全 文 ：大叶钩藤中柯诺辛碱对照品的制备及鉴定
陈清霞1，徐祖疆2，肖 玥2，陈燕忠2，王定勇2*
(1. 中山大学孙逸仙纪念医院药学部，广东 广州 510288;2. 广东药学院药科学院，广东 广州 510006)
摘要 目的:建立从大叶钩藤(Uncaria macrophylla Wall. )中制备柯诺辛碱对照品的方法。方法 :采用萃取、
硅胶柱层析和重结晶方法对氨水碱后的大叶钩藤二氯甲烷提取物进行分离纯化，通过 MS、IR、1H-NMR和13 C-NMR
进行结构鉴定，通过 TLC法和 HPLC法对对照品进行纯度检测。结果 :从大叶钩藤中分离纯化出柯诺辛碱对照品，
质量分数 ＞ 98. 0%。结论:该方法制备的柯诺辛碱对照品符合中药化学对照品的相关要求，可作为钩藤药材及其
制剂质量控制用的化学对照品。
关键词 大叶钩藤;柯诺辛碱;对照品;制备
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)09-1448-02
收稿日期:2012-06-25
作者简介:陈清霞(1969-) ，女，主管药师，主要从事医院药学研究;Tel:13711296972，E-mail:cqx1102@ 163. com。
* 通讯作者:王定勇，Tel:020-39352213，E-mail:wdingyong@ 163. com。
大叶钩藤 Uncaria macrophylla Wall. 为茜草科
钩藤属植物，广泛分布于我国南方各省，为常用中
药，具有息风定惊、清热平肝之功效，临床多用于治
疗头晕目眩、惊痫抽搐、全身麻木等心血管和神经系
统疾病，现已成为治疗高血压方剂中常用药物〔1〕。
2010 年版中国药典规定钩藤为茜草科植物钩藤 Un-
caria rhynchophylla(Miq. )Jacks. 、华钩藤 U. sinensis
(Oliv. )Havil. 、大叶钩藤 U. macrophylla Wall. 、毛钩
藤 U . hirsute Havil. 或无柄果钩藤 U . sessilifructus
Roxb. 的干燥带钩茎枝，生物碱类化合物是这些植
物中的主要有效化学成分。目前药典中鉴定钩藤药
材主要采用形态学和以异钩藤碱为对照品的薄层色
谱鉴定两种方法。笔者在大叶钩藤的化学成分研
究〔2〕中发现:柯诺辛碱含量最高且性质稳定，钩藤
碱不稳定，而异钩藤碱含量低、稳定性也不高且价格
昂贵。课题组曾用自制的柯诺辛碱对照品(纯度≥
98%，批号:20090921)对大叶钩藤中柯诺辛碱的含
量进行了精确测定〔3〕，同时文献报道其它钩藤药材
中也含有柯诺辛碱〔4〕。因此，柯诺辛碱应该是钩藤
药材鉴定的一种较合适的中药化学对照物质。本文
从大叶钩藤中提取、分离和纯化柯诺辛碱，制备柯诺
辛碱对照品，为制定和完善钩藤药材及其制剂的质
量标准提供基础。
1 仪器及材料
X-6 显微熔点测定仪(未校正，北京泰克仪器有
限公司) ;Bruker AM-500 型核磁共振仪(TMS 为内
标，瑞士 Bruker公司) ;Nicolet PROT?G?460 红外
光谱仪(KBr 压片，美国 Nicolet 公司) ;Agilent6120
型质谱仪(美国 Agilent 公司) ;ACQUITY UPLC-
FTN /TUV型高效液相色谱仪(美国 Waters 公司) ;
摇摆式高速中药粉碎机(大德中药机械有限公司) ;
RE-52CS旋转蒸发器(河南省巩义市英峪予华仪器
厂)。
大叶钩藤于 2010 年 10 月采自广东阳春市，由
广东药学院中药学院曾常青教授鉴定为大叶钩藤
Uncaria macrophylla Wall. ，标本存放于广东药学院
天然药物化学实验室。色谱用中性氧化铝(上海五
四化学试剂有限公司) ，水为蒸馏水，甲醇为色谱
纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 柯诺辛碱的制备 取大叶钩藤的干燥带钩茎
枝 1 kg粉碎至 60 目，置于 5 L 规格锥形瓶中，加入
2. 5 L 1. 0%稀氨水，搅拌至药粉全部湿润，室温放
置 1 h;然后加入二氯甲烷 3500 mL 为溶剂，室温浸
泡 7d后抽滤，滤液于 45℃下减压浓缩为原有体积
的 1 /3 后置于 5 L规格分液漏斗中，用 0. 5%稀硫酸
萃取 2 次，每次 2000 mL;酸水萃取液用浓氨水碱化
至 pH =10 即析出大量白色沉淀，静置后抽滤得总
生物碱 6. 5g;上述总生物碱(10. 0g)通过中性氧化
铝柱(100 目，1 kg) (Ф80 mm × L1000 mm)色谱进行
纯化，依次用洗脱剂 φ1 10L、洗脱剂 φ2 50L 和乙酸
乙酯 5 L洗脱，洗脱流速≤6 mL /min，收集 φ2 洗脱
液部分(其中洗脱剂 φ1 由石油醚和乙酸乙酯按体
积比 7∶ 1 组成;洗脱剂 φ2 由石油醚和乙酸乙酯按体
积比 5:1 组成)。将上述 φ2 洗脱液部分置于旋转
蒸发仪上减压蒸发去除溶剂后得到柯诺辛碱粗品
(2. 5 g) ，将柯诺辛碱粗品用乙酸乙酯 50 mL回流溶
解，抽滤去除不溶性杂质，滤液重新回流至澄清后先
置于室温 2 h，然后放置 0℃冰箱中析晶，24 h 后有
大量白色粒状晶体析出，抽滤，收集白色粒状晶体，
·8441· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 9 期 2012 年 9 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.09.025
即得柯诺辛碱纯品(1. 2 g)。
2. 2 柯诺辛碱的理化性质及结构鉴定 白色颗粒
状晶体，mp 155. 0 ～ 157. 5 ℃，Dragendarff 试验显橙
色。ESI-MS(m/z) :383. 1［M-H］－;IRνmax(KBr)
cm －1:3170，3060，3020，2930，2778，1700，1615，
1243，753。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:9. 44(1H，
s，NH-1) ，2. 37(1H，dd，J = 11. 4，2. 7 Hz，H-3) ，3. 21
(1H，m，H-5b) ，2. 42(1H，ddd，J = 8. 7，8. 7，8. 7 Hz，
H-5a) ，2. 35(1H，dd，J = 9. 4，2. 0，H-6b) ，2. 02(1H，
m，H-6a) ，7. 43(1H，d，J = 7. 4 Hz，H-9) ，7. 15(1H，
ddd，J = 7. 7，7. 7，1. 0 Hz，H-11) ，7. 02(1H，ddd，J =
7. 5，7. 5，0. 9 Hz，H-10) ，6. 90(1H，d，J = 7. 7 Hz，H-
12) ，1. 82(1H，ddd，J = 12. 9，2. 7，2. 7 Hz，H-14b) ，
2. 76(1H，dt，J = 13. 3，3. 6 Hz，H-15) ，7. 22(1H，s，
H-17) ，1. 65(1H，m，H-18b) ，1. 08(1H，m，H-19a) ，
0. 86(3H，t，J = 7. 7 Hz，H-19) ，1. 48(1H，brd，J =
11. 3 Hz，H-20) ，3. 18(1H，dd，J = 7. 6，2. 1 Hz，H-
21b) ，2. 15(1H，dd，J = 11. 1，2. 1 Hz，H-21a) ，3. 58
(3H，s，-COOCH3) ，3. 49(3H，s，-OCH3) ;
13C-NMR
(125MHz，CDCl3)δ:182. 6(C-2) ，73. 0(C-3) ，53. 8
(C-5) ，34. 7(C-6) ，57. 4(C-7) ，134. 6(C-8) ，124. 7
(C-9) ，122. 1(C-10) ，127. 1(C-11) ，109. 6(C-12) ，
140. 0(C-13) ，25. 3(C-14) ，38. 9(C-15) ，111. 6(C-
16) ，160. 2(C-17) ，12. 9(C-19) ，19. 2(C-18) ，40. 2
(C-20) ，54. 6(C-21) ，169. 1(C-22) ，51. 2(-COO
CH3) ，61. 0(-OCH3)。以上数据与文献
〔2〕报道的柯
诺辛碱数据对照基本一致。其化学结构见图 1。
图 1 柯诺辛碱的化学结构
2. 3 柯诺辛碱样品的纯度检测
2. 3. 1 TLC 法检査:将柯诺辛碱样品用甲醇配制
成 1 mg /mL 的溶液，分别点样 5、10、20 μL，分别以
石油醚-丙酮(体积比 5∶ 2)、三氯甲烷-丙酮-三乙胺
(体积比 3∶ 7∶ 0. 002)和三氯甲烷-甲醇(体积比 30∶
1)为展开剂，在硅胶 G 板上展开，碘化铋钾为显色
剂。结果表明，在3种展开剂中柯诺辛碱样品均为
1 个斑点，未见其它杂质斑点，Rf 值分别为 0. 40、
0. 58 和 0. 67。
2. 3. 2 HPLC法检查:称取柯诺辛碱 0. 001 g，在甲
醇溶液中溶解并定容到 10 mL，得到质量浓度为 0. 1
mg /mL的样品溶液。取上述样品溶液 1 mL 用流动
相定容到 50 mL，得到质量浓度为 2 μg /mL 的对照
品溶液。色谱柱为 ACQUITY UPLC BEH C18柱(2. 1
mm ×50 mm，1. 7 μm) ，参照课题组已有的 HPLC 测
定方法〔3〕，以甲醇-0. 04 mol /L 三乙胺(HAc 调 pH
至 10，体积比 70 ∶ 30)为流动相，流速为 0. 2 mL /
min，柱温为 35 ℃，检测波长为 254 nm，对照品溶液
质量浓度为 2 μg /mL，进样量为 1 μL。结果表明，
在该色谱条件下所得 HPLC 图谱中显 1 个主峰，保
留时间为 56. 8 min，质量分数以峰面积归一化法计
算为 98. 18%。
3 讨论
生物碱在植物体中通常是以盐的形式存在，本
实验中釆用了稀氨水碱化技术，使得药材中的柯诺
辛碱有机酸盐先转化为游离态生物碱，这样极大地
提高了柯诺辛碱的提取得率，同时碱的浓度也至关
重要，浓度太高则引起柯诺辛碱的结构改变;通过反
复试验得出 1%的稀氨水较合适。大叶钩藤中主要
含柯诺辛碱、柯诺辛碱 B、异钩藤碱和钩藤碱四种生
物碱，其中柯诺辛碱含量最高且性质稳定，从大叶钩
藤中提取柯诺辛碱有资源优势，同时 2010 版中国药
典涉及的钩藤药材 5 个品种来源文献报道都含有柯
诺辛碱成分，因此，柯诺辛碱完全可以用作控制钩藤
药材及其制剂质量的重要指标化合物。柯诺辛碱的
药理作用报道较少，是否是钩藤药材的主要有效物
质之一，相关研究正在进行之中。
致谢:广州来普达克生物技术有限公司提供部分经费支持，广东
省海洋与渔业环境监测中心谢海平主任测试柯诺辛碱对照品纯度，
在此表示诚挚谢意。
参 考 文 献
［1］杨君，宋纯清，胡之璧 . 大叶钩藤的化学成分研究［J］.
中国中药杂志，2000，25(8) :484-485.
［2］郑嘉宁，王定勇 . 大叶钩藤生物碱类化学成分研究
［J］.中医药导报，2009，15(1) :80-81.
［3］刘慧琼，李国成，卢绮雯，等 . 大叶钩藤中柯诺辛碱的含
量测定［J］. 时珍国医国药，2011，22(1) :163-164.
［4］张竣，杨成金，吴大刚 . 钩藤的化学成分研究(Ⅲ) ［J］.
中草药，1999，(1) :12-14.
·9441·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 9 期 2012 年 9 月