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中
药
研
究
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三黄泡腾片纯化工艺考察
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★ 郭慧玲＊＊ 向竹枝 谢颖 胡律江 金鑫 赵晓娟 (江西中医学院 南昌 330006)
摘要:目的:考察三黄泡腾片的纯化工艺，筛选最佳纯化方法。方法:采用大孔树脂吸附法、壳聚糖澄清剂法、水提醇沉法及酸
碱法等纯化方法，以有效成份大黄素、大黄酸、小檗碱、黄芩苷的含量和浸膏得率为指标，分别考察并优化大黄、黄连、黄芩药
材提取液的不同纯化工艺。结果:大黄采用 D101 大孔树脂法，黄连采用酸沉后调 pH至 5，黄芩采用酸沉法分别进行纯化处理
效果较好。结论:所优选的纯化工艺能有效的确保主要成分的含量且浸膏得率相对较低，有利于三黄泡腾片等系列制剂的研
究。
关键词:泡腾片;大黄;黄连;黄芩;纯化
中图分类号:R 284． 2 文献标识码:A
三黄泻心汤出自汉代张仲景的《金匾要略》，由
大黄、黄连、黄芩三味中药组成。具有清热燥湿、泻
火解毒、除痞止血的功效。现代药理研究证明三黄
汤具有良好的抗菌、解热、抗炎、止血、通便及一定的
改善微循环障碍的作用［1］。为改善传统汤剂存在
服用不方便，稳定性差，口味欠佳等缺点，选择三黄
泡腾片进行研究。本文主要探讨大黄、黄芩、黄连三
味中药提取液的纯化工艺，以主要有效成分的含量
和浸膏得率为指标，比较大孔树脂吸附法、壳聚糖澄
清剂法、水提醇沉法及酸碱法等纯化方法，并进行工
艺优化，为泡腾片制剂工艺研究奠定基础。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
Dionex Ultimate 3000 型高效液相色谱仪，Dia-
monsil C18 柱 (4． 6 mm × 250 mm，5 μm，迪马公
司) ，U752 紫外可见分光光度计(上海欣荣仪器有
限公司) ，旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ，超声
清洗器(昆山超声仪器有限公司) ，真空干燥箱(上
海博迅实业有限公司) ，ZNHW 型电热套(巩义市予
华有限公司制造) ，离心机(上海手术机械制造厂)
1． 2 材料
大黄(蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmatum L．，
购自江西汇仁药业有限公司) ;黄连(毛茛科植物黄
连 Coptis chinensis Franch 的根茎，购自江西汇仁药
业有限公司) ;黄芩(唇形科植物黄芩 Scutellaria ba-
icalensis Georgi的根，购自江西汇仁药业有限公司) ;
大黄素(中国药品生物制品鉴定所 批号 110756-
200110)、大黄酸(中国药品生物制品鉴定所 批号
110757-200026)、黄芩苷(中国药品生物制品鉴定所
批号 110715-200815)、小檗碱对照品(中国药品生
物制品鉴定所 批号 110713-200910) ，去离子双蒸水
(实验室自制) ，甲醇(色谱纯) ，其它试剂均为分析
纯。
2 方法和结果
2． 1 大黄纯化工艺考察
2． 1． 1 大黄药材的提取［3］ 称取大黄药材 200 g，
加水煎煮二次，第一次加水 10 倍量，煎煮 1． 5 小时，
第二次加水 8 倍量，煎煮 1 小时。滤过，滤液浓缩至
适量，放冷，转移至 1000 mL 容量瓶中，加水稀释至
刻度，摇匀，即得。
2． 1． 2 纯化工艺考察 参考文献［2］［3］选择醇沉
法、大孔树脂吸附法、酸碱沉淀法进行实验比较。
(1)醇沉法样品制备。一次醇沉:取大黄提取
液 100 mL，共 3 份，每份相当生药 20g，加乙醇至含
醇量分别为 50%、60%、70%。冷藏过夜，抽滤，回
收乙醇，滤液定容到 100 mL，即得。
二次醇沉:取一次醇沉液 50 mL，，加乙醇至含
醇量分别为 50、60、70%。冷藏过夜，抽滤，回收乙
醇，滤液定容到 50 mL，即得。
(2)大孔树脂吸附法样品制备［2］。取 D101 树
脂 8g，乙醇浸泡 24h，抽滤，用蒸馏水冲洗，湿法装柱
(30 cm，Φ1． 0 cm) ，以蒸馏水冲洗至无乙醇味。取
大黄提取液 20 mL(相当于生药 4 g)上样。流速控
制在 1 ～ 2 mL /分钟，用蒸馏水洗至无色，再用 70%
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江西中医药 2011 年 4 月第 4 期总 42 卷第 340 期
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基金项目:江西省中医药管理局中药研究重点课题(2010Z01)
通讯作者:郭慧玲，女，教授，硕士生导师，研究方向:中药新剂型与新技术。
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乙醇溶液洗脱至无色。收集滤液并回收乙醇，滤液
加甲醇定容到 50 mL，即得。
(3)酸碱沉淀法样品制备［2］。取大黄提取液
100 mL，用盐酸调 pH 至 2 ～ 3，40℃水浴 30 分钟，
置 4℃冰箱放置过夜，3500 rpm /分钟 离心 5 分钟，
弃上清液，将沉淀加甲醇溶解并定容至 100 mL，即
得。
2． 1． 3 大黄素、大黄酸的含量测定 (1)色谱条
件。照高效液相色谱法(中国药典 2005 年版一部附
录 VID)测定。色谱柱:Diamon silC18 柱 (4． 6 mm
×250 mm，5μm，迪马公司) ，流动相:甲醇-0． 1%磷
酸溶液(85:15) ，流速:1mL /mim，检测波长:254nm，
进样量:20μl;柱温:25℃。
(2)标准曲线的制备。精密称取大黄酸对照品
4． 24 mg、大黄素对照品 4． 50 mg，分别用甲醇溶解
并定容至 50 mL，摇匀，制成每 1 mL 含大黄酸 84． 8
mg、大黄素 90． 0 mg 的对照品溶液。分别精密吸取
上述配好的对照品溶液 0． 1、0． 5、1． 0、2． 0、4． 0、8． 0
mL，置 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，再
用 0． 22 μm 的微孔滤膜过滤，分别取 20 μl 进样测
定，以对照品的进样量 X(μg)为横坐标，以峰面积
对应值 Y为纵坐标，进行线性回归处理得大黄酸的
回归方程为:Y = 114． 97X + 0． 0578，r = 0． 999 9，在
0． 0169 ～ 1． 3568 μg范围内与峰面积呈良好的线性
关系。
大黄素的回归方程为:Y = 154． 19X － 0． 1404，r
= 0． 999 9，在 0． 018 ～ 1． 44 μg范围内与峰面积呈良
好的线性关系。
(3)供试品溶液的制备。精密量取上述各样品
溶液 2． 0 mL，置 50 mL锥形瓶中，水浴蒸干水分，精
密加入甲醇 25 mL，称定重量，超声 30 分钟，放冷，
再称定重量，用甲醇补足减少重量，摇匀，滤过，精密
量取续滤液 5． 0 mL，置 50 mL锥形瓶中，挥干甲醇，
加 8%稀盐酸溶液 10 mL，超声处理 2 分钟，再加三
氯甲烷 10 mL，加热回流 1 小时，冷却，移至分液漏
斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，
分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷振摇提取 3 次，
每次 10 mL，合并三氯甲烷液，置蒸发皿中，水浴蒸
干，残渣加甲醇溶解并转移至 10 mL容量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，用 0． 45μm 微孔滤膜滤过，取续滤
液。
2． 2 黄连纯化工艺考察
2． 2． 1 黄连药材的提取［3］ 称取黄连药材 200 g，
加水煎煮二次，第一次加水 12 倍量，煎煮 2 小时，第
二次加水 10 倍量，煎煮 1 小时，滤过，滤液浓缩至适
量，放冷，转移至 1000 mL量瓶中，加水稀释至刻度，
摇匀，即得。
2． 2． 2 纯化工艺考察 比较醇沉法、酸沉法对盐酸
小檗碱含量和浸膏得率的影响。
(1)醇沉法。取黄连提取液 100 mL，3 份，每份
相当生药 20 g。加乙醇至含醇量分别为 50%、
60%、70%。冷藏过夜，抽滤，回收乙醇，滤液定容到
100 mL，即得。
(2)酸沉法［3 － 4］。为考察不同 pH 对盐酸小檗
碱的影响，选择 pH2、pH5 以及不调 pH 三种情况进
行对比，方法:取黄连提取液 300 mL，相当生药 60
g。浓缩至 60 mL(1 g /mL) ，放冷。加盐酸调 pH 值
至 1 ～ 2，同时加入溶液量 8% ～ 10% (w /v)的氯化
钠，放置 4 小时，滤过，将沉淀分成 3 份，1 份直接
60℃真空干燥，另 2 份分别将沉淀调 pH2 和 pH5，再
60℃真空干燥，粉碎，即得。
2． 2． 3 黄连有效成份的含量测定 (1)UV 标准曲
线的制备。精密称取小檗碱标准品 5 mg，用甲醇溶
解并定溶到 100 mL，制成含小檗碱 0． 05 mg /mL 的
标准溶液。分别精密吸取标准液 0． 4，0． 6，0． 8，1．
0，1． 2 mL 于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至 10
mL，充分摇匀后于 345 nm 处测定吸收度。以吸收
度为横坐标 X，对照品浓度为纵坐标 Y 绘制标准曲
线，经回归处理，回归方程为:Y = 0． 009 1X － 4 ×
10 －5，r = 0． 999 7。盐酸小檗碱的浓度在 2 ～ 6 μg /
mL的范围内线性关系良好。
(2)供试品溶液的制备。精密量取醇沉样品溶
液 0． 1 mL，置 10 mL容量瓶中，加入甲醇∶盐酸(100
∶ 1)10 mL，超声 30 分钟，放冷，加甲醇 ∶ 盐酸(100 ∶
1)稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 0． 5
mL，置 10 mL容量瓶中，加甲醇∶ 盐酸(100∶ 1)至刻
度，摇匀。以 1%盐酸甲醇液为空白对照，于 345 nm
波长处测定吸收度，结果如表 2。
精密称取酸沉干燥品 0． 01 g，置 10 mL 容量瓶
中，加入甲醇∶盐酸(100∶ 1)10 mL，超声 30 分钟，放
冷，加甲醇∶盐酸(100 ∶ 1)稀释至刻度，摇匀，滤过，
精密量取续滤液 0． 1 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲
醇∶盐酸(100∶ 1)至刻度，摇匀。以 1%盐酸甲醇液
为空白对照，于 345 nm 波长处测定吸收度，结果如
表 2。
2． 3 黄芩纯化工艺考察
2． 3． 1 黄芩药材的提取［3］ 称取黄芩药材 200 g，
加水煎煮二次，每次 1 小时，第一次加水 12 倍量，第
二次加水 10 倍量。滤过，滤液浓缩至适量，放冷，转
移至 1000 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
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JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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究
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2． 3． 2 黄芩纯化工艺考察 比较醇沉法、酸沉法及
壳聚糖吸附法对有效成分黄芩苷和浸膏得率的影
响。
(1)醇沉法。取黄芩提取液 100 mL，3 份，每份
相当于生药 20 g，加乙醇至含醇量分别为 50%、
60%、70%。冷藏过夜，抽滤，回收乙醇，滤液定容至
100 mL，即得。
(2)酸沉法［3］。取黄芩提取液 100mL，用盐酸
调 pH值至 1 ～ 2，加热至 80℃并保温 30 分钟，滤过，
沉淀加适量水洗涤一次，滤过，取沉淀，60℃真空干
燥，粉碎，称重，即得。
(3)壳聚糖处理［5］。取黄芩提取液 100 mL，体
系在 40℃条件下调节 pH至 5，加入用 1%的乙酸为
溶剂配制的 0． 5%的壳聚糖溶液 25 mL，并搅拌 10
分钟，静置过夜，4000 rpm /分钟 离心 10 分钟，取上
清液，水浴加热至 40℃，用稀盐酸调 pH至 1． 5，40℃
恒温 1h，静置过夜，倾去上清液，沉淀水洗至 pH6，
滤过，取沉淀，60℃真空干燥，粉碎，称重，即得。
2． 3． 3 有效成份的含量测定 (1)色谱条件。照
高效液相色谱法(中国药典 2005 年版一部附录 V
工 D)测定。色谱柱:Diam onsil C18 柱 (4． 6 mm ×
250 mm，5μm，迪马公司) ，流动相:甲醇-0． 2%磷酸
溶液(55:45) ，流速:1 mL /mim，检测波长:280nm，
进样量:20μl:柱温:25℃。
(2)标准曲线的制备。精密称取黄芩苷对照品
5． 24 mg，用甲醇溶解并定容至 50 mL，摇匀，即制成
每 1 mL含 104． 8 mg的对照品溶液。分别精密吸取
上述配好的对照品溶液 0． 1、0． 5、1． 0、2． 0、4． 0、8． 0
mL，置 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，再
用 0． 22μm 的微孔滤膜过滤，分别取 20μl 进样测
定，以对照品的进样量 X(μg)为横坐标，以峰面积
对应值 Y为纵坐标，进行线性回归处理。其回归方
程、相关系数及线性范围分别为:
回归方程为:Y = 113． 46X － 0． 9702，r = 0． 999
9，在 0． 020 9 ～ 1． 676 8μg 范围内与峰面积呈良好
的线性关系。
(3)供试品溶液的制备。醇沉法供试品制备:
精密量取醇沉法处理的上述样品溶液 10 mL，置
50mL容量瓶中，加 50%甲醇约 40 mL，超声 30 分
钟，放冷，用 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密
量取续滤液 0． 2 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇至
刻度，摇匀，用 0． 45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，
即得。
酸沉和壳聚糖处理样品的制备:精密称定上述
酸沉法和壳聚糖法处理的样品各 0． 1 g，分别置 50
mL量瓶中，加 50%甲醇约 40 mL，超声处理 30 分
钟，放冷，加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取
各 0． 2 mL 分别置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至
刻度，摇匀，用 0． 45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，
即得。
2． 4 结果与讨论
2． 4． 1 结果 大黄、黄连、黄芩药材提取液的不同
纯化工艺考察实验结果如表 1、表 2、表 3。
表 1 不同纯化方法对大黄中有效成份含量的影响(n = 5)
样品 大黄酸平均峰面积
大黄酸含
量 /mg·g － 1
大黄酸转
移率 /%
大黄素平
均峰面积
大黄素含
量 /mg·g － 1
大黄素转
移率 /%
浸膏得率
/%
提取物 22． 21 1． 2043 4． 65 0． 1943 42． 00
树脂处理 20． 95 1． 1358 94． 31 4． 38 0． 1834 94． 41 8． 98
沉淀法 8． 69 0． 4691 38． 95 1． 59 0． 0701 36． 10 1． 13
50%一次 21． 79 1． 1816 98． 11 3． 82 0． 1606 82． 68 26． 44
50%二次 15． 37 0． 8323 69． 11 2． 41 0． 1035 53． 28 26． 51
60%一次 18． 99 1． 0290 85． 44 3． 08 0． 1304 67． 12 34． 36
60%二次 18． 41 0． 9979 82． 86 2． 39 0． 1024 52． 73 29． 60
70%一次 19． 02 1． 0310 85． 61 2． 74 0． 1156 60． 01 32． 58
70%二次 17． 08 0． 9253 76． 83 2． 29 0． 0986 50． 75 29． 27
表 2 不同纯化方法对黄连中小檗碱含量的影响(n = 3)
样品 平均吸光度
小檗碱含量
/mg·g － 1
转移率
/%
浸膏得率
/%
提取 0． 680 61． 48 0 26． 48
酸沉 0． 437 57． 22 93． 07 17． 44
酸沉 pH5 0． 615 49． 29 80． 17 9． 14
酸沉 PH2 0． 798 37． 96 61． 74 6． 48
50%醇沉 0． 600 54． 2 88． 16 20． 28
60%醇沉 0． 579 52． 289 85． 05 19． 62
70%醇沉 0，628 56． 748 92． 30 19． 78
表 3 不同纯化方法对黄芩中黄芩苷含量的影响(n = 5)
样品 黄芩苷平均峰面积
黄芩苷含量
/mg·g － 1
转移率
/%
浸膏得率
/%
提取 38． 157 27． 88 38． 55
酸沉 31． 7875 23． 83 85． 47 5． 17
壳聚糖处理 24． 7665 5． 99 21． 48 1． 62
50%醇沉 33． 063 24． 16 86． 65 33． 89
60%醇沉 32． 641 23． 85 85． 54 32． 59
70%醇沉 31． 588 23． 08 82． 78 34． 19
2． 4． 2 讨论 纯化工艺的优选，必须在能有效的保
留主要成分的含量的前提下，综合考虑降低浸膏得
率以利于制剂研究。因此，综合上述实验结果可知:
大黄采用大孔树脂法、黄连采用酸沉后调 pH 至 5、
黄芩采用酸沉法分别进行纯化处理，既能保证有效
成份转移率高，还能降低浸膏得率。所优选的纯化
工艺有利于制剂工艺研究。
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(收稿日期:2011-02-14)
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江西中医药 2011 年 4 月第 4 期总 42 卷第 340 期