全 文 ：鞍山 师范 学院 学报
JournalofAnshanNormalUniversity 2 0 07-12 , 9(6):1 8 -21
迎春花黄酮类化合物抗氧化性的研究
回瑞华 ,侯冬岩 ,李铁纯 ,刘晓媛 ,刁全平
(鞍山师范学院 化学系 ,辽宁 鞍山 114007)
摘　要:采用超声波法从迎春花中提取黄酮类化合物 , 并建立了迎春花中总黄酮的光谱分析方法.本法的
回收率为 93.1% ～ 96.4%, RSD0.51%.并用流动注射化学发光法研究了迎春花的抗氧化性能 , 实验结果
表明:迎春花具有较强的抗氧化性能.
关键词:迎春花;黄酮类化合物;抗氧化性;流动注射化学发光
中图分类号:Q946.9l　　文献标识码:A　　文章篇号:1008-2441(2007)06-0018-04
SdudiesonTotalFlavonoidsandAntioxidationEffect
inJasminumNudiflorumLindl.
HUIRui-hua, HOUDong-yan, LITie-chun, LIUXiao-yuan, DIAOQuan-ping
(DepartmentofChemistry, AnshanNormalUniversity, AnshanLiaoning114007, China)
Abstract:TheultrasonicmethodwasusedforextractingflavonoidsofJasminumNudiflorum
Lindl.andtheflavonoidswerndeterminedbyspectrophotometry.Therecoveryis93.1% ～ 96.4%
andthecoeficientofvariationis0.51%.TheantioxidationefectofJasminumNudiflorumLindl.
wasstudiedbytheflow-injectionchemiluminescence.TheresultsshowthatJasminumNudiflorum
Lindl.hasastrongantioxidativeefect.
Keywords:JasminumNudiflorumLindl.;Flavonoids;Antioxidationefect;Flow-injectionchemi-
luminescence
　　迎春花(JasminumnudiflorumLind1.)为木樨科茉莉属落叶灌木 ,原产于我国中部和北部各省 ,现各
地均有栽培.迎春花性味苦 、平 、无毒 ,具有解热发汗 、利尿 、活血散毒 、消肿止痛等功效 [ 1] .现代研究证
明迎春花中含有丰富的黄酮类化合物 [ 2] ,黄酮类化合物具有降血脂血糖 、抗动脉硬化 、抗氧化 、抗肿瘤 、
抗炎等多种生理活性功效.黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂 [ 3] ,具有清除人体中超氧离子自由基 、
抗衰老 、增加机体免疫力的生理活性作用.本文采用超声波法从迎春花中提取黄酮类化合物 ,用光谱分
析法分析了迎春花中总黄酮的含量 ,并建立了流动注射化学发光法分析迎春花的抗氧化性能.实验结果
表明 ,迎春花能有效地抑制超氧阴离子自由基诱导的鲁米诺化学发光 ,并且随着发光体系中迎春花浓度
的升高 ,发光强度呈现下降趋势 ,迎春花具有较强的抗氧化性能.研究提取迎春花黄酮类化合物的方法
和抗氧化性能 ,将为进一步开发利用迎春花提供科学依据.
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
TU036型紫外可见分光光度计(美国瓦里安公司), KQ-250B型超声清洗器(昆山市超声仪器有
收稿日期:2007-10-20
基金项目:辽宁省教育厅科学技术基金资助课题(20331079).
作者简介:回瑞华(1945-),女 ,辽宁海城人 ,鞍山师范学院化学系教授 ,从事有机分析及天然产物化学教学与研究.
限公司), RE52CS型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂), IFFM-D型流动注射化学发光仪(西安瑞迈电
子科技有限公司).
芦丁黄酮标准品(中国药品生物制品鉴定所).
芦丁黄酮标准储备液:称取 0.021 4g芦丁标准品 ,置于 100 mL的容量瓶中 ,加乙醇(95%)使其溶
解稀释至刻度 ,备用.
迎春花样品:分别采自中国千山和鞍山师范学院校园.,迎春花采下后 ,自然晾干 ,粉碎过 0.425 mm
筛 , 60 ℃真空干燥至恒重后备用.
邻苯三酚(AR)用 0.01 mol/LHCl配成 0.01mol/L储备液 ,使用前用水稀释浓度为 5×10-5 mol/L;
0.01mol/LNa2CO3-NaHCO3缓冲溶液(AR),用前新鲜配制 , pH用酸度计准确调至 9.95;Luminol用
0.05mol/LNaOH配成 0.05mol/L,在避光处保存 ,所用试剂均为分析纯 ,水为二次蒸馏水.
1.2　超声波法提取迎春花中总黄酮
精密称粉碎后的迎春花 2.00 g,放入锥形瓶中 ,加入 95%乙醇 20 mL,在冰水浴中用超声波振荡器
振荡 20 min,将提取液过滤至 100mL容量瓶中 ,残渣再重复振荡提取 2次 , 3次滤液合并 ,用 95%乙醇
溶液定容至刻度 [ 4] ,备用.
1.3　吸收曲线的绘制及测定波长的确定
从迎春花超声波法提取贮备液中移取样品液 0.10 mL置于 10 mL容量瓶中 ,用 1%三氯化铝溶液
定容至刻度.以 1%三氯化铝溶液为参比液 ,在 400 ～ 800 nm范围内扫描 ,得到其吸收光谱 ,最大吸收波
长为 271 nm.
移取上述芦丁黄酮标准贮备液 0.50mL置于 10mL容量瓶中 ,用 1%三氯化铝溶液定容至刻度.以
1%三氯化铝溶液为参比液 ,在 400 ～ 800 nm范围内扫描 ,得到其吸收光谱 ,最大吸收波长为 271 nm.由
实验可知 ,超声波法提取迎春花黄酮可用芦丁做黄酮标准品 ,测定波长为 271.0nm.
1.4　邻苯三酚-碳酸盐缓冲溶液-luminol发光体系及其测定
图 1　流动注射化学发光分析流路图
P-蠕动泵;V-进样阀;C-流通池;PMT-光电倍增管;AMP-放大
器;HV-负高压:800V;R-记录仪;W-废液;a-样品;b-邻苯三
酚;c-H2O;d-Na2CO3-NaHCO3 缓冲溶液 (加入 luminol)
在比色管中分别加入 5×10-5 mol/L的邻苯三酚溶
液 、pH为 9.95的碳酸盐缓冲溶液(含浓度为 0.2mmol/L
的 luminol),启动 IFFM-D型流动注射化学发光仪 ,按图
1连接流路 ,流速均为 2.5 mL/min,测出邻苯三酚 -碳酸
盐缓冲溶液 -luminol发光体系的发光 ,测 3次 ,取峰值平
均值进行定量[ 5] .发光强度以计数表示.
1.5　氧化性测定及抑制率计算
按 1.4所采用的发光体系 ,测定一系列浓度迎春花
的抑制后的发光 ,分别测定 3次 ,同样取峰值平均值进
行定量.发光强度以计数表示.以邻苯三酚-碳酸盐缓冲
溶液-luminol发光体系的发光强度为空白发光峰值 ,可计算出加入迎春花后抑制发光的程度.
抑制率(%)的计算:(空白发光峰值 -加迎春花后的发光峰值)/空白发光峰值 ×100%.
2　结果与讨论
2.1　标准曲线的绘制
分别移取 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9mL的芦丁标准储备液于 10mL容量瓶中 ,用 1%三氯化
铝溶液定容至刻度.以 1%三氯化铝溶液为参比液 ,在其波长为 λ=271nm处分别测定其吸光度值并且
给出 A值.求得 A与浓度关系的回归方程为:
C=27.579 A-0.939 9
根据 A与浓度的关系可绘制出线性很好的标准曲线.求得相关系数 r=0.998 6,经查表得临界相关系数
r(99%, n-2)=0.917 0, r>r(99%, n-2),说明黄酮的浓度在 0 ～ 19.260 (μg/mL)范围内 , A与浓度 C之间呈良
19第 6期 回瑞华 , 等:迎春花黄酮类化合物抗氧化性的研究
好的线性关系 ,可按标准曲线法进行定量分析.
2.2　稳定性实验
用与绘制吸收曲线配制相同的方法配制的样品进行稳定性实验 ,结果表明:样品放置 5 h以上 ,测
得其吸光度值不变.
2.3　回收率及方法精密度
根据前面确定的测试条件 ,按上述实验方法制备 6个不同浓度的样品 ,按标准加入标准物 ,在测定
波长下测定 A,求得其平均回收率 、标准偏差及 RSD,结果分别列于表 1和表 2.
表 1　方法精密度　　　　　　　　　　　　　　　　　(μg/mL)
编号 取样浓度 九次测量值 平均值 标准偏差 RSD(%)
1 6.420 6.597～ 6.600 6.598 0.001 3 0.019
2 8.560 8.590～ 8.600 8.595 0.004 2 0.049
3 10.700 10.125～ 10.179 10.146 0.018 0.18
4 12.840 12.746～ 12.765 12.712 0.065 0.51
5 14.980 14.604～ 14.641 14.621 0.013 0.092
6 17.120 16.969～ 16.981 16.975 0.00 48 0.028
表 2　方法回收率　　　　　　　　　　　　　　　　(μg/mL)
样品编号 加入前 加标量 理论值 实测值 回收率(%)
1 6.289 4.240 10.529 10.237 93.1
2 10.284 4.240 14.524 14.370 96.4
3 13.693 4.240 17.933 17.655 93.4
2.4　样品分析
精密称取迎春花药材粉末 2.00g,按 1.2实验方法制备样品溶液 ,按操作条件 ,在测定波长 λ=271
nm处测其吸光度 ,分析结果列于表 3.
表 3　迎春花样品中黄酮的分析结果
样品 产地 提取方法 总黄酮的含量 (mg/g)
迎春花 中国千山 超声波法 68.6
迎春花 鞍山师范学院校园 超声波法 62.9
2.5　luminol浓度对抑制率的影响
移取浓度为 5×10-5 mol/L的邻苯三酚溶液 , pH值为 9.95的 Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液 ,抑制实验
中的迎春花浓度为 5mg/mL,改变 luminol的用量 ,分别取 50, 100, 150, 200, 250, 500μL、1mL的 luminol
用缓冲溶液将其稀释至 25mL进行实验.实验结果可以看出 , luminol的加入量对抑制率有一定的影响.
可以看出当 luminol的浓度为 0.2 mmol/L时迎春花的抑制率达到最大值.因此本实验选 luminol的浓度
为 0.2mmol/L时为适宜的测定条件.
2.6　缓冲溶液的 pH值对抑制率的影响
移取浓度为 5×10-5 mol/L的邻苯三酚溶液 ,浓度为 0.2 mmol/L的 luminol溶液 ,抑制实验中迎春
花的浓度为 2mg/mL,仅改变 Na2CO3 -NaHCO3缓冲溶液的 pH进行实验.实验结果可以看出 , pH对抑制
率有一定的影响 ,当 pH为 9.62时抑制率达到最大值 ,但是其发光强度很低 ,灵敏度不好;当 pH值为
10.58时 ,抑制率低;当 pH为 9.95时 ,抑制率和 pH为 9.62时的抑制率仅差 2%,而且发光强度适宜 ,
灵敏度也比较好 ,便于准确读数.故本实验选 pH9.95为适宜的测定条件.
2.7　邻苯三酚浓度对抑制率的影响
移取 pH为 9.95的 Na2CO3 -NaHCO3缓冲溶液 ,浓度为 0.2 mmol/L的 luminol溶液 ,抑制实验中迎
春花的浓度为 2mg/mL,仅改变邻苯三酚的浓度 ,分别取浓度为 0.01mol/L邻苯三酚 0.25, 0.125, 0.1,
0.025 mL稀释至 25mL,即得浓度为 1×10-4 , 5×10-5 , 4×10-5 , 1×10-5 mol/L的邻苯三酚溶液进行实
验.实验结果可知 ,邻苯三酚的浓度对抑制率也有一定的影响.可以看出当邻苯三酚的浓度为 5×10-5
20 鞍山师范学院学报 第 9卷
mol/L时迎春花的抑制率达到最大值.因此本实验选邻苯三酚浓度为 5×10-5 mol/L为适宜条件进行实
验.由以上实验可得出测定迎春花的抗氧化性能的最佳条件为:luminol的浓度 0.2 mmol/L,缓冲溶液的
pH9.95,邻苯三酚的浓度 5×10-5 mol/L.
2.8　迎春花抗氧化性能的测定
在选定的最佳条件下 ,移取质量浓度为 5 mg/mL迎春花溶液配制成 0.08, 0.20, 0.40, 1.00, 1.60,
2.80, 6.00, 20.0mg/mL一系列浓度的溶液进行实验.实验结果见图 2.
图 2　迎春花抗氧化性测定
由图 2可以看出 ,随着迎春花浓度的逐渐增加 ,化学发光强度呈现逐渐降低的趋势 ,而抑制率则呈
现逐渐增强的趋势 ,说明迎春花具有较强的抗氧化性能 ,且呈现量效关系.迎春花 的 IC50 (抑制率为
50%时的溶液的浓度)为 1.28 mg/mL.
实验结果表明迎春花中含有丰富的黄酮类化合物 ,超声提取可以缩短时间 ,提高有效成分的提取
率 ,而且方法的准确度和精密度较高 ,是一种值得采用的方法.
参考文献:
[ 1] 宁可夫.吃迎春花可祛病 [ J] .中国食品 , 2000, (3):18.
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[ 3] 胡春.黄酮类化合物的抗氧化性质 [ J] .中国油脂 , 1996, 21(4):18-21.
[ 4] 马学毅 , 回瑞华 [ J] .甘肃药学 , 1990, 8(1):28.
[ 5] SongZheng-hua, ZhangNi.Flow-injectionChemiluminescenceDeterminationofReserpineinMidicineandBiologicalFluids
withControled-Reagent-ReleaseTechnology[ J] .ChineseJournalofChemistry, 2003, (21):175-180.
(责任编辑:陈　欣)
21第 6期 回瑞华 , 等:迎春花黄酮类化合物抗氧化性的研究