全 文 ：1%, 其 DDDs 却排在第 3 位 , 价格低廉 , 满足了低收入人群
的用药需求 ,也有较好的应用。
综上所述 ,近 3 年来 ,抗排异药的使用在不断增加 ,销售
金额上升明显 ,说明接受移植手术的患者日益增多 , 抗排异
药的应用也越来越迅速广泛。特别是新剂型如环孢素眼药
水 ,以及他克莫司等药物 , 具有良好的抗排异作用 , 增长迅
猛 ,具备相当的市场潜力和发展前景。
参考文献:
[ 1] 　WHO Col lab orat ing Cen ter for Drug Stati sti cs Meth odology.
A natomical therapeutic ch emical(ATC)classif ication index wi t
h Def ined Daily Dose(DDDs)[ C] .Olso Norway , 1997:2-61.
[ 2] 　汪洋 ,冯胜民 , 张幸国.长江流域 6 城市 230 家医院 2004-
2006 年抗排异药利用分析[ J] .中国药房 , 2008 , 19(20):1530-
1532.
[ 3] 　冯胜民 ,张厚纬.杭州地区抗排异药物在器官移植中的应用分
析[ J] .中国新药杂志 , 2008 , 17(5):427-429 , 432
[ 4] 　Theng J , Zh ou L , Tan D , et al.Dist ribut ion of cy clospo rin A in
the cornea af ter topical or oral administ ration[ J] .J Ocu l Ph ar-
macol T her , 2002 , 18(1):83.
[ 5] 　林川.他克莫司的药理作用及临床应用概述[ J] .海峡药学 ,
2007 , 19(9):87-89.
[ 6] 　侯明明 ,高菲 ,许勇芳 ,等.肾移植术后 2组免疫抑制剂用药方
案的成本-效果分析[ J] .中国药房 , 2009 , 20(5):331-334.
[ 7] 　曹剑波 , 江涛.我院 2006年-2007年肾移植后患者的用药分
析[ J] .海峡药学 , 2009 , 21(4):165-167.
[ 8] 　戴燕.影响肝移植术后患者服用免疫抑制剂依从性的因素及对
策[ J] .华西医学 , 2009 , 24(4):1006-1007.
[ 收稿日期] 2010-07-24
[作者简介] 卢化 ,男 ,学士 ,药师 ,电话:027-68890109 , E-mail:ljq59169@sohu.com
高效液相色谱法测定照山白药材中杜
鹃素和槲皮素的含量
卢化 ,朱丽 　(武汉市第三人民医院药剂科 , 湖北 武汉
430060)
[ 摘要] 　目的:建立 HPLC 法测定照山白中杜鹃素和槲皮素
的含量。方法:使用 Kromasil 100A C18色谱柱(150 mm×
4.6 mm , 5 μm), 以乙腈-水为流动相 ,流速为0.6 m L·min -1 ;
柱温为30 ℃;检测波长为 360 nm。 结果:杜鹃素在 0.078 ～
1.092 μg 范围内呈线性关系 , r =0.999 8 , 平均回收率为
99.43%, RSD 为1.11%;槲皮素在0.058 ～ 0.812 μg 范围内
呈良好的线性关系 , r=0.999 9 ,平均回收率为99.83%, RSD
为1.71%。结论:该方法简便 , 准确 ,为照山白药材的质量控
制提供科学依据。
[ 关键词] 　高效液相色谱法;照山白;杜鹃素;槲皮素;含量
测定
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2011)09-0783-02
　　照山白为杜鹃花科植物小花杜鹃 Rhododendron mi-
cranthum Turcz 的叶 , 具有清热解毒 ,止咳化痰的功效 , 为神
农架林区民间用来治疗支气管炎;痈肿疮毒;外伤出血的常
用中草药 , 具有疗效确切 ,起效快 、治愈率高 、不良反应少等
特点 ,是一种值得研究 、开发的药用植物[ 1] 。杜鹃素在照山
白中含量相对较高 , 并且具有显著的止咳祛痰 , 平喘的作
用[ 2] 。目前尚未见文献报道照山白中杜鹃素和槲皮素含量
测定方法 ,本实验采用 HPLC 梯度洗脱法同时测定照山白中
杜鹃素和槲皮素的含量 , 操作简便 、快速 、重复性好 , 为照山
白药材的质量控制方法提供科学依据。
1　材料
DIONEX-ULTIM ATE 3000 液相色谱仪;杜鹃素对照
品(中国药品生物制品检定所 , 批号 110850-200604);槲皮素
对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 100081-200406);乙
腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯 , 水为纯化水;照山白药材
经中科院武汉植物园赵子恩教授鉴定为杜鹃花科杜鹃属植
物小花杜鹃 Rhododendron micranthum Turcz 的叶 , 药材标
本存放在湖北中医药大学药用植物研发中心。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　精密称取杜鹃素对照品 7.8 mg ,
加甲醇定容至 10 mL 量瓶中 , 摇匀 , 精密量取 1 mL , 再加甲
醇定容至 10 mL 量瓶中 ,即得杜鹃素对照品溶液。另精密称
取槲皮素对照品5.8 mg , 加甲醇定容至 10 m L量瓶中 , 摇匀 ,
精密量取 1 m L , 再加甲醇定容至 10 mL 量瓶中 ,即得槲皮素
对照品溶液。
2.2　供试品溶液的制备 　取照山白药材粉末(40 目)约
0.25 g ,精密称定 ,置 50 mL 量瓶中 , 精密加入甲醇 50 m L ,
精密称量 ,冷凝回流提取 1 h , 取出 , 放冷 , 精密称定 , 用甲醇
补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 用微孔滤膜(0.45
μm)过滤 ,即得 。
2.3　色谱条件　色谱柱:Kromasil 100A C18(150 mm×4.6
mm , 5 μm);流动相:乙腈-水;流速:0.6 m L·min-1 ;柱温:
30 ℃;检测波长:360 nm;进样量:10 μL;梯度洗脱程序见表
1。
表 1　梯度洗脱程序
Tab 1　Steps o f g radient elution
时间/min 乙腈 0.4%磷酸盐溶液
0 ～ 15 10 90
15 ～ 17 10※17 90※83
17 ～ 67 17※19 83※81
67 ～ 79 19※28 81※72
79 ～ 94 28※45 72※55
94 ～ 134 45※100 55※0
2.4　系统适应性试验　取上述供试品溶液 、对照品溶液及
空白溶液 ,各进样 10 μL , 测得色谱图 , 结果见图 1。结果表
明 ,样品中其他组分无干扰。
2.5　线性关系的考察　分别取杜鹃素(质量浓度为0.078 g
·L -1)和槲皮素(质量浓度为0.058 g·L-1)对照品溶液 ,精密
吸取 1 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 , 14 μL 进入高效液相色谱仪 , 分别测定
峰面积。以峰面积平均值(mA U·min)为纵坐标 , 进样量
(μg)为横坐标进行回归处理 , 计算杜鹃素回归方程 Y =
15.404 6X +14.259 3 , r= 0.999 8 , 槲皮素回归方程 Y =
20.134 1X +5.634 4 , r=0.999 9。试验结果表明 , 杜鹃素在
0.078 ～ 1.092μg 范围内进样量与峰面积线性关系良好 , 槲
皮素在0.058 ～ 0.812μg 范围内进样量与峰面积线性关系良
好。
·783·中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2011 May , Vol 31 , No.09
图 1　照山白高效液相色谱图
A.照山白药材;B.杜鹃素;C.槲皮素;D.空白溶剂
Fig 1　HPLC ch romatograms of Rhododend ron pulchrum
A.Rhododend ron pu lchrum ;B.f arrerol;C.qu ercet in;D.blank sam-
ple
2.6　精密度与稳定性试验　分别取杜鹃素(质量浓度为
0.078 g·L -1)和槲皮素(质量浓度为 0.058 g·L-1)对照品溶
液 10 μL , 连续进样 6 次 ,杜鹃素峰面积的 RSD 为0.11%,槲
皮素峰面积的 RSD为0.12%, 试验结果表明 , 仪器精密度良
好。精密取样品0.25 g , 按供试品溶液制备方法制备 , 照上
述色谱条件 , 分别于在 0 , 3 , 6 , 9 , 12 , 24 h 分别精密吸取 10
μL , 注入液相色谱仪 ,结果 RSD为0.14%, 试验结果表明 ,样
品溶液 24 h 内稳定。
2.7　重复性试验　取供试品溶液 5 份 , 每份0.25 g , 精密
称定 , 按供试品溶液制备方法制备 , 在上述同一色谱条件
下 ,分别进样 10 μL , 测得样品中杜鹃素的平均含量为
1.808%, RSD 为 0.68%;槲皮素的平均含量为 0.950%,
RSD 为1.12%。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的照山白药材粉末 9 份
(含杜鹃素1.808%, 含槲皮素0.950%), 精密称定 , 分别加入
近等量的杜鹃素和槲皮素对照品 , 按“ 2.2”项下的方法制成
供试品溶液 ,进样 10 μL , 并依法测定 ,计算回收率 , 结果见表
2 和表 3。
2.9　样品含量测定　精密吸取对照品溶液和供试品溶液各
10 μL , 按上述测定法 ,对 3 批样品中杜鹃素和槲皮素的含量
进行测定 ,结果见表 4。
3　讨论
杜鹃素在照山白药材中含量相对较高 , 应对其进行深
入研究 , 对开发这一新的药用植物资源具有一定的指导意
义。
表 2　杜鹃素加样回收率试验
Tab 2　Fa rre rol recove ry te st
编号 称样量/mg
原有量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/ %
平均值
/ %
RSD
/ %
1 62.49 1.13 1.13 2.27 100.88
2 62.53 1.13 1.13 2.25 99.12
3 62.47 1.13 1.13 2.26 100.00
4 100.01 1.81 1.81 3.64 101.10
5 99.97 1.81 1.81 3.59 98.34 99.43 1.11
6 100.05 1.81 1.81 3.61 99.45
7 124.95 2.26 2.26 4.49 98.67
8 125.02 2.26 2.26 4.47 97.79
9 125.06 2.26 2.26 4.51 99.56
表 3　槲皮素加样回收试验
Tab 3　Que rcetin recove ry te st
编号 称样量/mg
原有量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/ %
平均值
/ %
RSD
/ %
1 62.49 0.59 0.59 1.18 100.00
2 62.53 0.59 0.59 1.19 101.69
3 62.47 0.59 0.59 1.17 98.30
4 100.01 0.95 0.95 1.92 102.10
5 99.97 0.95 0.95 1.91 101.05 99.83 1.71
6 100.05 0.95 0.95 1.88 97.89
7 124.95 1.19 1.19 2.39 100.84
8 125.02 1.19 1.19 2.35 97.48
9 125.06 1.19 1.19 2.37 99.16
表 4　样品含量测定(n=3)
Tab 4　Results of content de te rmination o f sample s(n=3)
样品 杜鹃素含量/ % x/ % 槲皮素含量/ % x/ %
1 1.819 0.956
2 1.808 1.808 0.965 0.958
3 1.798 0.952
　　实验过程中曾经试用过甲醇-水 、甲醇-0.4%磷酸缓冲盐
作为流动相 ,色谱峰分离度较差 , 基线不平稳 , 改用乙腈-水
为流动相后 ,色谱峰峰形良好 , 各峰的保留时间适中 , 且基线
平稳 ,不易漂移 , 有利于含量测定。
本实验采用 HPLC梯度洗脱方法同时测定照山白中杜鹃
素和槲皮素的含量 ,并进行了方法学考察。结果表明 ,该测定
方法可行 、简便 、准确 ,可以应用于照山白药材的质量控制。
参考文献:
[ 1] 　周三云 ,李蓉涛.杜鹃花属植物化学成分及生物活性研究进展
[ J] .云南中医中药杂志 , 2008 , 29(5):51-53.
[ 2] 季字彬.中药有效成分药理与应用[ M] .哈尔滨:黑龙江科学技
术出版社 , 1995:196.
[收稿日期] 2010-12-23
·784· 中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2011 May , Vol 31 , No.09