全 文 ：!#
猪肚木叶中多酚含量测定
及抗氧化活性研究
宋鑫明!，，陈光英!，!，尹文清，王安伟!，，张永强!，谢东霞!
（!海南省热带药用植物化学重点实验室，海南师范大学化学系，海南海口 #$!!#%；
&广西师范大学药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室，广西桂林 #’!((’）
摘) 要：采用紫外分光光度法，以焦性没食子酸为标准品，在波长 #’(*+处，对猪肚木叶提取物中总多酚类化合物含量
进行了测定，并用流动注射化学发光法研究了猪肚木叶的抗氧化性能。实验结果表明，猪肚木叶中总多酚含量达
(’%$,-，标准曲线的回归方程 . / !0$012((,’%，3 / (,,,$，456 / ($’#-；猪肚木叶具有较强的自由基清除能力，
其 78#(为 (9#+: ; +<。
关键词：猪肚木，流动注射化学发光，抗氧化性，多酚，紫外分光光度法
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中图分类号：D5&(!&) ) ) ) 文献标识码：X) ) ) ) 文 章 编 号：!((&2(9(0（&((,）(02((,!2(9
收稿日期：&((%2(,2(!) !通讯联系人
作者简介：宋鑫明（!,%&2），男，硕士研究生，研究方向：天然药物化学。
基金项目：教育部科技重点项目（&($(,(）；海南省教育厅高等学校科
研项目（OYSY&((%2&%）。
) ) 猪肚木（ !#$%&’( %)**&+’( ,-）为茜草科
（.’/&011）鱼骨木属（!#$%&’( 2(）植物［!］。该属
植物在世界上约有 &(( 种，主要分布于热带亚洲、非
洲和大洋洲。我国有 ’种，产于西南部至南部，即鱼骨
木（8+&0)00’( 31**）、猪肚木（8%)**&+’( ,-）、大叶鱼
骨木（84&(&-1 31**）和小叶铁屎米（85*6&7)-&’(）。鱼
骨木属植物在东南亚各国都被用作传统药用植物，
用来退烧和抗炎［&］。王安伟［9］等对该属植物中大叶
鱼骨木的化学成分进行了报道，但猪肚木作为民间
药用植物，其化学成分和药理活性的研究未见报道。
为了探讨猪肚木中的药理活性，作者采用分光光度
法测定了猪肚木叶中多酚类物质的含量，并用流动
注射化学发光法对猪肚木叶提取物进行了抗氧化活性
的测定。结果发现，猪肚木叶中多酚类物质含量达
(’%$,-，且抗氧化活性良好，其 78#(为 (9#+: ; +<，具
有良好的应用前景。
!; 材料与方法
!HT+F*@H ) 优级纯，X84Z5 试剂；9(-O&Z& 溶
液) 分析纯，广州化学试剂厂；焦性没食子酸) 色谱
纯；酒石酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢
钾、乙醇、丙酮等) 分析纯；水) 二次蒸馏水。
DR2!,(! 双光束紫外可见分光光度计) 北京普
析通用仪器有限责任公司；U.U
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2009.06.105
!#
射化学发光仪! 西安瑞迈电子科技有限公司；#$%
&’ 型精密 # 计 ! 上海康仪仪器有限公司；
$()*++,#型超声仪! 上海科导超声仪器有限公司；
精密天平! $-./0.123 45%6*7$，赛多利斯科学仪器有
限公司。
!#$ 实验方法
68*86! 试剂的配制
68*8686! 9-*’:&%9-#’:& 缓冲溶液的配制! 精密称
取 678&6&*; 9-*’:&·6+#*:，溶解，定容至 )++<, 容
量瓶中，配制成 +86<0= > , 溶液；精密称取 78*+)6;
9-#’:&，用水溶解，定容至 )++<, 容量瓶中，配制成
+86<0= > ,溶液；分别以一定的比例得到所需 # 的缓
冲溶液，需现用现配。
68*868*! #*:* 溶液的配制! 取 &+? #*:* )@8A<, 于
)++<,容量瓶中定容至刻度，得 6<0= > , 的双氧水溶
液，现用现配。
68*868&! =2<1B0= 溶液的配制 ! 取 +86AAC; =2<1B0= 用
+8+6<0= > ,的 9-:#溶液定容至 )++<, 容量瓶中，配
成 +8+6<0= > ,的贮备液，在避光处保存备用。
68*8687! 酒石酸铁溶液的配制! 称取硫酸亚铁 68+;、
酒石酸钾钠 )8+;，加蒸馏水溶解并定容至 6,。
68*868)! #A8)的磷酸缓冲液的配制! 将 +8+@@A<0= > ,
磷酸氢二钠溶液与 +8+@@A<0= > , 磷酸二氢钾溶液按
D7E6@ 的比例混合，调节 #至 A8) 即得。
68*868@! 标准溶液的配制! 精确称取焦性没食子酸
*)<;，置于 6++<,容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，
浓度为 +8*)<; > <,。
68*8*! 猪肚木中总多酚的含量测定
68*8*86! 定性鉴别! 取猪肚木多酚浸膏配成 6?的水
溶液，滴加一滴 6?香荚兰素盐酸溶液，水溶液随即
呈樱红色，说明溶液中含有多酚物质。
68*8*8*! 总多酚含量的测定! 由于多酚类物质能与
亚铁离子生成紫蓝色络合物，因此按 F0=1B %
’10G-=/HB［7，)］法，以焦性没食子酸为标准品，采用分光
光度法可测定其含量。
68*8*8&! 样品处理! 称取一定量粉碎晾干后的猪肚
木叶，用浓度为 D+?的丙酮溶液在 7+I下超声振荡
提取 & 次。提取后抽滤得滤液，滤液浓缩除去有机
溶剂后用蒸馏水定容，取定量的溶液测定其中的总
酚含量。
68*8*87! 标准曲线的绘制! 准确吸取焦性没食子酸
标准液 +、68+、*8+、&8+、78+、)8+<,，置于一系列 *)<,
的容量瓶中，加水至体积为 )<,，再加入酒石酸铁试
剂 )<,，然后用 #A8) 的磷酸缓冲溶液定容至 *)<,，
混匀，静置 6)<1B，在 )7+B< 处测定吸光度值（J）。
以焦性没食子酸标准液的浓度为横坐标，以其吸光
度值为纵坐标，绘制成标准工作曲线（见图 6），计算
得回归方程为：K L6@8A@M%+8+C7D，. L +8CCCA。
68*8&! 抗氧化性能的测定［@］
68*8&86! 样品处理 ! 精密称取干燥恒重猪肚木叶
+8*++;于碘量瓶中，用 D+?的乙醇在水浴中用超声
波振荡器振荡 &+<1B，将提取液过滤至 6++<, 容量瓶
中，残渣再重复振荡提取两次，三次滤液合并，所得
图 6! 焦性没食子酸标准液标准曲线
溶液的质量浓度即为 *<; > <,，测定时稀释到所需
浓度。
按图 * 所示连接仪器，将管路清洗干净，插入相
应的溶液，均以 &+. > <1B的泵速将各流路输入分析系
统，以乙醇为空白，测定不同浓度猪肚木叶对·:#
的抑制率。
图 *! 实验装置示意图
-：#*:* 溶液；N：蒸馏水载流；G：=2<1B0=溶液；
O：猪肚木叶乙醇提取物溶液；P6、P*：蠕动泵；Q：八通阀；
F：流通池；R：废液池；S：发光检测器；P’：计算机
68*8&8*! 双氧水% =2<1B0= 发光体系及其测定 ! 在比
色管中分别加入 ) T 6+ %*<0= > ,的双氧水溶液、# 为
6+8C@ 的碳酸盐缓冲溶液（含浓度为 +86<<0= > , 的
=2<1B0=），启动 UFFV%W 型流动注射化学发光仪，流
速均为 &+. > <1B，测出双氧水% =2<1B0= 发光体系的发
光，测 & 次，取峰值平均值进行定量，发光强度以计
数表示。
68*8&8&! 氧化性测定及抑制率计算! 按图 * 所采用
的发光体系，测定一系列浓度猪肚木抑制后的发光，
分别测定三次，同样取峰值平均值进行定量。发光
强度以计数表示，以双氧水%=2<1B0=发光体系的发光
强度为空白发光峰值，可计算出加入猪肚木后抑制
发光的程度。
抑制率（?） L（空白发光峰值 U+ %加猪肚木后
的发光峰值 U）>空白发光峰值 U+ T 6++?
#$ 结果与分析
#!$ 猪肚木叶提取液中多酚含量的测定
精确称取猪肚木叶样品 +8+6++;，置于 *)<, 的
容量瓶中，加入 6+<, 蒸馏水溶解，摇匀后再加入
)<,酒石酸铁试剂，然后用 #A8) 的磷酸缓冲溶液定
容至 *)<,，混匀，静置 6)<1B，在 )7+B< 处测定吸光
度值。由测定的吸光度值 +8+*C，计算得多酚含量为
+87DAC?。
##$ 猪肚木抗氧化性能的测定
*8*86! #*:* 浓度的影响! #*:* 是·:# 的来源，因
此其浓度对发光强度影响很大。在 +8++)X6<0= > ,浓
!#
度范围内，考察了 !# 溶液对该体系发光强度及抑
制率的影响（表 $）。结果发现当 !# 浓度为
%&%’()* + ,时，相对发光强度最大，且抑制率也最大。
因此，本实验选择双氧水的浓度为 %&%’()* + ,作为适
宜条件。
表 $- 双氧水浓度对抑制率的影响
双氧水浓度（()* + ,） .% . （ .%/.）+ .%
%&%%’ $012 31$ %&4021
%&%$ $505 54 %&’$44
%&% $1 105 %&2$3
%&%’ 4512 $’5’ %&21%
%&%3’ 0422 $0$% %&2$5
%&’ %04 1’ %&’1$
%&’ $211 1$ %&’$03
&&- 碳酸盐缓冲液 6! 对抑制率的影响- 该体系
的化学发光是在碱性条件下进行的，体系 6! 的改变
对发光强度影响明显（表 ）。固定其它条件不变的
情况下，只改变碳酸盐缓冲溶液的 6!，发现当 6! 为
$$&42 时，发光强度较好，但抑制率较低，灵敏度不
好；当 6!为 $%&52 时，抑制率最大，而且发光强度适
宜，灵敏度也比较好，便于准确读数。故本实验选
6!$%&52 为适宜的测定条件。
表 - 6!对抑制率的影响
6! .% . （ .%/.）+ .%
$&%1 $5$ $%4 %&4’’%
$$&42 441 $33 %&’%10
$%&52 ’511 %3 %&20$0
$%&21 40%$ $13’ %&’24$
$%&42 4$0’ %3 %&’%53
$%&$0 40$ $%14 %&’’4%
&&0- *7(89)*浓度对发光强度的影响- 在固定双氧
水的浓度为 %&%’()* + ,，6! 为 $%&52 时，考察了
*7(89)*浓度在 :$% /’()* + ,至 $ : $% /0()* + ,的范围
内对相对化学发光强度及抑制率的影响，结果如表 0
所示。由表 0 可以看出，鲁米诺浓度在 $ : $% /4()* + ,
时，抑制率最大，相对发光强度也最大，灵敏度也比
较好，便于准确读数。鲁米诺浓度高于或低于
$ : $% /4()* + ,时，发光强度和灵敏度都不如浓度为
$ : $% /4 ()* + , 时的好，故本实验选 *7(89)* 浓度为
$ : $% /4()* + ,为最佳条件。
表 0- *7(89)*浓度对抑制率的影响
*7(89)*浓度（$% /4()* + ,） .% . （ .%/.）+ .%
%& 301 ’$$ %&0%32
%&’ $$’5 2$ %&43%
$&% 435 0%4 %&’$5
&% ’$01 35$ %&4’21
’&% 45%5 00$ %&04$1
$% 01’ 211 %&0%
&&4- 猪肚木叶提取物抗氧化性的测定- 在选定的最
佳条件下，将猪肚木叶乙醇提取物溶液配制成 %&%$、
%&%、%&%4、%&%’、%&%2、%&%1、%&$、%&、%&’、$&%(; + (, 一系
列浓度的溶液进行实验，实验结果如图 0 所示。由
图 0 可以看出，随着猪肚木叶乙醇提取物浓度的逐
渐增加，化学发光强度呈现逐渐降低的趋势，
而抑制率则呈现逐渐增强的趋势，说明猪肚木叶乙
醇提取物具有较强的抗氧化性能，且呈现量效关
系。其 .<’%（抑制率为 ’%= 时的溶液的浓度）为
%&0’(; + (,。
图 0- 猪肚木叶抗氧化性的测定
! 结论
实验结果显示，猪肚木叶中含有大量多酚类化
合物，总多酚含量较高，达 %&4135=；猪肚木叶乙醇提
取物的 .<’%（抑制率为 ’%= 时溶液的浓度）为
%&0’(; + (,，总抗氧化能力有明显的量效关系，具有
较强的去除羟基自由基的能力。为以后猪肚木叶多
酚提取物在保健食品、药品领域中的开发利用提供
理论依据。
参考文献
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一套《食品工业科技》在手
纵观食品行业发展全貌