全 文 :林业科技开发 2013 年第 27 卷第 5 期 111
图 5 薰衣草微胶囊 GC-MS图 图 6 香味胶合板试件 GC-MS图 图 7 未施香胶合板试件 GC-MS图
3 结 论
(1)由 SEM扫描电镜图可知,薰衣草香精微胶囊
存在于胶合板内,并且没有完全被固化后的胶黏剂包
裹,可发挥其所固有的施香功能。
(2)由 GC-MS 检测分析得出,薰衣草香精绝大
多数香味成分仍存在于胶合板中,表明薰衣草香精微
胶囊能良好滞留其中,使胶合板具有缓释香味特性。
(3)采用薰衣草香精微胶囊作为施香剂制造香
味胶合板是可行的,能够制造出表面结合强度良好的
胶合板。其条件为:热压压力 1. 0 MPa,热压温度
105°,热压时间 2. 5 min,施香量为 5%。
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( 责任编辑 葛华忠
櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒
)
doi:10. 3969 / j. issn. 1000-8101. 2013. 05. 031
白花柽柳的组培与快繁技术
刘振林,潘玉霞,姬玉,杨立文,杨俊明
(河北科技师范学院园艺科技学院,河北 昌黎 066600)
收稿日期:2013-01-09 修回日期:2013-06-25
基金项目:国家科技支撑计划重点项目子课题“冀东沿海地区耐盐碱
生态景观植物材料选育技术研究”(编号:2009BADB2B0105)。
作者简介:刘振林(1970 -) ,男,副教授,主要从事园林植物育种和园
林植物应用方面的研究工作。E-mail:zhenlinliu580@ sohu. com
摘 要:以白花柽柳的茎段为外植体,进行组织培养和快速繁殖研究。结果表明: 以 MS 培养基添加 1. 0 mg /L
6-BA + 0. 2 mg /L NAA + 0. 1 mg /L 2,4-D诱导愈伤组织的效果最好,出愈率达 98. 4% ; 以MS培养基添加 1. 5 mg /L
6-BA + 0. 5 mg /L IBA诱导愈伤组织产生芽的效果最好,出芽率达 45. 0%。以 MS 培养基添加 1. 0 mg /L 6-BA +
0. 5 mg /L IBA直接诱导产生丛生芽的效果最好,出芽率达 98. 68%。以 1 /4 MS 培养基诱导生根的效果最好,生根
率达 93% ; 以 V沙子 ∶ V草炭 ∶ V珍珠岩 = 1∶ 1∶ 1的混合基质有利于试管苗的移栽,成活率达 80%。
关键词:白花柽柳;组织培养;快速繁殖
Tissue culture and rapid propagation of Tamarix androssowii Litv. ∥LIU Zhen-lin,PAN Yu-xia,JI Yu,
YANG Li-wen,YANG Jun-ming
Abstract:In the study of tissue culture and rapid propagation,the explants were the stem segments of Tamarix androssowii
Litv. The results indicated:The optimal medium for inducing callus was MS + 1. 0 mg /L 6-BA + 0. 2 mg /L NAA + 0. 1
mg /L 2,4-D,the callus induction rate was 98. 4%;the
optimal proliferation medium was MS + 1. 5 mg /L 6-BA
+0. 5 mg /L IBA,the rate of adventitious bud induction
was 45% . The optimal proliferation medium directly from
stem segments was MS + 1. 0 mg /L 6 -BA + 0. 5 mg /L
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗 技术开发
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IBA,the rate of adventitious bud induction reached 98. 64% . The suitable rooting medium was 1 /4MS,the rooting rate
was 93% ;The optimal matrix for the transplant of the plantlets was sand∶ peat∶ perlite = 1∶ 1∶ 1,in which the survival rate
of plantlets could reach 80% .
Key words:Tamarix androssowii Litv.;tissue culture;rapid propagation
Author’s address:College of Horticulture Science and Technology,Hebei Normal University of Science & Technology,
Changli 066600,Hebei,China
白花柽柳(Tamarix androssowii Litv.)为柽柳科
灌木或小乔木,产于新疆、甘肃、内蒙古及宁夏等省
区,生于荒漠河岸阶地和湖边盐渍化地区,为固沙造
林和改良盐碱地的好树种[1]。同时,本种干形优美,
枝叶和花序都有很高的观赏价值,对于城市绿化,尤
其是盐碱地区的城市绿化也不失为一个理想树
种[2]。白花柽柳虽然用途广泛,但其繁殖方法一直
鲜见研究。本试验选取白花柽柳的茎段为外植体,设
计了组织培养法以及直接诱导丛生芽的快速繁殖法,
旨在为白花柽柳优良苗木的推广和后续生物技术的
研究提供一个技术平台。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
以河北科技师范学院园林实验站未木质化的白
花柽柳的茎段为外植体材料。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 外植体的处理
采集实验站的白花柽柳枝条带回实验室,剪成长
4 cm左右的茎段,浸泡在加有洗衣粉的自来水中 30
min,再用自来水冲洗干净,然后将材料移至超净工作
台上,用 75%的酒精消毒 30 s,无菌水冲洗 3 ~ 4 次,
再用 0. 1%的氯化汞溶液浸泡 5 ~ 6 min,最后再用无
菌水冲洗 3 ~ 4 次。接种时,先将外植体放到已灭菌
的滤纸上吸去多余水分,剪去茎段上下各 5 mm 左右
的部分(防止酒精、氯化汞的药害) ,然后剪成 1. 5 cm
的小茎段作外植体备用[3]。
1. 2. 2 培养基的配制
愈伤组织诱导、愈伤组织生芽及直接诱导产生丛
生芽均以 MS为基本培养基,附加不同浓度的 6-BA、
NAA、2,4-D和 IBA,添加蔗糖浓度为 30 g /L。诱导
生根则以 1 /4 MS 为基本培养基,附加不同浓度的
NAA,添加蔗糖浓度为 15 g /L。以上培养基添加琼脂
6. 5 g /L,pH值 5. 8,以 50 mL 三角瓶为培养容器,每
瓶 25 mL,封口膜包扎,121℃下高温灭菌 20 min。
1. 2. 3 愈伤组织的诱导
在 1. 0 mg /L 6-BA + 0. 2 mg /L NAA(预备试验
中表现好)中添加不同浓度配比的 2,4-D 诱导愈伤
组织。每个处理接种 20 瓶,4 次重复,观察生长情
况,30 d后统计诱导率及愈伤鲜质量。
1. 2. 4 愈伤组织产生不定芽的诱导
将紧密而坚硬的愈伤组织切成 0. 5 cm见方的小
块,接种在不同的分化培养基上,加入不同浓度的细
胞分裂素 6-BA和生长素 IBA诱导不定芽。
1. 2. 5 外植体直接产生丛生芽的诱导
在基本培养基上附加 6-BA 0. 1、0. 5、1. 0 mg /L
共 3 个浓度水平和 IBA 0. 1、0. 5、1. 0 mg /L共 3 个浓
度水平进行正交试验,组成 9 种诱导培养基。每种培
养基 20 瓶,重复 4 次,30 d后观测统计每种培养基诱
导外植体分化不定芽的结果,以确定最适诱导培养
基[4-6]。
1. 2. 6 不定根的分化
幼苗长至 2 cm以上时,将其接入 1 /4 MS基本培
养基中,培养基附加有不同浓度的 NAA,分别为 0、
0. 01、0. 05 mg /L。每处理 20 个,重复 2 次。30 d 后
记录并统计结果。
1. 2. 7 再生植株的移栽
首先在自然光下封口炼苗 7 d,之后将瓶口打开
炼苗 2 d,然后将试管苗从瓶中取出,洗净基部的培养
基,栽至 V沙子 ∶ V草炭 ∶ V珍珠岩 = 1∶ 1∶ 1的混合基质中,基
质已用 0. 2%的高锰酸钾消毒。移栽后要浇透水,置
于 20 ~ 25℃的温室中,保证较高的空气湿度,并适当
遮阴。
1. 3 培养条件
以上培养基的培养温度为(25 ± 1)℃,连续光照
14 h /d,光照强度为 2 500 lx。
1. 4 统计方法
出愈率 =形成愈伤组织的外植体数/接种外植体数
×100%;出芽率 =出芽的外植体数 /接种外植体数 ×
100%;生根率 = 出根的外植体数 /接种外植体数 ×
100%;平均苗高 =出芽的外植体的高度/接种外植体数。
2 结果与分析
2. 1 不同浓度 2,4-D对愈伤组织诱导的影响
不同浓度 2,4-D 对愈伤组织诱导的影响如表 1
所示,结果表明,未添加 2,4-D的培养基中没有诱导
技术开发 欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗
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产生愈伤组织,而添加有 2,4-D 的培养基均可以诱
导产生出愈伤组织,且出愈率均达 88%以上,愈伤量
也较多(图 1)。低浓度(0. 1 mg /L)2,4-D 诱导的愈
伤组织萌动时间较短,出愈率最高,体积大且颜色正
常,而随着 2,4-D 浓度的增加,诱导效果逐渐降低,
高浓度(如 0. 3 mg /L)2,4-D 诱导愈伤的时间长,出
愈率低且长势不良;0. 2 mg /L 的 2,4-D 虽诱导时间
最短,但出愈率略低于 0. 1 mg /L。可见 2,4-D 对诱
导愈伤组织有促进作用,但浓度过高会抑制愈伤的产
生和生长,因此,诱导愈伤组织的最适宜配比为 MS +
1. 0 mg /L 6-BA +0. 2 mg /L NAA +0. 1 mg /L 2,4-D。
表 1 不同浓度 2,4-D对愈伤组织诱导的影响
激素组合 /
(mg·L - 1)
萌动
日期 /d
出愈率 /
%
鲜质量 /
g 颜色
愈伤组织
状况
6-BA 1. 0 +
NAA 0. 2 + 2,4-D 0 无 0 0 无 无愈伤组织产生
6-BA 1. 0 +
NAA 0. 2 + 2,4-D 0. 1 10 98. 4 28. 739
灰白、乳白、
嫩绿
愈伤多,紧密,
长势好
6-BA 1. 0 +
NAA 0. 2 + 2,4-D 0. 2 9 95. 7 24. 084 灰白、乳白 愈伤较多,较松散
6-BA 1. 0 +
NAA 0. 2 + 2,4-D 0. 3 11 88. 2 20. 458
灰白、绿色、黄绿,
颜色较重,有些发褐
愈伤少些,紧密
但有些皱缩
图 1 愈伤组织
2. 2 不同浓度 6-BA、IBA配比对愈伤组织诱导不定
芽的影响
选取生长迅速、表面湿润的乳白或嫩绿色愈伤组
织接种于含不同浓度 6-BA、IBA的培养基中,试验结
果如表 2 所示。可以看出,不定芽的分化能力随着6-
BA浓度的升高而增强:当 6 -BA 浓度依次为 0. 5、
1. 0、1. 5 mg /L 时,分化率由 35%上升到 45%,说明
6-BA对不定芽的分化起着重要的作用。而不定芽
的高度随着 IBA 浓度的增加先升高后降低:当 IBA
浓度为 0. 1 mg /L时,芽平均高度为 0. 43 cm,IBA 为
0. 5 mg /L时,芽平均高度为 0. 61 cm,而 IBA 为 1. 0
mg /L时,芽平均高度为 0. 42 cm,这说明适当的 IBA
浓度有利于芽的伸长生长(图 2)。因此,诱导不定芽
分化的最佳培养基为 MS + 1. 5 mg /L 6 -BA + 0. 5
mg /L IBA。
表 2 不同浓度 6-BA、IBA配比对愈伤组织诱导不定芽的影响
6-BA /
(mg·L - 1)
IBA /
(mg·L - 1)
出芽率 /
%
芽平均
高度 /cm 不定芽的分化状况
0. 1 35. 0 0. 39 不定芽分枝较少,生长势弱
0. 5 0. 5 27. 5 0. 55 不定芽分化率较低
1. 0 22. 5 0. 30 愈伤发黑,不定芽分枝较少
0. 1 14. 3 0. 41 愈伤多数发黑,不正常
1. 0 0. 5 42. 5 0. 64 愈伤正常,不定芽分枝较多,长势较好
1. 0 18. 9 0. 45 不定芽分枝较少,生长势弱
0. 1 22. 5 0. 50 愈伤大部分皱缩,发黑,不定芽分化率低
1. 5 0. 5 45. 0 0. 66 愈伤呈乳白和绿色,不定芽分枝多,长势好
1. 0 22. 5 0. 53 不定芽分枝较少,生长势弱
图 2 愈伤组织产生不定芽
2. 3 不同浓度 6-BA、IBA对白花柽柳茎段丛生芽诱
导的影响
将白花柽柳的茎段接种到诱导培养基上,7 d 后
外植体陆续开始发生变化,一些外植体伤口处变为灰
黑色,一些外植体的茎端及鳞叶发生枯黄,但多数外
植体色泽嫩绿,在叶腋处有浅绿色芽点产生。10 ~ 15
d后丛生芽开始形成,30 d后丛生芽大量发生。添加
不同浓度 6 -BA 和 IBA,诱导丛生芽有较大的差异
(表 3)。
表 3 不同浓度 6-BA、IBA对白花柽柳丛生芽诱导的影响
编号
6 BA /
(mg·L - 1)
IBA /
(mg·L - 1)
出芽率 /
%
芽平均
长度 /cm 芽的生长状况
1 0. 1 66. 13 0. 50 浅绿色,簇生,分枝少,
且有根形成,无主根,须根多
2 0. 5 0. 5 98. 68 2. 63 黄绿,簇生,分枝多,茂盛,但较细
3 1. 0 91. 30 0. 87 绿色,簇生,分枝多
4 0. 1 64. 12 0. 52 浅绿色,簇生,分枝少,少数有根形成
5 1. 0 0. 5 98. 68 2. 41 绿色,簇生,丛生芽粗壮,
较高且生长茂盛
6 1. 0 82. 05 0. 60 绿色,簇生,分枝多
7 0. 1 61. 76 0. 65 浅绿色,簇生,分枝少,多数有根,
无主根,须根 4 ~ 5 条
8 1. 5 0. 5 90. 91 2. 29 绿色,簇生,分枝多
9 1. 0 87. 50 0. 99 绿色,簇生,分枝多,极少数有根
当 6-BA浓度一定时,IBA 的过高(1. 0 mg /L)和
过低(0. 1 mg /L)都会使出芽率和芽高度降低,而 0. 5
mg /L IBA诱导效果最好,不仅出芽率高(均在 90%
以上) ,且芽的形状、颜色、质地正常,营养生长旺盛,
欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗欗 技术开发
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分枝较多。其中 2 号、7 号培养基的出芽率高达
98. 68%,虽然 2 号培养基中芽平均长度为2. 63 cm,
略高于 7 号的 2. 41 cm,但其差异不明显,而 2 号丛生
芽细弱、偏黄绿色,7 号更加粗壮、颜色正常,利于生
长和增殖,因此 7 号为最适培养基。
当 IBA浓度一定,6-BA 浓度从 0. 5 ~ 1. 5 mg /L
变化时,最低和最高浓度培养基的外植体诱导率低,
生长势较弱,只有在 6-BA 浓度为 1. 0 mg /L 时诱导
效果最好。所以综合各方面的因素,白花柽柳丛生芽
诱导的最适培养基为 1. 0 mg /L 6-BA +0. 5 mg /L IBA。
2. 4 不同浓度 NAA对诱导根的影响
取白花柽柳组培苗带芽茎段 1. 5 ~ 2. 0 cm,置于
附有不同浓度 NAA 的培养基中,结果见表 4。各种
浓度的 NAA 处理的组培苗均可以诱导不定根,其中
以 1 /4 MS + 0 mg /L NAA 诱导效果最好,不仅生根
早、生根率高,且根系发达,主根明显,须根也多,有利
于壮苗(图 3)。而 0. 01、0. 05 mg /L NAA 诱导产生
的根呈短簇状,密集丛生,主根极少,多根毛,生长慢。
表 4 不同浓度 NAA对诱导根的影响
激素组合 /
(mg·L - 1)
生根
时间 /d
生根
率 /%
平均
主根数
平均
根长 /cm 根的生长状况
1 /4MS + NAA 0 6 93 2. 1 3. 9 有明显主根,主根较粗且长,
根白色,被根毛
1 /4MS + NAA 0. 01 15 88 0 1. 6 无明显主根,须根多但细、短
1 /4MS + NAA 0. 05 12 85 0. 4 1. 8 主根数很少,须根多
图 3 试管苗生根
2. 5 试管苗的移栽情况
选择生长健壮的完整植株,经过 7 d 的封口炼苗
和 2 d 自然炼苗,洗去根部的培养基,移栽于 V沙子 ∶
V草炭 ∶ V珍珠岩 = 1∶ 1∶ 1的混合基质中,移栽后注意遮阴
保湿,成活率可达 80%。
3 结论与讨论
在多数植物组织培养研究中,通常使用 2,4 -D
诱导外植体的愈伤组织,但 2,4-D 属于中等毒性的
植物生长调节剂且有残留效应,所以使用 2,4-D 时
应谨慎对待[7]。正如本试验中观察到的情况:低浓
度 2,4-D对诱导愈伤组织有促进作用,浓度过高反
而会抑制。
植物生长调节物质 6-BA、IBA 的不同浓度配比
对外植体分化、增殖的影响差异很大。6-BA 为细胞
分裂素,可促进细胞分裂、分化、抑制顶端优势、促进
侧芽的作用;IBA为生长素,主要是促进细胞的生长,
特别是细胞的伸长。一般细胞分裂素与生长素浓度
比例较大时利于生芽,比值较小时利于生根。但本试
验认为,6-BA与 IBA浓度比值为 2∶ 1、3∶ 1、5∶ 1时对
白花柽柳的诱芽效果好于比值为 5∶ 1、10∶ 1及 15∶ 1的
诱导效果。
从白花柽柳生根培养中可以看出,当 NAA 浓度
低时,根系正常,植株发育良好。随着浓度的增加,主
根不明显,根量虽然大,但根细弱,植株生长也慢。当
NAA浓度低至 0 mg /L 时,主根明显且数量多,枝条
色绿、粗壮、分枝也多。这可能是因为外源生长素的
含量会抑制内源细胞分裂素的激活,使得根系和枝条
的生长发育均受到影响。
试验以白花柽柳茎段作外植体,用两种方法进行
了组织培养的研究。一种方法通过外植体脱分化获
得愈伤组织,再分化生长出芽,此法虽然周期长,操作
较复杂,但可获取愈伤组织,为研究其抗性机理,及培
育高抗性品种等更深层次的探索提供了良好的试验
材料。另一种方法则是越过脱分化阶段而直接分化
出再生植株的再生体系,周期短,操作简单,是一种快
速繁殖的方法。对于外植体来源较匮乏的种类,应先
诱导出丛生芽进行扩繁,然后再诱导生根产生试管
苗,此法不失为一种理想的快繁途径[8]。
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( 责任编辑 史 洁)
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