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HPLC法同时测定不同品种溪黄草中
3 种三萜类成分的含量
吴泽青1，帅 欧1，林 励1，* ，邱戊盛2，欧先涛2，吴攀创2
(1.广州中医药大学中药学院，广东广州 510006;
2.广东万年青制药有限公司，广东汕头 515064)
摘 要:目的:建立同时测定溪黄草中科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸含量的高效液相色谱法。方法:采用 Synergi 4u
Fusion RP 80A C18(250mm ×4.6mm，5μm，Phenomenex company)色谱柱;流动相:甲醇(A)－0.2%磷酸水(B) (V∶V =
9∶1) ;等度洗脱;流速:0.6mL·min －1;检测波长:210nm;柱温 30℃。结果:科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸分别在 0.111～
1.111mg /mL(r = 0.9999)、0.026～0.256mg /mL(r = 0.9999)、0.307～3.067mg /mL(r = 0.9999)范围内线性关系良好，平均回
收率分别为 97.72%、97.08%和 97.46%(n = 6) ，RSD 分别为 1.24%、1.62%和 1.25%。结论:本法快速、简便、准确，重
复性好，可用于溪黄草 3 种主要成分定量分析和质量控制。
关键词:溪黄草，三萜，高效液相色谱法，测定
HPLC simultaneous determination of three triperpenoids
components in Linearstripe Rabdosia Herb from different species
WU Ze－qing1，SHUAI Ou1，LIN Li1，* ，QIU Wu－sheng2，OU Xian－tao2，WU Pan－chuang2
(1.School of Chinese Materia Medica，Guangzhou University of Chinese Medcine，Guangzhou 510006，China;
2.Guangdong Enterlife Pharmacy Company Limited，Shantou 515064，China)
Abstract:Objective:To establish an HPLC method for simultaneous determination of 2α－ hydroxy－ ursolic acid，
oleanolic acid and ursolic acid in Linearstripe Rabdosia Herb from different species.Methods:The HPLC system
consisting of Synergi 4u Fusion RP 80A C18 column(250mm × 4.6mm，5μm，Phenomenex company)and a solution
system of methanol－phosphoric acid(V∶V = 9∶1)as the mobile phase with isocratic elution was adopted.The flow
rate was set at 0.6mL·min － 1，the detection wavelength was 210nm and the column temperature was 30℃.Results:
The linear ranges of 2α－hydroxy－ursolic acid，oleanolic acid and ursolic acid were 0.111～1.111mg /mL(r = 0.9999) ，
0.026～ 0.256mg /mL(r = 0.9999) ，0.307～3.067mg /mL(r = 0.9999)respectively.Conclusion:The average recoveries(n
= 6)were 97.72%(RSD = 1.24%) ，97.08%(RSD = 1.62%) ，97.46%(RSD = 1.25%)respectively.The method was
quick，simple and accurate with good reproducibility and could be used for determination and quality control of the
three main components in Linearstripe Rabdosia Herb.
Key words:Linearstripe Rabdosia Herb;triperpenoids;HPLC;determination
中图分类号:TS218 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2012)21－0296－04
收稿日期:2012－04－23 * 通讯联系人
作者简介:吴泽青(1988－) ，女，硕士研究生，研究方向:中药资源开发
与新药研究。
中药溪黄草为民间习用草药，用于治疗湿热泻
痢，跌打瘀肿，急性黄疸型肝炎，急性胆囊炎等疾
病［1］，临床使用广泛。溪黄草具有保肝抗癌等作用，
溪黄草中的科罗索酸和 2α，19－二羟基熊果酸具有
体外抗乙肝病毒的作用，熊果酸类成分具有显著的
抑制乙肝病毒作用［2－4］。溪黄草为岭南特色药材，在
广东各地临床应用普遍，并出现以之为主要原料的
保健产品，如溪黄草茶、溪黄草颗粒等，溪黄草在保
健品开发方面具有较大潜力，但尚无较全面的相关
质量标准对其药材及产品进行规范。目前市场上作
“溪黄草”入药的原植物有线纹香茶菜 Rabdosia
Iophan－ thoides(Buch.－Ham ex D.Don)Hara.及同属植
物狭基线纹香茶菜 R. lophanthoides var. gerardiana
(Benth.)Hara.、纤花香茶菜 R. lophanthoides var.
graciliflora(Benth.)Hara.和溪黄草 R. serra(Maxim.)
Hara.或 R. lasiocarpa(Hayata)Hara.［5－6］。溪黄草含萜
类、黄酮类、酚类、氨基酸等多种化学成分。目前对
于溪黄草中三萜类成分含量测定的文献多集中在齐
墩果酸［7］、熊果酸［8］、科罗索酸［9－10］等成分。尚未见
同时测定四种不同基源的溪黄草多种三萜类成分含
量的文献报道，本工作采用高效液相色谱法(HPLC)
对四种不同基源溪黄草三萜类成分含量进行研究，
为进一步提高溪黄草药材的质量标准研究水平提供
科学依据。
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2012.21.007
297
表 1 线性关系考察结果
Table 1 Results of linear relationship
对照品 回归方程 r 线性范围(mg·mL －1)
科罗索酸 Y =7.224 × 106X － 1.817 × 104 0.9999 0.111～1.111
齐墩果酸 Y =2.035 × 106X － 2.129 × 104 0.9999 0.026～0.256
熊果酸 Y =6.447 × 106X － 3.731 × 104 0.9999 0.307～3.067
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
溪黄草药材 由广东万年青制药有限公司提
供，并经广州中医药大学中药学院林励研究员鉴定
为线纹香茶菜 Rabdosia Iophanthoides(Buch.－Ham ex
D.Don)Hara.、狭基线纹香茶菜 Rabdosia lophanthoides
var.gerardiana(Benth.)Hara.、纤花香茶菜 Rabdosia
lophanthoides var. graciliflora(Benth.)Hara.和溪黄草
Rabdosia serra(Maxim.)Hara.;齐墩果酸、科罗索酸、
熊果酸对照品 购自曼思特生物科技有限公司，批
号分别为:MUST－09071701、MUST－10021301、MUST
－10111201，纯度≥98%;乙腈 色谱纯，默克公司;
磷酸 天津科密欧化学试剂厂，优级纯;甲醇、氯仿、
盐酸 广州化学试剂厂，分析纯;水为超纯水;微孔
滤膜 天津津腾公司。
Waters e2695 一体机、Waters 2998 PDA 检测器
Waters公司;8002 型电热恒温水浴锅 上海市精
慧仪器公司;XS 225A 型分析天平 Sartorius 公司;
DFT－200 型手提式高速万能粉碎机 温岭市林大机
械有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱为 Synergi 4u Fusion RP
80A C18 (250mm × 4.6mm，5μm， Phenomenex
company) ;流动相:甲醇(A)－0.2%磷酸水(B) (V∶V
= 9∶1) ;流速 0.6mL·min －1;检测波长:210nm;柱温:
30℃;进样量:10μL。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干
燥 24h 以上的科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸对照品
适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每 1mL
分别含科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸 111.11、25.56、
306.67μg的混合对照品溶液。
1.2.3 供试品溶液的制备 取溪黄草药材适量，粉
碎，过二号筛，精密称取 4.0g，置 150mL 圆底烧瓶中，
精密加入氯仿 100mL，称定重量，回流提取 1h，过滤，
取滤液真空浓缩，残渣用甲醇分次溶解并转移至
10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.45μm微
孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
1.2.4 系统适用性实验 分别吸取对照品溶液、供试
品溶液各 10μL，注入色谱仪，按上述色谱条件测定。
在此条件下科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸峰与样品中
其它成分峰均能达到基线分离。三成分与相邻色谱峰
之间的分离度均大于 1.5，理论塔板数均大于 3000。
2 结果与分析
2.1 HPLC色谱图
四种溪黄草 HPLC色谱图如图 1 所示。
2.2 标准曲线的制备
图 1 四种溪黄草 HPLC色谱图
Fig.1 Chromatograms of four kinds
of Linearstripe Rabdosia Herb
注:A:对照品 HPLC色谱图，1.科罗索酸，
2.齐墩果酸，3.熊果酸;B:线纹香茶菜 HPLC色谱图;
C:纤花香茶菜 HPLC色谱图;D:狭基线纹香茶菜
HPLC色谱图;E:溪黄草 HPLC色谱图。
精密吸取混合对照品溶液 2、6、10、12、16、20mL，
分别置 10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密
吸取 10μL，按 1.2.1的色谱条件进样分析，以各自的峰
面积积分值 Y 为纵坐标，浓度 X(mg·mL －1)为横坐
标，绘制标准曲线，其回归方程及线性范围见表 1。
2.3 精密度实验
在上述色谱条件下，精密吸取混合对照品溶液
连续测定 6 次，进样量为 10μL，测定峰面积，结果见
表 2，科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸峰面积 RSD 分别
为 1.52%、1.17%、0.75%，表明精密度良好。
2.4 重复性实验
精密称取同一样品(狭基线纹香茶菜 1 批)6 份，
按 1.2.3 的方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，
测得溪黄草样品中科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸峰
面积 RSD分别为 0.75%、1.22%、0.90%，结果表明方
法重现性良好，见表 3。
2.5 稳定性实验
在上述色谱条件下，取同一样品(狭基线纹香茶
菜 1 批) ，分别于 0、2、4、6、12、24h 测定，测得溪黄草
药材样品中科罗索酸、齐墩果酸及熊果酸峰面积
RSD分为 1.27%、1.54%、1.36%。结果表明样品在
24h内稳定，见表 4。
2.6 加样回收率实验
取同一批已知科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸含量
的供试品(科罗索酸含量 0.3820mg /g，齐墩果酸含量
0.0993mg /g，熊果酸含量 1.1582mg /g) ，平行 6 份，每
份取样量约 2g，精密称定。按当前取样含量约 1 ∶1
精密加入科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸对照品，照
1.2.3 的方法制备供试品溶液。进样测定，计算回收
率，结果见表 5～表 7，科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸平均
回收率分别为 97.72%、97.08%、97.46%，RSD 分别为
298
表 2 精密度实验结果
Table 2 Results of precision test
1 2 3 4 5 6 珚X RSD(%)
科罗索酸 786599 786597 786598 786597 786601 786599 786598 1.52
齐墩果酸 210011 210010 210008 210009 210011 210010 210009 1.17
熊果酸 684060 684059 684061 684059 684060 684060 684059 0.75
表 3 重复性实验结果
Table 3 Results of repeated test
1 2 3 4 5 6 珚X RSD(%)
科罗索酸 1050390 1050389 1050390 1050391 1050389 1050389 1050390 1.52
齐墩果酸 58443 58443 58440 58441 58444 58443 58442 1.49
熊果酸 2956677 2956675 2956677 2956680 2956676 2956675 2956677 1.86
表 4 稳定性实验结果
Table 4 Results of stability test
0 2 4 6 12 24 珚X RSD(%)
科罗索酸 1050390 1050390 1050389 1050389 1050389 1050388 1050389 0.75
齐墩果酸 58443 58443 58442 58441 58441 58440 58441 1.22
熊果酸 2956677 2956676 2956677 2956678 2956676 2956678 2956677 0.90
表 5 科罗索酸加样回收实验结果
Table 5 Results of the recovery test of Corosolic acid
批号
取样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 2.0005 0.7640 0.75 1.4842 96.03
2 2.0004 0.7640 0.75 1.4885 96.60
3 2.0001 0.7640 0.75 1.5029 98.52 97.72 1.24
4 2.0007 0.7640 0.75 1.5057 98.89
5 2.0002 0.7640 0.75 1.4954 97.52
6 2.0009 0.7640 0.75 1.5048 98.77
表 6 齐墩果酸加样回收实验结果
Table 6 Results of the recovery test of Oleanolic acid
批号
取样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 2.0005 0.1986 0.20 0.3954 98.40
2 2.0004 0.1986 0.20 0.3895 95.45
3 2.0001 0.1986 0.20 0.3912 96.30 97.08 1.62
4 2.0007 0.1986 0.20 0.3977 99.55
5 2.0002 0.1986 0.20 0.3906 96.00
6 2.0009 0.1986 0.20 0.3922 96.80
表 7 熊果酸加样回收实验结果
Table 7 Results of the recovery test of Ursolic acid
批号
取样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 2.0005 2.3164 2.25 4.5191 97.90
2 2.0004 2.3164 2.25 4.4861 96.43
3 2.0001 2.3164 2.25 4.4995 97.03 97.46 1.25
4 2.0007 2.3164 2.25 4.5243 98.13
5 2.0002 2.3164 2.25 4.4756 95.96
6 2.0009 2.3164 2.25 4.5191 97.90
1.24%、1.62%、1.25%。表明方法的准确度较好。
2.7 样品含量测定
分别取待测样品，按 1.2.3 的方法制备供试品溶
液，在 1.2.1 色谱条件下，进行样品含量测定，结果见
表 8。
3 结论
本法快速、简便、准确，重复性好，可用于溪黄草
药材 3 种主要成分定量分析和质量控制。不同基源
的溪黄草药材科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸含量有
所不同。四种药材中科罗索酸含量由高到低顺序排
列分别为溪黄草、线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜及纤
花香茶菜;齐墩果酸含量由高到低顺序排列分别为
溪黄草、线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜及纤花香茶
299
表 8 四种溪黄草含量测定结果
Table 8 Results of contents of Linearstripe Rabdosia Herb
品种
科罗索酸含量
(mg·g －1)
齐墩果酸含量
(mg·g －1)
熊果酸含量
(mg·g －1)
线纹香茶菜
平均含量 0.4401 0.1442 0.6861
RSD(%) 1.52 4.99 3.51
纤花香茶菜
平均含量 0.3379 0.0733 0.9397
RSD(%) 3.25 4.86 1.53
狭基线纹香茶菜
平均含量 0.3722 0.0981 1.1617
RSD(%) 4.83 4.25 3.11
溪黄草
平均含量 0.6135 0.2026 0.6628
RSD(%) 1.90 4.37 2.97
菜;熊果酸含量由高到低顺序排列分别为狭基线纹
香茶菜、纤花香茶菜、线纹香茶菜及溪黄草。
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318－321.
(上接第 285 页)
5min时复合膜的性能最好，此时复合膜的抗拉强度
达 91.45MPa，水溶性为 7.28%，水蒸气透过率为 0.68
×10 －10 g /(Pa·s·m2) ，复合与离子交联作用有效地
改善了单一膜机械性能不足，抗水性差的问题。
SEM、FT－ IR、XRD 和 DSC 结果表明，壳聚糖与结冷
胶并不是单纯的叠加，而是在界面产生了较强的相
互作用力;柠檬酸钠和氯化钙能对复合膜产生交联
作用，增强复合膜分子间的相互作用力，从而提高复
合膜的稳定性。
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