全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（２３）：１２２～１２４
第一作者简介：李文洁（１９８２－），女，云南人，在读硕士，研究方向为
植物生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｍｈｍ９２０＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：普晓兰（１９５６－），女，云南人，博士，教授，现主要从事植
物生物学和植物生理学方面的研究工作。
基金项目：云南省重点资助项目（２００８ＣＡ００６）。
收稿日期：２０１２－０８－２０
睡菜的离体培养与植株再生研究
李 文 洁１，普 晓 兰２，陈 泽 英３
（１．西南林业大学 林学院，云南 昆明６５０２２４；２．西南林业大学 生命科学学院，云南 昆明６５０２２４；
３．西南林业大学 园林学院，云南 昆明６５０２２４）
　　摘　要：以不带节的睡菜茎段为外植体，研究其离体再生体系。结果表明：将茎段接种到
ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ培养基上１０ｄ可以诱导产生愈伤组织，然后转接至 ＭＳ＋
６－ＢＡ　２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０．０５ｍｇ／Ｌ培养基上１５ｄ可使愈伤组织分化为幼苗；将
带节的睡菜茎段接种到ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１～０．２ｍｇ／Ｌ培养基上７ｄ可使其腋芽萌发为幼苗；将幼苗
接种到１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ培养基上３～５ｄ可生根，实现植株再生。
关键词：睡菜；愈伤组织；幼苗；植株再生
中图分类号：Ｓ　６８２．３２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）２３－０１２２－０３
　　纳帕海是云南省海拔最高和纬度最低的高原喀斯
特湿地类型之一，也是云南高原沼泽面积最大和最具代
表性的湿地类型之一［１］。睡菜（Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ
Ｌ．）为龙胆科（或睡菜科）（Ｍｅｎｙａｎｔｈａｃｅａｅ）睡菜属多年沼
生草本植物［２］，又名螟菜、醉草，是纳帕海湿地重要的水
生植物。近年来，由于环境胁迫等原因，特别是人为活
动干扰的加剧，纳帕海湿地遭到严重破坏，湿地植被类
群改变，睡菜的分布面积也日渐萎缩。为了改变湿地植
被恢复时拆东墙，补西墙，破坏一片，恢复一片的困境，
该研究旨在通过组织培养途径，实现睡菜植株再生，为
睡菜的人工繁殖提供一种有效的方法，也为湿地植被的
恢复提供新的苗木来源。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试睡菜于２０１１年５月采自云南省香格里拉纳帕
海湿地。
１．２　试验方法
试验于２０１１年６月至２０１２年４月在西南林业大学
组培室进行。
１．２．１　消毒方法的优化和无菌外植体的获得　水生植
物带菌多，尤其大多带有内生菌，消毒困难。为了获得
进行组织培养的无菌外植体，现对消毒方法［３］进行如下
试验：从睡菜母株上剪取幼嫩茎段（带节的或不带节
的），每个茎段长约３～４ｃｍ。将经过初步清洗的睡菜茎
段分别放入浓度为１、２、３、４ｇ／Ｌ的多菌灵悬浊液中浸泡
１２、２４、３６、４８ｈ，然后在自来水下冲洗４５～６０ｍｉｎ，用蒸
馏水清洗外植体后放入７０％酒精中浸蘸１０ｓ，立即取出
分别放入０．１％升汞溶液（每１００ｍＬ升汞溶液加约１滴
吐温）中消毒４、６、８、１０ｍｉｎ，用无菌水清洗５次，最后用
滤纸吸干水后切成约１ｃｍ长的小段备用。外植体在超
净工作台上接种［４］，２０ｄ后观察并统计其污染率。
１．２．２　培养基的筛选及接种方法　以 ＭＳ培养基为基
本培养基，加入０．０５％内生菌型抑菌剂后，根据不同外
植体和不同培养阶段，添加不同浓度和配比的细胞分裂
素６－ＢＡ（６－苄氨基嘌呤）、ＫＴ（激动素）、生长素ＩＢＡ（吲哚
丁酸）、ＮＡＡ（ａ－萘乙酸），并附加３０ｇ／Ｌ蔗糖和５．５ｇ／Ｌ
卡拉胶，ｐＨ　５．８，在１２１℃高温下灭菌１５ｍｉｎ。将带节或
不带节的睡菜茎段接种到 ＭＳ与不同浓度的６－ＢＡ
和ＩＢＡ配比的初代培养基上培养，筛选出诱导愈伤
组织或腋芽萌发的最佳培养基；变换６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＫＴ的
不同配比浓度［５］，筛选出将睡菜愈伤组织分化为幼苗的
最适培养基和生根培养基；培养基共３组（表１）。培养
温度为（２０±２）℃，光照时间为１０～１２ｈ／ｄ，光照强度约
４０μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１。　
１．２．３　生根及试管苗移栽试验　在生根培养基中加入
活性炭［６］，观察活性炭对睡菜生根的影响。选择不同气
温的时间对睡菜幼苗进行移栽，统计其移栽成活率。
２　结果与分析
２．１　不同消毒方法对外植体成活的影响
由表２可知，用多菌灵对睡菜外植体进行消毒，多
菌灵的浓度越高，浸泡时间越长，污染率越低，可以由
５０．７％下降到１５．２％。但处理浓度和时间的增加，将导
２２１
北方园艺２０１２（２３）：１２２～１２４ ·生物技术·
表１　　　　睡菜组织培养中的培养基组合
　　Ｔａｂｌｅ　１　　　　Ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ
　　　　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ　Ｌ
培养基 编号 培养基 Ｍｅｄｉｕｍ／ｍｇ·Ｌ－１
Ａ１ ＭＳ
Ａ２ ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５
Ａ３ ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５
Ａ４ ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．５
愈伤组织诱导培养基 Ａ５ ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０＋ＩＢＡ　０．５
Ａ６ ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５＋ＩＢＡ　０．５
Ａ７ ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　１．０
Ａ８ ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０＋ＩＢＡ　１．０
Ａ９ ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５＋ＩＢＡ　１．０
Ｂ１ ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０
Ｂ２ ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１
愈伤组织分化培养基 Ｂ３ ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．１
Ｂ４ ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．１＋ＫＴ　０．０５
Ｂ５ ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５＋ＮＡＡ　０．２＋ＫＴ　０．０５
Ｃ１ ＭＳ
Ｃ２ ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１
腋芽萌发诱导培养基 Ｃ３ ＭＳ＋６－ＢＡ　０．２
Ｃ４ ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１
Ｃ５ ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２
Ｃ６ ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３
生根培养基 Ｄ　 １／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５
　　表２　不同消毒方法对外植体污染和成活的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２　　 　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｗａｙｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ
　　　　　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ　Ｌ
时间 指标 多菌灵浓度Ｃｏｎｃｅｒｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＢＣ／ｇ·Ｌ－１
Ｔｉｍｅ／ｈ　 Ｉｎｄｅｘｅｓ　 １　 ２　 ３　 ４
１２ 污染率Ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％ ５０．７　 ４２．３　 ２１．８　 １９．４
成活率Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％ ３５．６　 ４０．７　 ５３．５　 ５１．２
２４ 污染率Ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％ ４８．３　 ３６．５　 １６．７　 １５．６
成活率Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％ ３９．５　 ５１．４　 ６０．９　 ５２．６
３６ 污染率Ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％ ４７．８　 ３９．３　 １７．２　 １５．１
成活率Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％ ３３．６　 ３４．７　 ３６．６　 ３２．９
４８ 污染率Ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％ ４５．１　 ３８．８　 １６．７　 １５．２
成活率Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％ ３２．７　 ３３．３　 ３１．５　 ２８．３
致外植体成活率下降。试验表明，当多菌灵浓度为
３ｇ／Ｌ，浸泡２４ｈ时，外植体成活率最高，为６０．９％，而此
时污染率相对较低，为１６．７％。
用０．１％升汞溶液对其消毒时间的长短，对污染率
和成活率也会产生影响。消毒时间越长，污染率越低，
成活率随着污染率的下降而提高，消毒８ｍｉｎ，污染率
２６．４％，成活率可达６１．９％。但是，消毒的时间太长，会
对植物组织造成过度伤害，造成成活率下降，不利于培养。
２．２　愈伤组织的诱导和分化
将不带节的茎段分别接种到培养基Ａ１～Ａ９中，培
养１０ｄ左右，外植体其茎段膨大，均有不同程度的脱分
化。尤其在Ａ５培养基中，外植体维管束环内外侧薄壁
组织气腔壁处长出圆球形的愈伤组织细胞，２５ｄ后，愈
伤组织大量生长，逐渐撑破茎段表皮（图１）。由表３可
见，在不添加任何激素的ＭＳ培养基和只添加生长素或
细胞分裂素的培养基中（Ａ１～Ａ２），都没有愈伤组织生
成。说明睡菜外植体对外源激素的反应明显，单一的细
胞分裂素或生长素对诱导睡菜的愈伤组织效果有限，生
长调节剂浓度太低不足以诱导细胞脱分化，太高也可能
抑制细胞分裂。在Ａ５培养基中，诱导愈伤组织的效果
最佳（表４）。
图１　睡菜的愈伤组织
Ｆｉｇ．１　Ｃａｌｕｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ
表３ 不同消毒（０．１％ＨｇＣｌ２）时间对
睡菜成活的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３　　 　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ＨｇＣｌ２（０．１％）
　　　　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ
指标 时间Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
Ｉｎｄｅｘｅｓ　 ４　 ６　 ８　 １０
污染率Ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％ ４０．５　 ３２．７　 ２６．４　 ２０．１
成活率Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％ ５０．８　 ５６．３　 ６１．９　 ５５．２
　　表４　不同培养基对诱导睡菜愈伤组织的影响
　　Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｗｏｕｎｄｅｄ　ｔｉｓｓｕｅ
编号 愈伤组织诱导情况Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｓｉｔｕａｔｉｏｎ
Ａ１ 无愈伤组织生成
Ａ２ 无愈伤组织生成
Ａ３ 茎段略有膨胀，但无愈伤组织生成
Ａ４ 茎段膨胀开裂，有极少的愈伤组织生成
Ａ５ 茎段膨胀开裂，有愈伤组织生成，且生长较快
Ａ６ 茎段膨胀开裂，有少量愈伤生成
Ａ７ 茎段膨胀开裂，有少量愈伤生成
Ａ８ 茎段膨胀开裂，有少量愈伤生成
Ａ９ 茎段膨胀开裂，有少量愈伤生成，部分褐化
　　选取细胞较大、嫩绿色的愈伤组织接种于培养基
Ｂ１～Ｂ５中，培养约１５ｄ后，愈伤组织分化情况见表５。
结果表明，在加入６－ＢＡ和ＮＡＡ的培养基中均未见芽的
分化（Ｂ１～Ｂ３），当培养基加入ＫＴ后（Ｂ４～Ｂ５），愈伤组
织可分化成芽（图２），说明ＫＴ对睡菜愈伤组织的分化
有显著的促进作用。
图２　睡菜愈伤组织分化长出幼苗
Ｆｉｇ．２　Ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ
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·生物技术· 北方园艺２０１２（２３）：１２２～１２４
表５　不同培养基对睡菜愈伤组织分化成苗的影响
　　Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｏｎ　ｗｏｕｎｄｅｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
编号 分化情况Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
Ｂ１ 愈伤组织不断增殖，不分化
Ｂ２ 愈伤组织由黄绿色逐渐变为绿色，不分化
Ｂ３ 愈伤组织不断增殖，颜色由黄绿色变为绿色，不分化
Ｂ４　 ２０ｄ后愈伤组织可分化成芽
Ｂ５　 １５ｄ后愈伤组织可分化成芽
２．３　芽的诱导
将带节的茎段接种到培养基Ｃ１～Ｃ５中，培养７ｄ后，
观察结果见表６。在不加激素的ＭＳ培养基或加入细胞
分裂素６－ＢＡ的ＭＳ培养基中，均不能诱导睡菜腋芽萌发。
在ＭＳ培养基中加入０．１～０．２ｍｇ／Ｌ的生长素ＩＢＡ（Ｃ４～
Ｃ５）后，可诱导腋芽萌发，１５ｄ后长出新叶（图３）。结果表
明，一定浓度的生长素ＩＢＡ有利于打破睡菜腋芽的休眠，
促进萌发，但过高的浓度反而有抑制作用。
图３　睡菜茎段腋芽萌发
Ｆｉｇ．３　Ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ　ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｔｅｍ
表６　不同培养基对诱导睡菜腋芽萌发的影响
　　Ｔａｂｌｅ　６　Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
编号 腋芽萌发情况Ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ
Ｃ１ 茎段逐渐失绿，茎节处无腋芽萌发
Ｃ２ 茎段绿色，茎节处无腋芽萌发
Ｃ３ 茎段绿色，茎节处无腋芽萌发
Ｃ４ 茎段绿色，茎节处腋芽萌发
Ｃ５ 茎段绿色，茎节处多个腋芽萌发
Ｃ６ 茎段绿色，茎节处无腋芽萌发
２．４　植株再生与移栽
将分化出的幼苗切取，转接入生根培养基Ｄ中３ｄ
左右就开始生根。如果在培养基中加入适量ＡＣ（活性
炭），可以使生根时间提前２～３ｄ（表７）。不论是否在培
　　　
养基中加入ＡＣ，２０ｄ时统计生根率均达１００％。再生苗
生根后可以不需练苗直接移栽，移栽时需要有基质（泥
土）固定其根部，在水分充足的条件下，成活率可达
１００％。选择在气温较低的阴雨天移栽，其长势较好。
表７ 活性炭对睡菜幼苗生根的影响
　　Ｔａｂｌｅ　７ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｄｄｉｎｇ　ＡＣ　ｏｒ　ｎｏｔ　ｏｎ
ｔａｋｉｎｇ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ　Ｌ
平均
生根时间 根长／ｍｍ 生根率
／ｄ　 ２ｄ ４ｄ ７ｄ ／％
添加ＡＣ　 ２．８　 １．３０　 ３．９１　 ８．３２　 １００
不加ＡＣ　 ４．７　 １．２８　 ３．６６　 ８．１７　 １００
３　讨论
睡菜是沼生植物，利用组织培养使其再生时，外植
体的消毒是一个难题。在降低污染率的同时，又要保证
较高的成活率［７］。这就要综合考虑消毒药剂浓度和消
毒时间的影响。该研究以睡菜的茎段为外植体，在组织
培养的过程中，内生菌会从茎段溢出，因此在培养基中
加入内生菌抑制剂可取得较好效果。
该试验结果表明，无论从愈伤组织诱导和分化途
径，还是从诱导腋芽萌发的方式均可实现睡菜的植株再
生，并且再生芽苗的生根和移栽容易，这将有利于对睡
菜进行规模化繁殖，实现睡菜的工厂化育苗，满足湿地
恢复的苗木需求。
参考文献
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ
ＬＩ　Ｗｅｎ－ｊｉｅ１，ＰＵ　Ｘｉａｏ－ｌａｎ２，ＣＨＥＮ　Ｚｅ－ｙｉｎｇ３
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２２４；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２２４；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　６５０２２４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｏｆ　Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｉｔｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｐｕｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ　ｆｏｒ　１０ｄｃｏｕｌｄ
ｐｒｏｄｕｃｅ　ｃａｌｕｓ，ｔｈｅｎ　ｐｕｔ　ｔｈｅｍ　ｏｎ　ＭＳ＋６－ＢＡ　２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０．０５ｍｇ／Ｌ　ｆｏｒ　１５ｄａｙｓ，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ
ｉｎｔｏ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｒｏｏｔ；ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ｗｉｔｈ　ｂｕｄ　ｏｎ　ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１～０．２ｍｇ／Ｌ　ｆｏｒ　７ｄａｙｓ，ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｃｏｕｌｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｅ
ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｂｅ　ｓｅｅｄｉｎｇ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｒｏｏｔ．Ｐｕｔ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｏｎ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ　ｆｏｒ　３～５ｄ，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ　ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ　Ｌ；ｃａｌｕｓ；ｓｅｅｄｌｉｎｇ；ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
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