全 文 ：乌蕨与黄连 、黄芩 、穿心莲抗菌活性的比较
陈明1 ,段萍2 ,陈金秀2
(1.贵州省黔南民族医学高等专科学校药理学教研室 , 贵州 都匀 558003;2.贵州省黔南州药品检验所 , 贵州 都匀 558000)
摘要:为研究乌蕨的抗菌活性强度 ,采用二倍平皿稀释法将其与黄连 、黄芩 、穿心莲等抑菌结果进行比较。结果显示:乌
蕨抗菌作用与黄连 、黄芩相近 , 而强于穿心莲。认为乌蕨是一种具有较强抗菌活性的中草药。
关键词:乌蕨;黄连;黄芩;穿心莲;微生物敏感试验;中草药
中图分类号:TQ460.7+2;R914　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-5817(2001)04-0523-02
　　乌蕨(Stenoloma Chusanum(L)Ching), 又名大叶金花草 , 系
鳞始蕨科乌蕨属植物 ,主要分布于我国长江以南各地。民间长
期用其治疗外伤感染 ,据文献报道 ,尚能用于治疗急 、慢性肾盂
肾炎 、菌痢 、肠炎等[ 1 , 2] 。为进一步研究其抗菌作用强度 , 笔者
用多种方法进行提取 , 发现其丙酮浸出物的抗菌活性最强 , 并
将其与黄连 、黄芩 、穿心莲等抗菌中草药进行了抗菌活性比较 ,
现将结果报道如下:
1　材料与方法
1.1　药材　乌蕨采自贵州都匀市马鞍山林场 , 经贵阳医学院
药学系中草药教研室赛明兰副教授鉴定为鳞始蕨科乌蕨属乌
蕨(Stenoloma Chusanum(L) Ching)、黄连(Coptis Chinenisi
F ranch)、黄芩(Scutellaria baicalensis Geo rgi)、穿心莲(Andro-
g raphis paniculate(Bum.f)Ness)由黔南州药检所提供。
1.2　培养基　普通肉汤培养基 、普通肉汤琼脂培养基均为江
苏万石培养基厂出品。
1.3　菌种　伤寒杆菌(H901)、粪链球菌(32222-3)、为贵阳医
学院微生物教研室提供;金黄色葡萄球菌(26003)、绿脓杆菌
(10104)、大肠杆菌(44103)、短小芽胞杆菌(63202)、白色念珠菌
为中国药品生物检定所分发。
1.4　乌蕨 、黄连 、黄芩 、穿心莲水提浸膏与乌蕨丙酮提取浸膏
的制备　将乌蕨 、黄连 、穿心莲分别按常规加水煎煮。黄芩于
水沸后再加入煎煮[ 4] , 过滤 ,滤液水浴蒸发至浸膏状 , 得水提浸
膏。另取乌蕨加丙酮冷浸 3 次 , 合并冷浸液 , 过滤 , 滤液水浴浓
缩得乌蕨丙酮提取浸膏(简称乌蕨丙酮浸膏)。 将上述各浸膏
稀释成 400mg/ ml的供试液。
1.5　最低抑菌浓度(M IC)的测定[ 5 , 6] 　取 12 支无菌试管 , 编
号 ,除第 1 管外 , 各管中均加入无菌普通肉汤培养基 10ml , 然后
于第 1管中加入供试液 20ml , 吸出 10ml加至第 2 管中 , 混匀;
吸出 10ml加至第 3 管中。同法稀释至第 10 管 , 第 11 、12 管分
别作无菌阴性对照及无药阳性对照。吸取以上各管液体 5ml
于灭菌平皿中 ,加入 20ml无菌普通肉汤琼脂培养基 , 混匀 , 放
冷至室温。每管液体作两块平皿。除第 11 管外 , 其余平皿均
分别划分 7 个区域 , 分别接种经 18h 培养 , 浓度为 105CFU/ ml
的菌液 0.01ml , 37℃培养 18h , 观察结果 , 以结果不出现交叉为
准。未见细菌生长的最低浓度为 MIC。
2　结果
2.1　乌蕨水浸膏 、丙酮浸膏的 MIC 比较　乌蕨丙酮浸膏对伤
寒杆菌 、金黄色葡萄球菌 、白色念珠菌 、绿脓杆菌 、粪链球菌 、短
小芽胞杆菌均有明显抑制作用。 并且乌蕨丙酮浸膏的抗菌活
性较乌蕨水浸膏强。结果见表 1。
2.2　乌蕨丙酮浸膏与黄连 、黄芩 、穿心莲水浸膏的 M IC 比较　
乌蕨丙酮浸膏对上述 7 种细菌的作用均强于穿心莲水浸膏。
乌蕨丙酮浸膏对绿脓杆菌的作用强于黄连 、黄芩水浸膏;对金
黄色葡萄球菌 、白色念珠菌的作用与黄芩相近 , 略弱于黄连;对
伤寒杆菌的作用与黄连相近 ,略弱于黄芩;对大肠杆菌 、粪链球
菌 、短小芽胞杆菌的作用弱于黄连 、黄芩。结果见表 2。
表 1　乌蕨水浸膏与丙酮浸膏的 M IC 比较　(mg/ ml)
细菌　　　 乌蕨水浸膏 乌蕨丙酮浸膏
伤寒杆菌 10.00 10.00
金黄色葡萄球菌 10.00 0.63
白色念珠菌 20.00 1.25
绿脓杆菌 20.00 1.25
大肠杆菌 20.00 10.00
粪链球菌 20.00 10.00
短小芽胞杆菌 40.00 20.00
无菌对照 - -
无药对照 + +
表 2　乌蕨丙酮浸膏与黄连 、黄芩 、穿心莲水
浸膏的 MIC 比较　(mg/ml)
细菌　　　 乌蕨丙酮浸膏 黄连水浸膏 黄芩水浸膏 穿心莲水浸膏
伤寒杆菌　　　 10.00 10.00 5.00 40.00
金黄色葡萄球菌 0.63 0.31 0.63 40.00
白色念珠菌　　 1.25 0.63 1.25 40.00
绿脓杆菌　　　 1.25 5.00 10.00 40.00
大肠杆菌　　　 10.00 1.25 5.00 40.00
粪链球菌　　　 10.00 2.50 5.00 40.00
短小芽胞杆菌　 20.00 10.00 10.00 80.00
无菌对照　　　 - - - -
无药对照　　　 + + + +
3　讨论
经实验研究 , 进一步证实乌蕨具有明显的抗菌作用。乌蕨
丙酮浸膏抗菌作用强于其水浸膏 ,说明乌蕨的有效抗菌成分易
溶于丙酮 , 较难溶于水。乌蕨水浸膏和丙酮浸膏对金黄色葡萄
球菌的 MIC 最低 , 作用最强;对绿脓杆菌 、白色念珠菌作用较
强;对伤寒杆菌 、大肠杆菌 、粪链球菌 、短小芽胞杆菌也有一定
抑菌作用。
乌蕨丙酮浸膏的抗菌活性大大强于穿心莲水浸膏 , 与黄
连 、黄芩水浸膏相近 ,尤其对绿脓杆菌作用强于黄连 、黄芩。 在
目前各种病原性微生物普遍对常用抗菌药物产生抗药性 ,亟待
开发新的抗菌药物的情况下 , 如能提取 、分离出乌蕨的抗菌活
性成分 , 并研究其作用机理 ,可望获得有开发价值的新药。
参考文献:
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版社 , 1977:157 ～ 158.
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第 23卷　第 4期　　　　　　　　　右江民族医学院学报 　　　　　　　　　　Vol.23 No.4
2001年 8月　　　　　Journal of Youjiang M edical College fo r Nationalities 　　　　 Aug.2001
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出版社 , 1986:367 ～ 369.
收稿日期:2001-01-18
The antiseptic activity of Stenoloma chusanum(L)Ching and its comparison
to those of Coptis Chinenisis Franch , Scutellaria baicalensis Georgi ,
Andrographis paniculate(Bum.f)Nees
CHEN M ing
1 , DUAN Ping2 , CHEN Jin-xiu2
(1　Department of Pharmacology , Quannan Higher Medical Special ty Col lege for Nat ionali teis
of Guizhou , Duyun , Guizhou 558003 , P .R .China;2　Inst itute of Medicine Inspect ion of
Quannan Prefecture , Duyun , Guizhou 558000 , P.R .China)
　　Abstract:A diploid plate dilution method w as used to evaluate the antiseptic activity intensity of Stenoloma chu-
sanum (L)Ching , and compared to those of Coptis chinensis Franch , Scutellaria baicalensis Geo rgi and Andrographis
paniculate (Bum .f)nees.Results show ed that the antiseptic function of Stenoloma Chusanum (L)Ching w as nearly
the same as those of Coptis Chinensis Franch and Scutellaria baicalensis Georgi , and was stronger than that of Andro-
g raphis paniculate(Bum.f)Nees.This study indicated that Stenoloma Chusanum (L)Ching w as a st ronger antisep-
tic type of Traditional Chinese Medicine.
Key words:Stenoloma chusanum (L)Ching ;Coptis Chinensis Franch;Scutellaria baicalensis Georg i;An-
dropraphis paniculate(Bum.f)Nees;microbial sensitivity tests;t raditional chinese medicine
-80℃冰箱降温-液氮冻存脐血造血干细胞①
钟卫一1 ,宁自觉2 ,牛威林2
(1 广西壮族自治区民族医院 ,广西 南宁 530001;2 广西医科大学第一附属医院 , 广西 南宁 530001)
摘要:为脐血造血干细胞(CBHSC)的冻存建立简便有效的方法 ,采用 5%二甲基亚砜(DMSO)加 6%羟乙基淀粉(HES)为
冷冻保护剂 ,不用程控降温装置 , 直接置 CBHSC 于-80℃冰箱中降温 , 次日移至液氮液中保存 1 周 、1 个月 、3 个月 、6 个
月。结果冻存 6 个月后 ,单个核细胞(MNC)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)和 CD+34细胞的回收率及 MNC 的台盼蓝拒
染率分别为 90.5±1.7%, 87.6±19.5%, 91.9±2.9%, 75.8±1.8%。认为这一简便的方法能很好地保存 CBHSC 的造血
潜能 ,因此它能为脐血移植冻存 CBHSC。
关键词:脐血造血干细胞;低温保存;二甲基亚砜;羟乙基淀粉
中图分类号:R457.7　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-5817(2001)04-0524-03
　　脐血造血干细胞(CBHSC)的冷冻保存是脐血移植工程中
的重要环节之一 , 使用 10%二甲基亚砜(DMSO)为 CBHSC 冷
冻保护剂 ,程控降温-液氮保存是采用多年行之有效的标准方
法。但其成本昂贵 , 操作复杂 , 难以普及。本试验采用-80℃
冰箱降温-液氮冻存 CBHSC , 取得了满意结果 , 现报道如下:
1　材料和方法
1.1　主要试剂及材料　冷冻保护剂 CP-1 溶液(日本极东制
药工业株式会社), 正常人血清白蛋白(卫生部上海生物制品研
究所), 淋巴细胞分离液(上海试剂三厂), Methocult TMGF
H4534 (Stem cell T echnologies Inc , Canada), RPMI 1640 培养基
(GIBCO , USA), 低温冷冻管(CREINER, Germany),含 ACD-B
的采血袋(上海血液中心)。
1.2　脐血样本的来源　脐血样本由广西医科大学一附院产科
提供。收集对象为无急 、慢性感染及血液系统疾患的非高危妊
娠产妇 , 且其新生儿为足月顺产 , 出生后皮肤红润 , 无感染征
象。采集方法:新生儿娩出后 , 立即断脐 , 消毒脐带侧 , 行脐静
脉套管插管 , 脐带血借宫缩力及位差重力作用流入血袋内(内
含 ACD-B 液 50ml), 摇动混匀 ,直至无脐血流出为止。
1.3　脐血单个核细胞(MNC)的制备　ACD-B 液抗凝的脐血
用 RPMI 1640 培养液等倍稀释后 , 置淋巴细胞分离液(1.077g/
ml)的液面上 ,以 2500r/ min 离心 30min , 弃上清液 ,吸取界面层
白细胞 , 用 RPMI 1640 培养液洗涤两次后 , 加入含 10%AB 型
血清的 RPMI 1640 培养液 , 制成所需浓度的 MNC悬液。
1.4　脐血 MNC 的冷冻保存及融冻
1.4.1　冷冻保护液的制备　脐血冻存时临时配制冷冻保护
液 , 方法是:先将人血清白蛋白(Alb , 粉剂)加入生理盐水 , 制成
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2001年　　　　　　　　　　　　　右江民族医学院学报　　　　　　　　　　　　　　第 4期
① 基金项目:广西壮族自治区教育厅自然科学基金(96048)资助