全 文 ：［科研报道］
豹皮樟总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用
吕雄文， 李 俊* ， 金 涌， 张 磊， 程文明
(安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032)
收稿日期:2009-03-28
基金项目:安徽省高等学校省级自然科学研究重点项目(2006kj095A)
作者简介:吕雄文(1970 －)，男，博士，副教授，研究方向:天然药物活性研究。Tel:13515519961
* 通讯作者:李 俊，博士，教授，博士生导师，E-mail:lijun@ ahmu. edu. cn
关键词:豹皮樟总黄酮;酒精;肝损伤;抗氧化;肿瘤坏死因子 α;白介素 1β
中图分类号:R285. 6 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)03-0489-03
酒精滥用和酒精依赖已成为当今世界日益严重的公共
卫生问题。酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是由于
长期大量饮酒所致的肝脏疾病，初期通常表现为脂肪肝，进
而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化，
严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死甚或肝功能衰竭［1］。
ALD 是西方国家导致肝硬化的最主要病因，近年来在我国
亦呈明显增加的趋势，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝
病，严重危害人民健康［2］。
豹皮樟(Litsea coreana)，又称老鹰茶，属樟科、木姜子
属，俗称“白茶”，在安徽皖南山区资源丰富，民间饮用历史
悠久，具有明目消暑解渴和消食去胀之功效［3］。黄酮类成分
是豹皮樟的主要成分［4］，我们前期从豹皮樟提取物中分离得
到了 4 个黄酮苷类化合物［5］，并且研究证明豹皮樟总黄酮
(total flavonoids of Litsea coreana，TFLC)对大鼠酒精性脂肪性
肝炎具有一定的防治作用［6］。为进一步开发利用这一植物
资源，本实验主要观察了 TFLC对小鼠急性酒精性肝损伤的
保护作用，并初步探讨其部分作用机制。
1 材料
1. 1 实验动物 普通级昆明种小鼠，♂性，体重 18 ～ 22 g，
由安徽医科大学实验动物中心提供，动物合格证号:皖医实
动准第 01 号。
1. 2 实验仪器 722S 分光光度仪(上海精密科学仪器公
司);TGL-16H高速离心机(珠海黑马医学仪器有限公司);
GSY-8 电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂意成公司);DL-5M
低速冷冻离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);XW-80A
旋涡振荡器(上海精科实业有限公司)。
1. 3 药品与试剂 TFLC(安徽医科大学药学院程文明副教
授鉴定、提供，总黄酮得率在 3%以上，纯度不低于 55%)，凯
西莱(河南省新谊药业股份有限公司，批号:070205)，谷丙转
氨酶(ALT)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号:
20071203)，谷草转氨酶(AST)试剂盒(南京建成生物工程研
究所，批号:20071203)，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京
建成生物工程研究所，批号:20071112)，丙二醛(MDA)试剂
盒(南京建成生物工程研究所，批号:20071112)，谷胱甘肽过
氧化物酶(GSH-PX)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批
号:20070122)，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物
工程研究所，批号:20071210)，肿瘤坏死因子(TNF-α)放射
免疫分析药盒(北京北方生物技术研究，批号:20071220)，白
细胞介素-1β(IL-1β)放射分析测定盒(北京北方生物技术研
究所，批号:20071220)，冰醋酸(国药集团化学试剂有限公
司，批号:20070606)，无水乙醇(上海化学试剂有限公司产
品，批号:200610206)。
2 方法
2. 1 动物分组、造模及给药 取健康昆明种♂性小鼠 60
只，随机分为正常对照组、模型组、TFLC 组(100 mg /kg、300
mg /kg、900 mg /kg)、阳性对照药凯西莱组(30 mg /kg)。除正
常对照组外，其余小鼠灌胃给予 35%酒精 12. 8 g /kg，每日 1
次，共计 10 d。自造模第 1 天起，每日灌胃给药 1 次。正常
组和模型组灌胃等体积溶媒，其余各组分别灌胃给予相应药
物，连续 10 d。
2. 2 检测指标 小鼠于末次灌胃后禁食 12 h，不禁水，摘眼
球取血制备血清，测定 ALT、AST 活性以及 TNF-α、IL-1β 含
量。称取小鼠体重后，颈椎脱臼处死，迅速剖腹摘取完整肝
脏，去除血污，称肝湿重。肝指数 = 肝湿重(g)/体重(g)。
取肝组织约 0. 3 g，剪碎后加入 9 倍生理盐水，冰浴中制备肝
匀浆，测定肝匀浆中 MDA 含量以及 SOD、GSH-PX 活性。同
时取肝左叶距边缘 0. 5 cm 处的一小块肝组织，用 10%甲醛
溶液固定，常规石蜡包埋，HE 染色，光镜下观察肝组织脂肪
变性程度和炎症、坏死情况，进行评分，平均级数 =(各级分
值 ×本级动物数总和)/本组动物总数［7］。
2. 3 统计方法 计量资料结果均以 珋x ± s 表示，采用
SPSS11. 0 进行 student-t检验，等级资料采用 Ridit 分析。以
P < 0. 05 表示差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 TFLC 对急性酒精性肝损伤小鼠肝指数和血清 ALT、
AST活性的影响 模型对照组肝指数和血清 ALT、AST活性
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较正常对照组明显增加(P < 0. 01)，TFLC 可明显降低模型
小鼠肝指数和血清 ALT、AST 活性(P < 0. 05，P < 0. 01)(表
1)。
3. 2 TFLC 对急性酒精性肝损伤小鼠血清 TNF-α 和 IL-1β
的影响 模型对照组血清 TNF-α 和 IL-1β 水平较正常对照
组明显增加(P < 0. 01)，TFLC 组明显降低模型小鼠血清
TNF-α和 IL-1β水平(P < 0. 05，P < 0. 01)(表 2)。
表 1 TFLC对急性酒精性肝损伤小鼠肝指数和血清 ALT、AST活性的影响(珔x ± s，n =10)
组别 Liver index /% ALT /(IU /L) AST /(IU /L)
正常对照组 4. 49 ± 0. 48 56. 21 ± 10. 16 81. 03 ± 25. 95
模型组 5. 70 ± 0. 53## 88. 29 ± 19. 28## 174. 14 ± 43. 27##
凯西莱阳性对照药组 4. 72 ± 0. 41* 66. 96 ± 12. 80 101. 15 ± 33. 35
豹皮樟总黄酮高剂量组 4. 53 ± 0. 39 64. 87 ± 15. 48 118. 30 ± 26. 61
豹皮樟总黄酮中剂量组 4. 75 ± 0. 47* 67. 44 ± 11. 68 123. 60 ± 31. 98*
豹皮樟总黄酮低剂量组 4. 85 ± 0. 42* 70. 32 ± 14. 27* 131. 51 ± 29. 77*
注:与正常对照组比较，#P < 0. 05，##P < 0. 01;与模型组比较，* P < 0. 05，P < 0. 01。
表 2 TFLC对急性酒精性肝损伤小鼠血清
TNF-α和 IL-1β的影响(珔x ± s，n =10)
组别 TNF-α /(f mol /mL) IL-1β /(pg /mL)
正常对照组 1. 48 ± 0. 53 56. 23 ± 11. 58
模型组 4. 16 ± 0. 98## 132. 49 ± 30. 47##
凯西莱阳性对照药组 2. 82 ± 0. 54 87. 11 ± 23. 54
豹皮樟总黄酮高剂量组 2. 45 ± 0. 62 84. 20 ± 15. 46
豹皮樟总黄酮中剂量组 2. 87 ± 0. 64 98. 31 ± 18. 70
豹皮樟总黄酮低剂量组 3. 20 ± 0. 50* 102. 78 ± 24. 62*
注:与正常对照组比较，#P < 0. 05，##P < 0. 01;与模型组比较，
* P < 0. 05，P < 0. 01。
3. 3 TFLC对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织中氧化与抗氧
化物质的影响 模型对照组肝组织 MDA含量较正常对照组
明显增加(P < 0. 01)，SOD 和 GSH-PX 活性较正常对照组明
显降低(P < 0. 01)，TFLC 可明显提高模型小鼠肝组织 GSH-
PX活性(P < 0. 05，P < 0. 01)，中、高剂量组可明显降低模型
小鼠肝组织 MDA含量，提高 SOD 活性(P < 0. 05，P < 0. 01)
(表 3)。
3. 4 TFLC对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织病理变化的影
响 光镜下可见模型组小鼠肝组织呈广泛脂肪变性，肝细胞
明显肿胀，胞浆内充满大小不等的脂滴，散在弥漫性炎细胞
浸润，肝小叶界限模糊，部分肝细胞出现点状或灶状坏死;模
型组小鼠肝组织脂肪变性与炎症变性分级与正常对照组比
较有显著性差异。凯西莱和 TFLC 中、高剂量组小鼠肝组织
脂肪变性与炎症变性程度较模型组显著改善，含脂滴细胞数
减少，肝细胞内无明显空泡及疏松，肝窦整齐。见表 4。
表 3 TFLC对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织中氧化与抗氧化物质的影响(珔x ± s，n =10)
组别
MDA /nmoL /
mgprot
SOD /U /
mgprot
GSH-PX /U /
mgprot
正常对照组 4. 81 ± 1. 19 29. 08 ± 2. 55 127. 71 ± 16. 39
模型组 8. 21 ± 2. 11## 16. 79 ± 4. 45## 73. 21 ± 10. 84##
凯西莱阳性对照药组 5. 67 ± 1. 93* 24. 70 ± 5. 46 101. 72 ± 10. 97
豹皮樟总黄酮高剂量组 5. 45 ± 1. 23 24. 33 ± 4. 27 108. 24 ± 13. 49
豹皮樟总黄酮中剂量组 6. 23 ± 1. 43* 21. 53 ± 4. 52* 96. 75 ± 11. 80
豹皮樟总黄酮低剂量组 6. 67 ± 1. 61 19. 83 ± 4. 17 89. 63 ± 9. 90* #
注:与正常对照组比较，#P < 0. 05，##P < 0. 01;与模型组比较，* P < 0. 05，P < 0. 01。
表 4 TFLC对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织
病理分级的影响(珔x ± s，n =10)
组别
肝组织病理变化分级
－ + ++ +++ ++++
平均
级数
正常对照组 9 1 0 0 0 0. 10
模型组 0 1 1 8 0 2. 70##
凯西莱阳性对照药组 1 7 1 1 0 1. 20*
豹皮樟总黄酮高剂量组 1 6 2 1 0 1. 30*
豹皮樟总黄酮中剂量组 0 7 2 1 0 1. 40*
豹皮樟总黄酮低剂量组 0 6 2 2 0 1. 60
注:与正常对照组比较，#P < 0. 05，##P < 0. 01;与模型组比较，
* P < 0. 05，P < 0. 01。
4 讨论
酒精性肝损伤是由多种病因引起并有多种因素参与的
复杂的过程，有效防治急性酒精性肝损伤的发生发展是降低
酒精性肝病发病率的有效途径。血清 ALT 和 AST 活性的高
低在一定范围内可反映肝细胞损伤程度的大小［8］。在本实
验中，模型组血清 ALT、AST 活性与正常组相比明显增高，
TFLC可降低急性酒精性肝损伤小鼠血清 ALT、AST 活性和
肝指数的增高，并改善肝组织脂肪变性与炎症变性程度。表
明其对酒精诱导的急性肝损伤，从血清酶学到肝细胞的组织
学变化均具有一定的保护作用。
酒精吸收入血后 90%以上在肝脏代谢，酒精引起肝脏损
害的机制涉及乙醇的直接毒性、乙醛的化学性损伤、氧应激
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和脂质过氧化、线粒体损伤、遗传等多个方面，可损害肝脏各
种细胞器和酶的结构功能，并能刺激免疫系统，诱发免疫性
肝损害［9］。其中氧应激和脂质过氧化可能是酒精引起肝损
伤的起始因素之一。在氧化和抗氧化体系中，MDA 是脂质
过氧化物的最终代谢产物，其含量的高低可间接反映机体的
脂质过氧化程度，从而反映细胞损伤的程度［10］。而 SOD 和
GSH-PX是细胞内抗脂质过氧化作用的酶性保护系统的主要
成分［11］。本实验中 TFLC 可显著降低酒精导致的肝组织
MDA含量增加，提高 SOD和 GSH-PX活性，表明其可通过减
弱脂质过氧化反应，减轻酒精对肝细胞的损害。
很多炎症细胞因子都参与了酒精诱导的肝损伤过程。
TNF-α是 ALD 病程中多效能的前炎症因子，可诱导 TNF-α
本身、IL-1、IL-6、IL-8 等因子的大量分泌并介导肝细胞功能
受损，处于肝细胞损伤的细胞因子网络的核心，在 ALD 发病
机理尤其是炎症级联放大反应中发挥着关键作用［12］。有研
究表明应用 TNF-α抑制剂降低 TNF-α 水平可减轻酒精性肝
损伤［13］。IL-1β主要由活化的单核-吞噬细胞产生，具有广泛
的生物学效应，如促进炎症介质释放，直接参与炎症过
程［14］。在本研究中 TFLC 可显著降低急性酒精性肝损伤小
鼠血清 TNF-α和 IL-1β水平，表明对该两种重要炎症细胞因
子的调节也是其对急性酒精性肝损伤保护作用的机理之一。
至今临床上还没有有效防治酒精性肝病发生发展的理
想药物，因此对 ALD 早期预防显得尤为重要。本实验提示
经过现代工艺提取的 TFLC 可能通过提高机体抗氧化能力，
抑制脂质过氧化反应以及免疫调节等作用减轻酒精诱导的
肝损伤程度，具有良好的应用前景。
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化橘红多糖对小鼠的免疫调节作用
董宏坡1，2， 江明树1， 朱伟杰1
(1.茂名学院生物技术系，广东 茂名 525000;2.近海海洋环境科学国家重点实验室(厦门大学)，福建 厦门
361005)
收稿日期:2009-01-12
基金项目:广东省科技计划项目(2006B20201037)资助
作者简介:董宏坡(1978 －)，男，讲师，在读博士生，主要从事天然产物提取和分子机理研究。E-mail:donghongpo2001@ 163. com Tel:
(0592)2184982
关键词:化橘红;多糖;小鼠;免疫功能
中图分类号:R285. 6 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)03-0491-03
天然多糖类化合物如蘑菇、地衣和藻类多糖由于具有抗
肿瘤和免疫增强的作用［1］，在医药领域已经受到人们愈来愈
多的重视。化橘红是广东名贵中药材，为芸香科植物化州柚
的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。它具有治疗风寒咳嗽，
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