全 文 ：* 广西科学研究与技术开发计划项目 (桂科攻 0322024-5E)
1广西壮族自治区人民医院
△ 通讯作者:黄仁彬 , 0771-5358272( O)。
E-mail: h uangrenbin518@ sohu. com
收稿日期: 2004-01-20
复方六月雪在体外对 HBsAg和 HBeAg的抑制作用*
杨霞芳1　荣延平　蒋伟哲　焦　杨　黄仁彬△
(广西医科大学药理学教研室　南宁　 530021)
摘要　目的: 观察复方六月雪 ( LYXC)在体外对 HBsAg和 HBeAg的抑制作用。方法:将 LYXC与等量的 HBsAg或 HBeAg阳
性血清混匀 ,使混合后的浓度分别为 6、 12、 24、 48和 96 g / L,孵育 0、 4、 8、 16 h,采用 ELISA法测定 HBs Ag或 HBeAg的滴度 ,
观察其对 HBsAg或 HBeAg的抑制作用。结果: 12 g /L及以上浓度的 LYXC对 HBsAg或 HBeAg具有明显的抑制作用 ( P均
< 0. 01) ; 6 g /L以上浓度分别在作用 8、 16 h后对 HBsAg具有明显的抑制作用 ( P < 0. 01) ,在作用 4、 8、 16 h后对 HBeAg具
有明显的抑制作用 ( P < 0. 01)。 结论: LYXC在体外有较强的抗 HBs Ag和 HBeAg作用。
关键词　复方六月雪 ; HBsAg; HBeAg;抑制
中国图书资料分类法分类号　 R965
　　六月雪是一种尚未开发利用的广西所特有的民间草药 ,
民间一直用于治疗乙型、丙型病毒性肝炎及肝硬化。 它与白
花蛇舌草等配伍组成复方 ,命名为复方六月雪 ( LYXC)。动物
实验发现 , LYXC对四氯化碳、对乙酰氨基酚、 D-半乳糖胺
等所致小鼠急性化学性肝损伤均有明显的保护作用 [1 ]。本研
究采用 ELISA技术 ,观察 LYXC在体外对 HBsAg和 HBeAg
的抑制作用。
1　材料和方法
1. 1　药品与主要试剂: 若干份 HBsAg或 HBeAg阳性血清
由广西壮族自治区人民医院检验科提供。 LYXC口服液 ,由
本室自行提取制备 ,溶液含生药 3 g /ml。乙型肝炎 HBsAg诊
断试剂盒 (酶联免疫吸附试验 , EL ISA ) ,批号: 20010902,乙
型肝炎 HBeAg诊断试剂盒 (酶联免疫吸附试验 , EL ISA) ,批
号: 200106908,均是上海荣盛生物技术有限公司产品。
1. 2　仪器与设备: GXM-202型酶标光度计 (四川仪表九厂
生产 )。
1. 3　方法 [2～ 4 ]
1. 3. 1　 HBsAg、 HBeAg的测定: 采用 ELISA双夹心法检测
HBs Ag、 HBeAg。 按试剂盒方法测定。
1. 3. 2　制作 HBsAg和 HBeAg的标准曲线: 选择数份 HB-
sAg或 HBeAg阳性血清 ,用磷酸缓冲液 ( PBS)按 1∶ 2将血
清作倍比稀释 ,经 ELISA方法测定原血清及不同稀释度血
清样品的 HBsAg或 HBeAg含量 (光密度 , OD) ,当被测血清
样品 OD值≥阴性血清对照 OD值的 2. 1倍时为阳性 ,阳性
血清样品的最高稀释度为原血清 HBsAg或 HBeAg的滴度。
以 OD值 (阳性血清 OD— 阴性血清 OD)为纵坐标 ,血清 HB-
sAg或 HBeAg的滴度为横坐标制作标准曲线。
1. 3. 3　测定 LYXC作用后的阳性血清 HBsAg和 HBeAg滴
度: 用 ELISA法测定各血清样品 ,选择 HBsAg和 HBeAg滴
度为 1∶ 64的血清各 6份。将 LYXC pH值调至 7. 4,用 PBS
稀释为 4种不同浓度的药液。将不同浓度的药液分别与等容
量的滴度为 1∶ 64的肝炎血清混合 (肝炎血清中 LYXC的浓
度分别为 6、 12、 24、 48和 96 g /L );用 PBS与 1∶ 64肝炎血清
混合作阳性对照 ; PBS与阴性血清混合作阴性对照 ,即时放
置 37℃水浴中作用后 ,用 ELISA法测定各血清样品在 0(立
刻 )、 4、 8、 16 h的 OD值 , 6份血清各测 1次。 将受检样品的
OD值减去阴性对照 OD值后 ,由标准曲线查出受检血清样
品 HBsAg和 HBeAg的滴度。
1. 3. 4　数据处理: 数据用 SPSS10. 0统计软件进行 t检验 ,
结果以 x-± s表示。
2　结　果
2. 1　 LYXC在体外对 HBsAg、 HBeAg的抑制作用: 见表 1、
表 2。
表 1显示 LYXC与 HBsAg作用时间在 0、 4、 8、 16 h中 ,
12 g / L及以上浓度均对 HBsAg具有显著的抑制作用 ( P <
0. 01) ; 6 g /L在 0 h和 4 h对 HBs Ag的抑制作用不明显 ( P
> 0. 05) ,在 8 h和 16 h对 HBsAg具有明显的抑制作用 ( P
< 0. 01)。表 2显示 LYXC与 HBeAg作用在 0、 4、 8、 16 h后 ,
12 g / L及以上浓度均对 HBeAg具有明显的抑制作用 ( P <
0. 01) ; 6 g / L在 0 h 对 HBeAg的抑制作用不明显 ( P >
0. 05) ,在 4、 8、 16 h对 HBeAg具有明显的抑制作用 ( P <
0. 01)。 LYXC对血清 HBsAg、 HBeAg滴度的影响有一定的
浓度依赖性 ,即呈一定的浓度—效应关系。
511
广 西 医 科 大 学 学 报
JOURN AL OF GUAN GXI MEDICAL UNIV ERSITY
　 2004 Aug; 21( 4)DOI : 10. 16190 /j . cnki . 45 -1211 /r . 2004. 04. 020
表 1　 LYXC在体外对 HBs Ag的抑制作用 ( x-± s,n = 6)
LYXC
(ρB /g· L- 1 )
0 h 4 h 8 h 16 h
HBsAg滴度 抑制率
(% )
HBsAg滴度 抑制率
(% )
HBs Ag滴度 抑制率
(% )
HBsAg滴度 抑制率
(% )
6 30. 88± 0. 45 2. 89 29. 53± 0. 27 2. 90 25. 17± 2. 10* 16. 10 23. 98± 1. 50* 17. 70
12 25. 87± 2. 46* 18. 60 25. 87± 2. 46* 18. 60 19. 30± 0. 83* 35. 70 17. 97± 0. 38* * 38. 30
24 23. 24± 1. 26* 26. 90 23. 24± 1. 26* 26. 90 11. 56± 0. 42* 61. 50 11. 50± 0. 35* 60. 50
48 20. 29± 0. 66* 36. 20 20. 29± 0. 66* 36. 20 11. 00± 0. 33* 63. 30 10. 40± 0. 57* 64. 30
96 16. 64± 1. 19* 47. 70 16. 64± 1. 19* 47. 70 5. 26± 0. 36* 82. 40 3. 33± 0. 56* 88. 50
阳性血清 31. 80± 1. 09 31. 80± 1. 09 30. 03± 0. 69 29. 14± 0. 48
　　注: 与阳性血清组比较 ,* P < 0. 01
表 2　 LYXC在体外对 HBeAg的抑制作用 ( x-± s,n = 6)
LYXC
(ρB /g· L- 1 )
0 h 4 h 8 h 16 h
HBeAg滴度 抑制率
(% )
HBeAg滴度 抑制率
(% )
HBeAg滴度 抑制率
(% )
HBeAg滴度 抑制率
(% )
6 30. 70± 0. 47 1. 80 29. 52± 0. 40* 4. 30 21. 39± 1. 84* 28. 60 20. 39± 0. 36* 30. 90
12 23. 33± 1. 07 25. 30 19. 95± 0. 43* 35. 30 14. 28± 0. 37* 52. 00 13. 99± 0. 23* 52. 60
24 18. 42± 1. 30* 41. 10 9. 36± 0. 30* 69. 60 7. 99± 0. 20* 73. 30 7. 85± 0. 26* 73. 40
48 14. 73± 1. 30* 52. 80 8. 36± 0. 19* 72. 90 5. 60± 0. 23* 81. 30 5. 23± 0. 26* 82. 20
96 13. 17± 0. 33* 57. 80 6. 29± 0. 73* 79. 60 5. 34± 0. 26* 82. 10 5. 01± 0. 37* 83. 00
阳性血清 31. 26± 0. 57 30. 85± 0. 33 29. 97± 0. 46 29. 52± 0. 37
　　注: 与阳性血清组比较 ,* P < 0. 01
3　讨　论
肝炎病毒侵入人体造成的病变以肝实质变性坏死为主。
乙肝病毒 ( HBV )为嗜肝 DN A病毒的一种 ,其在人的肝细胞
中进行繁殖以“发芽”方式释放出细胞 ,病毒颗粒的核心部分
含核心抗原 ( HBcAg ) ,外壳部分含 HBs Ag ,后者可能含有“发
芽”过程中装配上的肝细胞膜成分。HBcAg及 HBsAg都可引
起细胞免疫和体液免疫反应 ,目前认为引起肝细胞免疫损害
的只是 HBsAg诱发的免疫反应 ,其中以细胞免疫反应起主
要作用。 慢性病毒性肝炎引起肝细胞坏死 ,造成纤维母细胞
增生 ,产生大量的纤维组织 ,逐渐发展为肝硬化 [5 ]。 LYXC由
多种中草药组方而成 ,其六月雪、白花蛇舌草具有清热解毒、
凉血消肿止痛功效。 六月雪还具有抗病毒及保护肝细胞作
用 ,而白花蛇舌草可兴奋网织内皮细胞系统 ,增强白细胞的
吞噬能力 [1]。 本实验结果说明 LYXC在体外对血清中 HB-
sAg和 HBeAg均有明显的抑制作用 ,且在一定范围内 ,药物
浓度越高 ,或药物与肝炎抗原暴露时间越长 ,抑制作用越强 ,
即呈现出一定的量效关系和时效关系。
体外的实验是模拟体内而进行的 ,我们的实验在一定程
度上可以反映 LYXC在体内对 HBsAg、 HBeAg起抑制作用
的机制 ,但体内和体外之间有一定的差异 ,其结果还需要相
关实验的进一步证明。
参　考　文　献
1　苏洁寒 ,荣延平 ,蒋伟哲 ,等 . 复方六月雪对急性化学性
肝损伤的保护作用 . 广西医科大学学报 , 2003, 20( 4):
497-499.
2　曹庆荣 ,黄轩清 ,贾建生 ,等 . 肝康口服液对病毒性乙型
肝炎表面抗原和 e抗原的体外研究 . 广西医学 , 1992, 14
( 6): 392-393.
3　郑民实 ,章竟根 ,刘志勇 . EL ISA技术筛选 200种中草药
抗 HBsAg的实验研究 . 微生物杂志 , 1996, 16( 1): 1-4.
4　陈　奇主编 . 中药药理研究方法学 . 北京: 人民卫生出
版社 , 1993, 286-288.
5　武忠弼主编 . 第 3版 . 病理学 . 北京: 人民卫生出版社 ,
1994. 304-312.
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广西医科大学学报　 2004 Aug; 21( 4)