全 文 ：第 32 卷第 4 期
2013 年 8 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 32 No． 4
Aug． 2013
收稿日期:2012 － 12 － 18
基金项目:江苏省产学研联合创新资金项目(BY2009145)
作者简介:王鸣(1958 －) ，男，高级实验师，研究方向:天然产物化学。E － mail:wangmingwm0208@ sina． com
* 通讯作者:孙浩。E － mail:SunHao12@ yahoo． com． cn
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2013． 04． 009
ＲP － HPLC测定杭白芷不同部位 5 种香豆素的含量
王 鸣，孙 浩* ，冯 煦，顾红梅，张建华
(江苏省中国科学院植物研究所 /江苏省药用植物研究开发中心，江苏 南京 210014)
摘 要 目的:通过高效液相色谱测定栽培杭白芷不同部位中 5 种香豆素的含量，为合理利用栽培杭白芷资源提
供依据。方法:采用 Phenomenex Gemini C18 ( 250 mm ×4． 60 mm，5 μm) 色谱柱;流动相为甲醇 －水( 70∶ 30) ，流速
0． 8 mL·min －1，柱温 30℃ ; UV检测波长 310 nm。结果: 栽培杭白芷不同部位的 5 种香豆素的含量差异显著。结论:
栽培杭白芷的根中 5 种香豆素的总含量最高。
关键词 杭白芷;香豆素; 不同部位;含量比较
中图分类号:Ｒ284． 1; Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2013)04 － 0031 － 03
Simultaneous Quantitative Determination of Five Coumarins in
Different Parts of Angelica dahurica (Fisch． ex Hoffm．)Benth．
et Hook． f． var． formosana (Boiss．)Shan et Yuan． by ＲP －HPLC
Wang Ming，Sun Hao* ，Feng Xu，Gu Hongmei，Zhang Jianhua
(Jiangsu Center for Ｒesearch ＆ Development of Medicinal Plants，Institute of Botany，Jiangsu Province
and Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，China)
Abstract Objective:By ＲP － HPLC comparison analysis content of five coumarins in different part of
cultivated Angelica dahurica (Fisch． ex Hoffm．)Benth． et Hook． f． var． formosana (Boiss．)Shan et
Yuan．，which can provide the basis for the rational use of the resources of cultivated Angelica formosana
Boiss． Methods:The use of Phenomenex Gemini C18 chromatographic column (250 mm × 4． 60 mm，5
μm) ;the mobile phase consisted of methanol and water (70∶ 30)at a flow rate of 0． 8 mL·min －1，the
column temperature was 30 ℃;UV was detected at 310 nm． Ｒesults:The content of coumarins in differ-
ent parts of the cultivated of Angelica dahurica (Fisch． ex Hoffm．)Benth． et Hook． f． var． formosana
(Boiss．)Shan et Yuan． were significant difference． Conclusion:The total content of the five coumarins
from rhizome of cultivated Angelica dahurica (Fisch． ex Hoffm．)Benth． et Hook． f． var． formosana
(Boiss．)Shan et Yuan． was the highest．
Key words Angelica dahurica (Fisch． ex Hoffm．)Benth． et Hook． f． var． formosana (Boiss．)Shan
et Yuan．;coumarin;different part;determination of content
杭白芷［Angelica dahurica(Fisch． ex Hoffm．)
Benth． et Hook． f． var． formosana (Boiss．)Shan et
Yuan］为《中国药典》收载的常用中药品种，其根为
药用部位。含香豆素类等成分。现代药效学实验表
明，杭白芷香豆素成分能使得实验性白癜风模型豚
鼠皮肤黑色素明显增加，血液中酪氨酸酶、胆碱酯酶
增加，单氨氧化酶、丙二醛减少，血流变指标明显改
善;对正常大鼠血中 T细胞亚群 CD4 /CD8 有明显的
增加作用。说明杭白芷中的香豆素类成分具有增加
黑色素合成，减少黑色素分解，增加皮肤黑色素沉
积、减少代谢产物，改善血液流变性，增强免疫功能
等作用。
杭白芷在江苏、浙江、安徽等地广有栽培，为弄
清香豆素类成分在杭白芷中不同部位的含量差异，
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
我们对南京中山植物园内栽培 2 年的杭白芷不同部
位中 5 种香豆素的含量进行了含量测定，以期达到
合理利用资源，探索香豆素类成分在杭白芷中的形
成规律和调控积累科学数据的目的。
1 仪器和材料
1． 1 仪器
Agilent 1100 series 高效液相色谱仪(美国安捷
伦科技公司) ，配置 UV 检测器，色谱数据处理由
Agilent化学工作站完成。Ｒo － di纯水机(锐思捷科
学仪器有限公司) ;KH2200DB 型数控超声波清洗
器，功率 250W，频率 25KHz(昆山禾创超声仪器有
限公司) ;LiBOＲAＲ AEL － 200 电子分析天平(岛津
公司)。
1． 2 试剂
甲醇(色谱纯) ，由南京化学试剂有限公司提
供。
1． 3 对照品
1． 比克白芷素(bergapten)2． 氧化前胡素(oxypeucedanin)3． 欧前胡
素(imperatorin)4． 珊瑚菜内酯(phellopterin)5． 异欧前胡素(isoim-
pertorin)
图 1 5 种对照品的名称和化学结构式
以上对照品均为本实验室自行分离纯化所得，
经 NMＲ、MS等方法鉴定其结构，HPLC检测纯度，均
在 98%以上
1． 4 待测样品来源
采集中山植物园栽培 2 年的杭白芷随机挖取同
一种植地全植物 20 株、原植物经江苏省中国科学院
植物研究所袁昌齐研究员鉴定为杭白芷 Angelica
dahurica(Fisch． ex Hoffm．)Benth． et Hook． f． var．
formosana(Boiss．)Shan et Yuan．采集时间为 9 月果
实成熟期。将全植物去除泥沙等杂物后分根、须根、
茎、叶、果实 5 个部位，每个部位均匀取样各 3 份，每
份 100 克作为待测样品，检测杭白芷中 5 种香豆素
的总含量。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
采用 Phenomenex Gemini C18(250 mm × 4． 60
mm，5 μm)色谱柱，柱温 30℃;流动相为甲醇 － 水
(70∶ 30) ，流速为 0． 8 mL /min，洗脱 30 min;UV 检
测波长 λ = 310 nm;进样量 5 μL。
2． 2 对照品溶液的制备
精密称取对照品比克白芷素 2． 20 mg、氧化前
胡素 1． 01 mg、欧前胡素 3． 13 mg、珊瑚菜内酯 0． 72
mg、异欧前胡素 2． 64 mg，置同一 10 mL 容量瓶中，
加 50%甲醇定容至刻度，制成浓度分别为 0． 220 mg
·mL －1、0． 101 mg·mL －1、0． 313 mg·mL －1、0． 072 mg·
mL －1、0． 264 mg·mL －1的混合对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备
新鲜不同部位的样品经 66 ℃烘干，粉碎过 4 号
筛，精密称取药材粉末 5 g，用 95%乙醇 80 mL 在水
浴 85 ℃加热回流，提取 3 次，每次 2 h。合并提取
液，浓缩至干后用甲醇溶解，并定容至 25 mL容量瓶
中，经 0． 45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2． 4 线性关系的考察
分别吸取混合对照品溶液 2 μL、4 μL、6 μL、8
μL、10 μL，按“2． 1”项下色谱条件测定。各对照品
以峰面积 Y对相应的浓度 X进行线性回归，5 个成
分的线性方程见表 1。
表 1 5 种香豆素对照品线性关系
成分 线性方程 Ｒ2(n = 5) 线性范围 /μg
1 Y = 2 728． 9X － 14． 22 0． 999 8 0． 440 － 2． 200
2 Y = 3 715． 3X － 29． 447 0． 999 9 0． 202 － 1． 010
3 Y = 2 846． 8X + 2． 585 6 0． 999 9 0． 626 － 3． 130
4 Y = 3 019． 4X － 10． 361 0． 999 7 0． 144 － 0． 720
5 Y = 4 025． 4X － 33． 685 0． 999 9 0． 528 － 2． 640
2． 5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 5 μL，连续进样 6 次，
测定峰面积，按“2． 1”项下条件测定含量。结果各标
准品含量的 ＲSD均小于 2． 13%，表明精密度良好。
2． 6 稳定性试验
取杭白芷的同一供试品溶液，在前述色谱条件
下分别在 0，2，4，6，8，10，24 h进样 10 μL，各标准品
含量的 ＲSD均小于 2． 02%。结果表明供试品溶液
在 24 h内稳定。
2． 7 重复性试验
取杭白芷的同一供试品溶液，按“2． 3”项下方
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第 4 期 王 鸣，等:ＲP － HPLC测定杭白芷不同部位 5 种香豆素的含量
法重复提取 5 份，按上述色谱条件测定含量，结果表
明各标准品含量的 ＲSD均小于 2． 50%，表明重复性
良好。
2． 8 加样回收率试验
量取已知含量的杭白芷供试品溶液 1 mL至 10
mL容量瓶，加甲醇定容至 10 mL。分别精密加入五
种香豆素对照品适量，按供试品项下方法制备，测定
各标准品的含量计算回收率，结果见表 2。
表 2 5 种香豆素成分回收率试验结果
成分 /
mg
样品含量 /
mg
加入量 /
mg
测定值 /
%
平均回收
率 /% ＲSD
1． 27 1． 50 2． 75
1 1． 27 2． 00 3． 28 98． 9 1． 65
1． 27 2． 50 3． 74
2． 95 1． 50 3． 42
2 2． 95 2． 00 3． 97 100． 3 1． 64
2． 95 2． 50 4． 48
3． 21 1． 50 4． 65
3 3． 21 2． 00 5． 15 98． 2 1． 83
3． 21 2． 50 5． 66
1． 81 1． 50 3． 29
4 1． 81 2． 00 3． 83 101． 6 3． 02
1． 81 2． 50 4． 40
2． 61 1． 50 4． 08
5 2． 61 2． 00 4． 57 99． 4 1． 24
2． 61 2． 50 5． 13
2． 9 样品测定
精密称取各样品 5． 0 g，按“2． 3”项下方法制备
供试品溶液。样品含量在线性范围内时直接进样
10 μL，通过回归方程计算含量。结果见表 3，色谱
图见图 1。
表 3 杭白芷中不同部位 5 种香豆素成分的含量 %
成分 根 须根 果实 茎 叶
1 0． 254 0． 329 0． 005 0． 001 0． 003
2 0． 591 0． 489 0． 021 0． 002 0． 006
3 0． 642 0． 491 0． 188 0． 070 0． 006
4 0． 363 0． 272 0． 059 0． 039 0． 004
5 0． 522 0． 079 0． 041 0． 052 0． 002
合计 2． 372 1． 660 0． 314 0． 164 0． 021
图 2 对照品及样品的 HPLC图
(A)混合对照品，(B)根，(C)须根，(D)果实，(E)茎 (F)叶。
3 讨 论
(1)本实验建立了 HPLC 测定栽培杭白芷不同
部位中 5 个香豆素成分含量的方法，该方法简便、
灵敏、准确。
(2)从实验数据可以看出，栽培 2 年的杭白芷
不同部位中 5 种香豆素总含量差异明显，其根中最
高，叶中最低。不同部 5 种香豆素总含量比较:根 ＞
须根 ＞果实 ＞茎 ＞叶。由此，从利用香豆素成分
开发其用途考虑，杭白芷可以作为江苏地区栽培的
优良品种。在采收根时不应弃去须根。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:1 部［S］． 北京:化学
工业出版社，2010:98．
［2］ 黄璐琦，王敏，付桂芳，等． 中药白芷种质资源的 ＲAPD 分析
［J］．中国中药杂志，1999，24(8) :457 － 458．
［3］ 王梦月，贾敏如，马逾英，等．不同入药部分及不同加工方法对
白芷香豆素类成分含量的影响［J］．中药材，2004，(27) :826 －
828．
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