全 文 ：续表 1
峰
号
保留
时间
化合
物
分子
式
分子
量
相对含量
(%)
15 16.27 5-(1, 5-二甲基 -4-己烯基)-
2-甲基 -1, 3-环己二烯 C15H24 206 32.24
16 16.78 α-金合欢烯 C15H24 206 6.05
17 17.51 1, 2, 3, 5, 6, 8α-六氢 -4, 7-二甲基-1-(1-甲基乙基)萘 C15H24 206 5.41
18 17.85 1, 2, 3, 4, 4α, 7-六氢 -
1 , 6-二甲基 -4-(1-甲基乙基)萘 C15H24 206 0.35
19 18.42 α-没药烯 C15H24 206 0.35
21 24.34 n-杜松醇 C15H26O 222 1.54
22 24.59 雪松烯 C15H24 206 1.50
23 25.00 (+)-(Z)-长叶蒎烷 C15H24 206 0.79
25 30.88 棕榈醛 C16H32O 240 0.55
29 38.72 金合欢基丙酮 C18H30O 262 0.81占总成分比例 95.65
　　从图 1及表 1可知 ,白花九里明挥发油中 GC-MS分析确定
了 29个色谱峰。通过 HPMSD化学工作站 , 结合 Nist05质谱图
库和 Wiley275质谱图库 ,鉴定出了 23个匹配度≥80的化合物 ,
占挥发油总量的 95.65%。按峰面积归一化法计算求得各化学
成分的相对含量。在已鉴定的 23种化学成分中 , 相对含量大于
1%的有 10种 , 其中含量较高的成分依次为 5-(1, 5 -二甲基 -
4-己烯基)-2-甲基 -1, 3-环己二烯(32.24%);1-(1, 5 -
二甲基 -4-己烯基)-4-甲基苯酚(22.87%);(E)-β -金合
欢烯(8.31%);乙烯基 -1-甲基 -2, 4-二(1 -甲基醚)环己烷
(6.85%);α-金合欢烯(6.05%);1, 2, 3, 5, 6, 8α-六氢 -4, 7-
二甲基 -1-(1-甲基乙基)萘(5.41%)。
4　讨论
白花九里明叶挥发油主要含萜类化合物 、脂肪族化合物 、芳
香族化合物等 , 其中主要以萜类化合物为主。萜类化合物具有较
强的生物活性 ,是医药 、食品 、化妆品工业的重要原料。对白花九
里明挥发油的成分进行深入研究 ,可为开发利用白花九里明资源
提供重要的科学依据。
参考文献:
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[ 2 ] 　中国科学院中国植物编辑委员会.中国植物志 [ M] .北京:科学出
版社 , 1979:13.
[ 3 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:137.
收稿日期:2010-03-04;　修订日期:2010-05-26
基金项目:广东省中医药局科研课题(No.2009154)
作者简介:刘慧琼(1978-),女(汉族),湖南邵阳人 ,现任广东药学院药科
学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事天然药物化学研究工作.
＊通讯作者简介:陈燕忠(1965-), 男(汉族),广东揭阳人 , 现任广东药学
院药物研究所研究员 ,博士学位 ,主要从事药物制剂研究工作.
大叶钩藤中柯诺辛碱的含量测定
刘慧琼 1 ,李国成2 ,卢绮雯 1 ,王定勇1 ,陈燕忠 3＊
(1.广东药学院·药科学院 ,广东 广州　510006;　2.中山大学附属第二医院 ,广东 广州　510120;　
3.广东药学院药物研究所 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 高效液相色谱法测定大叶钩藤中柯诺辛碱的含量 , 为建立大叶钩藤的质量标准提供参考。方法 采用 Dis-
coveryC18柱(25cm×4.6 mm, 5 μm), 流动相为甲醇:0.02%三乙胺水溶液 =70∶30 (V/V),流速为 1.0 ml/min,检测波
长 242 nm。结果 测得大叶钩藤中柯诺辛碱的含量平均值为 0.2240%,柯诺辛碱的平均回收率为 99.7%, RSD=1.84%
(n=3)。结论 大叶钩藤中柯诺辛碱的含量为 0.224 0%;该方法简便可行 , 重复性好 , 可为大叶钩藤药材的质量控制提
供参考。
关键词:大叶钩藤;　柯诺辛碱;　高效液相色谱法
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.01.080
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)01-0163-02
　　大叶钩藤 UncariamacrophylaWall.为茜草科植物大叶钩藤
的带钩茎枝 , 广泛分布于我国南方各省 , 为常用中药。 其性甘 、
凉 , 归肝 、心包经 , 自古用作息风定惊 、清热平肝药。临床多用于
治疗肝风内动 、惊痫抽搐 、高热惊厥 、感冒夹惊 、小儿惊啼 、妊娠子
痫 、头痛眩晕等症 , 现已成为治疗高血压病方剂中的常用药
材 [ 1] 。大叶钩藤所含化学成分主要为 4种吲哚类生物碱:柯诺辛
碱(corynoxine)、柯诺辛碱 B(corynoxineB)、异钩藤碱(iso-rhyn-
chophyline)和钩藤碱(rhynchonhyline)[ 2] 。在这 4种生物碱成分
中 , 钩藤碱和异钩藤碱很不稳定 , 容易相互转换 , 同时加热 、溶剂
处理或药材存放时间对这两种成分会造成很大的破坏 ,因而选用
钩藤碱或异钩藤碱作为大叶钩藤药材质量控制标准难以确保实
验结果的真实与可靠性。 笔者研究后发现柯诺辛碱在大叶钩藤
中含量最高 ,性质稳定 , 初步药理实验表明柯诺辛碱也有较好的
降血压活性 , 因此选用柯诺辛碱作为大叶钩藤药材质量的控制指
标有一定优势。本文采用 RP-HPLC法测定大叶钩藤中柯诺辛
碱的含量并建立测定方法 , 有助于大叶钩藤药材的质量控制 , 为
临床用药提供一定的参考依据。
1 　仪器与试药
1.1　仪器 SHIMADZULC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津
公司产品), SPD-10AT型紫外 -可见检测器(日本岛津公司产
品), HW-2000色谱工作站。 Millipore溶液过滤器 , Millipore
0.45 μm滤膜 , AY120电子分析天平(SHIMADZU公司产品)。
1.2 　试药 柯诺辛碱对照品(购自广州来普达克生物技术有限
公司产品 , 纯度≥98%,批号:20090921);甲醇(色谱纯 ,天津四友
公司产品);超纯水;三乙胺(分析纯 , 广州化学试剂厂);二氯甲
烷(分析纯 ,广州化学试剂厂);大叶钩藤于 2008-10采自广东
省云浮市 , 由广东药学院曾常青教授鉴定为大叶钩藤 Uncaria
macrophyllaWal.。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 色谱柱为 SupelcoDiscoveryC18柱(25 cm×4.6mm, 5 μm),流动相为 V(甲醇):V(体积分数为 0.02%三乙胺溶
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液)=70∶30, 流速 1.0 ml/min,检测波长 242 nm,柱温 30℃。进
样量 20μl。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取柯诺辛碱对照品 0.005 0 g,
加适量色谱纯甲醇溶解 ,并定容于 5 ml容量瓶 ,得到 1.00 mg/ml
的柯诺辛碱标准储备液。
2.3　供试品溶液的制备 取大叶钩藤药材粉碎过 40目筛 , 精密
称取 2.00 g, 装入 50ml具塞三角瓶 ,加入 5 ml氨水润湿 ,再加二
氯甲烷 40ml冷浸 24 h后 , 低温超声提取 1 h, 过滤 , 滤液水浴浓
缩至干 , 用色谱纯甲醇溶解并定容于 25 ml容量瓶。 混匀后用微
孔滤膜过滤 , 平行做 5份 ,作为 1 ～ 5号供试品溶液。
2.4　标准曲线的制备 精密吸取柯诺辛碱对照品储备液各 10,
20, 40, 80, 160 μl置于 1 ～ 5号 2 ml容量瓶中 ,分别用色谱纯甲醇
定容 , 配制得系列对照品溶液。混匀后用微孔滤膜过滤 , 依次取
上述溶液各 20μl进样 , 做 HPLC分析 ,见图 1,以柯诺辛碱的色谱
峰面积对浓度做标准曲线 , 回归方程为 Y=24 322.9X+
143 710.6, (r=0.999 6)。结果表明 ,柯诺辛碱在 5.0 ～ 80μg/ml
范围内呈良好线性关系。
a-对照品色谱图(柯诺辛碱)　b-样品色谱图
图 1　大叶钩藤中柯诺辛碱的HPLC图
2.5　精密度实验 精密吸取同一柯诺辛碱对照品溶液 20μl,连
续进样 6次 , 测得柯诺辛碱的峰面积 RSD为 2.1%, 结果表明仪
器具有良好的精密度 。
2.6 　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 分别于 0, 2, 4, 6, 8, 24 h
进样测定 , 结果显示 , 柯诺辛碱的峰面积的 RSD为 2.92%, 表明
供试品溶液在 24h内稳定。
2.7　样品测定 分别取 1 ～ 5号供试品溶液进样 20μl, 测量样品
的 HPLC图谱 , 见图 1。每份测 3次 ,将柯诺辛碱的峰面积代入标
准曲线 ,测得 1 ～ 5号样品的柯诺辛碱含量分别为 0.215 7%,
0.227 3%, 0.223 7%, 0.225 0%, 0.228 4%, 样品含量的平均值
为 0.224 0%,含量的 RSD为 2.23%。
2.8　检测限与定量限 精密量取线性项下柯诺辛碱 5 μg/ml对
照品溶液定量稀释 ,以信噪比 S/N为 3∶1,测得柯诺辛碱的的检
测限为 0.5 μg/ml, 信噪比 S/N为 10∶1,测得柯诺辛碱的检测限
为 2.5 μg/ml。
2.9　加样回收率实验 取已知含量的同一供试品溶液 ,分别精密
加入不同浓度的柯诺辛碱对照品溶液 ,测定并计算回收率。结果
见表 1。
表 1　加样回收率实验
样品量
m/μg
加入量
m/μg
测得量
m/μg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
86.29 75.0 160.12 98.4
86.29 85.0 172.84 101.8 99.7 1.84
86.29 100.0 185.23 98.9
　　n=3
3　讨论
3.1　样品提取 本实验采用氨水润湿 , 二氯甲烷冷浸后超声提取
1h的方法 ,能较好的提取其中的生物碱成分 , 减少了其他成分对
测定的干扰 ,回收实验证明提取方法良好。
3.2　分析波长的选择 经紫外测定 , 柯诺辛碱的最大吸收波长
为 242 nm,故选择 242 nm为最大吸收波长。
3.3　流动相的选择 本研究在参照文献 [ 3 ～ 5]的基础上 , 进行
了流动相的选择 , 结果表明流动相为甲醇∶水(含 0.02%三乙
胺)=70∶30时 , 柯诺辛碱的峰形对称且能和其他成分良好分
离。
4　结论
本研究建立的高效液相色谱法 ,可测定大叶钩藤中柯诺辛碱
的含量 。本提取方法及检测分析方法具有简便准确 、重复性好 ,
易于掌握的特点 ,而且检测成分稳定可靠 , 是较理想的大叶钩藤
的质量控制方法 ,可用于大叶钩藤药材及其复方制剂中柯诺辛碱
的质量控制。
参考文献:
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