成分 ,
其原因可能是由于长形肉豆蔻的药材产地不同 , 其成分含量
有所差异。
参考文献:
[ 1] 　贾天柱 ,沙　明 ,曹爱民 ,等.肉豆蔻不同炮制品挥发油中丁香
酚类成分测定 [ J] .中国中药杂志 , 1997, 22(8):475-477.
[ 2] 　贾天柱 ,沙　明 ,王忠海 ,等.肉豆蔻不同炮制品挥发油中肉豆
蔻醚 、黄樟醚的 HPLC法测定 [ J] .中国中药杂志 , 1997, 22
(7):410-411.
[ 3] 　中国药典 [ S] .一部.2005:198.
[ 4] 　王远志 ,李　坤 ,贾天柱 ,等.肉豆蔻与长形肉豆蔻挥发油成分
GC-MS比较分析 [ J].吉林医药学院学报 , 2008, 29(2):85-87.
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