全 文 ：栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 阅则怎早 砸藻泽藻葬则糟澡 驭 悦造蚤灶蚤糟葬造 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠，圆园15 January，灾燥造援 26 晕燥援 1
平均含量为 14.31 mg，以平均含量的 80 %作为含量
下限，则规定每粒胶囊中 6-姜酚含量不低于 11.45 mg。
3 讨论
在对制剂中陈皮进行 TLC鉴别研究时发现，以
陈皮药材和陈皮挥发油为阳性对照，分别采用石油醚
-乙醚、石油醚 -乙酸乙酯、石油醚 -乙醚 -乙酸乙
酯等为展开系统，采用 5 %香草醛硫酸溶液加热或碘
缸中显色，均未发现制剂中陈皮的特征性斑点。
在 6-姜酚含量测定试验中，曾选用不同比例的
甲醇 -水、乙腈 -甲醇 -水等系统为流动相做了系
统的比较，结果表明，以乙腈 -甲醇 - 水（40∶5∶
55）作为流动相时，6-姜酚的分离度更好，且阴性无
干扰。另外对样品的超声处理时间进行了考察，最终
确定超声 10 min以上即可。另外陈皮药材中的主要
成分如橙皮苷、川陈皮素等在制剂 HPLC色谱图未发
现，这可能与陈皮的提取方法有关。
本实验建立了该制剂的鉴别和含量测定项目。含
量测定项选择干姜的主要有效成分 6-姜酚作为指标
成分，建立了可靠准确、专属性强的测定方法，为本
制剂的质量控制提供了依据。
参考文献：
[1] 李伟荣，赵威，杨蕾，等. 陈皮干姜油对疲劳大鼠血液生化、血气
分析及肌糖元的影响[J]. 中药药理与临床，2010，26（1）：57-59.
[2] 欧立娟，孙晓萍，刘启德，等. 干姜、陈皮提取物对大鼠心肌缺血
的影响[J]. 中药材，2009，32（11）：1723-1726.
[3] 付小六 . HPLC 测定妇炎康片中盐酸小檗碱的含量 [J]. 中成药，
2007，29（2）：298-299.
[4] 徐晓梅，谭本仁，朱兴保，等. 复方叶下珠滴丸质量标准及稳定性
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药与临床药理，2014，25（1）：55-61.
[6] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（Ⅰ部）[M]. 北京：中国医
药科技出版社，2010：70.
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姜酚的含量[J]. 中国药师，2013，16（1）：17-19.
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国药房，2014，25（7）：644-646.
（编辑：邓响潮）
表 1 6-姜酚加样回收率试验结果
Table 1 Results of recovery test of 6-gingerol
序号
1
2
3
4
5
6
称样量
/mg
49.49
51.29
49.54
52.02
51.25
52.40
样品含量
/mg
1.78
1.84
1.78
1.87
1.84
1.88
对照品加
入量 /mg
1.578
1.578
1.578
1.578
1.578
1.578
实测量
/mg
3.378
3.454
3.362
3.428
3.428
3.572
回收率
/％
100.60
101.05
100.12
99.42
100.29
103.30
平均回收率
/%
100.80
RSD/
%
1.33
表 2 每粒陈皮姜软胶囊中 6-姜酚含量测定结果
Table 2 Results of 6-gingerol determinationg
样品批号
20120726
20120728
20120730
平均值
RSD/%
6-姜酚 /%
3.63
3.56
3.55
3.58
1.22
6-姜酚 /mg
14.52
14.22
14.18
14.31
1.30
收稿日期：2014-10-24
作者简介：吴冲，女，硕士研究生，研究方向：中药与天然药物化学成分及质量评价研究。Email：1021387636@qq.com。通讯作者：林朝展，博
士，副教授，研究方向：中药有效成分及质量评价研究。Email：linchaozhan@sina.com；祝晨蔯，博士，研究员，研究方向：中药与天然药物化学
成分及质量评价和作用机制研究。 Email：976392178@qq.com。
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81173535）。
HPLC法测定溪黄草不同部位中 5个二萜的含量
吴 冲，林朝展，祝晨蔯（广州中医药大学临床药理研究所，广东 广州 510405）
摘要：目的 建立反相高效液相层析（RP-HPLC）法同时测定溪黄草不同部位中 5个对映 -贝壳杉烷型二萜类
延命素[enmein，（1）]，黄花香茶菜甲素[sculponeatin A，（2）]，诺多星[nodosin，（3）]，毛果青茶菜素[isodocarpin，
（4）]和毛栲利素[lasiokaurin，（5）]含量的方法，并进行多批次药材成分分析，为溪黄草质量评价提供依据。方法
采用 Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 滋m），流动相为甲醇 -0.1 %甲酸，梯度洗脱，流速 0.7 mL·min-1，
检测波长 254 nm。结果 5 个二萜的标准曲线及线性范围依次为：（1）Y=5246.4X+13.86（0.075～1.50 滋g，
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中药新药与临床药理 圆园15年 1月第 26卷第 1期
溪黄草[Rabdosia serra（Maxim）Hara]是岭南特色药
材，为唇形科（Labiatae）植物香茶菜（Rabdosia）的干燥
全草[1]，又名黄汁草、手擦黄、熊胆草等。溪黄草具
有清热解毒、活血破瘀、抗菌消炎、抗肿瘤和治疗各
种肝炎等功效[2-4]，在广东各地临床应用普遍，并出
现以之为主要原料的保健产品，如溪黄草茶、溪黄草
颗粒等，溪黄草在保健品开发方面具有较大潜力 [5]，
但尚无较全面的相关质量标准对其药材及产品进行规
范。溪黄草含二萜类、三萜类、黄酮类、酚类、氨基
酸等多种化学成分，已证实香茶菜属所含的贝壳杉烷
型二萜具有抗肿瘤活性 [6-7]，目前香茶菜属已分离鉴
定了 800多个二萜类化合物，对映 - 贝壳杉烷型为
香茶菜属二萜的主要类型，已报道的二萜中约 93 %
属于该类[8-11]。目前对溪黄草含量测定的文献报道多
集中在三萜类成分如熊果酸、齐墩果酸等[12-13]。然而
对其所含成分种类众多、具有抗肿瘤活性作用的二萜
类[14-16]成分的测定，国内外文献报道极少。我们通过
前期系统的化学成分研究，分离纯化了 5 个对映 -
贝壳杉烷型二萜类化合物延命素（enmein），黄花香茶
菜甲素（sculponeatinA），诺多星（nodosin），毛果青茶
菜素（isodocarpin）and 毛栲利素（lasiokaurin），并收集
了广东地区不同产地溪黄草药材，测定这 5个二萜化
合物在茎、叶、全草中的含量，以期为溪黄草质量体
系的建立和完善提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 安捷伦（Agilent）1260 高效液相色谱仪、
G4212B 二极管阵列检测器、G1330B 自动进样器、
G1316A柱温箱、LC-1260色谱工作站，美国安捷伦
公司；MODEL HN1006超声清洗机，中国华南超声
设备厂；旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；
Satorius电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司。
r=0.9999）；（2）Y=4673.4X+78.09（0.121～2.43 滋g，r=0.9999）；（3）Y=3459.4X+22.33（0.372～7.43 滋g，r=1）；（4）
Y=4432.8X+14.71（0.144～2.88 滋g，r=1）；（5）Y=2434.1X+0.69（0.010～1.960 滋g，r=0.9999）。平均加样回收率为
99.14 %～100.7 %，RSD为 0.48 %～2.53 %。结论 经过系统的方法学考察，该法简便，准确，重复性好，可
用于溪黄草药材的质量分析及控制。
关键词：溪黄草；不同部位；对映 -贝壳杉烷型二萜；反相高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）01-0098-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.01.024
Simultaneous Determination of Five Diterpenoids in Different Parts of Herba Rabdosiae Serrae by
Reverse Phase HPLC
WU Chong1，LIN Chaozhan1，ZHU Chenchen1（Institute of Clinical Pharmacology，Guangzhou University of Chinese
Medicine，Guangzhou 510405 Guangdong，China）
Abstract： Objective To develop a reverse phase HPLC method for the simultaneous determination of five
ent-kauranes diterpenoids of enmein（1），sculponeatinA（2），nodosin（3），isodocarpin（4）and lasiokaurin（5）in Herba
Rabdosiae Serrae and to assess their quality. Methods The samples were separated on a Kromasil RP-C18（4.6 mm×
250 mm，5 滋m）column eluted with methanol and 0.1 % formic acid as mobile phase in gradient elution. The flow rate
was 0.7 mL·min-1，and the detection wavelength was set at 254 nm. Results The calibration curves and linear range
of the above five diterpenoids were determined as（1）Y=5246.4X+13.86（0.075~1.50 滋g，r=0.9999），（2）Y=4673.
4X+78.09 （0.121~2.43 滋g， r=0.9999），（3）Y=3459.4X+22.33（0.372~7.43 滋g， r=1），（4）Y=4432.8X+14.71
（0.144~2.88 滋g，r=1），（5）Y=2434.1X+0.69（0.010~1.960 滋g，r=0.9999），respectively. The average recovery of the
analytes were from 99.14 % to 100.7 % and the RSD values were from 0.48 % to 2.53 %. Conclusion The method is
simple，accurate and repeatable，and can be used for the quality assessment of Herba Rabdosiae Serrae.
Keywords：Herba Rabdosiae Serrae；Different parts；Ent-kauranes diterpenoids；RP-HPLC
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1.2 药品及试剂 enmein（1）， sculponeatin A（2），
nodosin（3），isodocarpin（4）和 lasiokaurin（5）均为自制，
经光谱学鉴定结构，色谱法检测其纯度均为 98 %以
上。溪黄草测试样品共 12批，经广州中医药大学药
用植物学教研室潘超美教授鉴定为唇形科香茶菜植物
溪黄草（Rabdosia serra），凭证标本现保存于广州中医
药大学临床药理研究所。甲醇，色谱纯，美国
Honeywell公司；水为超纯水，其他试剂均为国产分
析纯，汕头市光华化学厂有限公司。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性 Kromasil C18 色谱柱
（4.6 mm×250 mm，5 滋m）；流动相为甲醇（A）-0.1 %
甲酸（B），梯度洗脱（0~38 min，40 %A；38~42 min，
40 %~55 %A；42~63 min，55 %~60 %A）；流速 0.7
mL·min-1；检测波长 254 nm。对照品和样品进样量均
为 10 滋L，色谱图见图 1。理论塔板数 enmein，
sculponeatin A， nodosin， lasiokaurin 不低于 9000，
isodocarpin不低于 5000。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品 1~5 各适
量，用甲醇充分溶解并定容，即得混合标准品储备
液，其中 1~5 的质量浓度分别为 75，121，372，
144，75 mg·L-1。
1. enmein；2. sculponeatin A；3. nodosin；4. isodocarpin；5. lasiokaurin；
A. 溪黄草样品；B. 对照品
图 1 溪黄草样品（A）及对照品（B）的 HPLC色谱图
Figure 1 Chromatograms of five compounds（B） and the sample
of Herba Rabdosiea Serrae
2.3 溪黄草供试品溶液的制备 取干燥至恒质量的溪
黄草粉末（过 3号筛）约 1.0 g，精密称定，置具塞锥
形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称定质量，超
声 50 min，放冷，再称定质量，用甲醇弥补减失的质
量，摇匀，过滤，取续滤液过 0.45 滋m滤膜，即得。
2.4 检测波长的确定 采用 DAD 检测器在 190～600
nm 波长范围内扫描，对照品溶液中五个二萜在流动
相中的最大吸收波长在 238～245nm，但由于在低波
长处流动相有较强的末端吸收，为减少干扰，提高信
噪比，提取不同波长的色谱进行比较，并积分计算了
对应的峰面积响应值，选择 254 nm为检测波长，其
信噪比高、噪音低、峰形对称，可在消除背景干扰时
保证基线平稳和检测的灵敏度。
2.5 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液
1，3，5，10，15，20 滋L，进样测定，以峰面积积
分值（Y）对进样质量（X）进行线性回归，得回归方程，
结果见表1。
表 1 回归方程与线性范围
Table 1 Linear equation and linear range of five components
2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液连续进样
6次，（1）~（5）的峰面积 RSD（n=6）在 0.38 %～0.96 %
内，表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验 精密吸取溪黄草供试品溶液，分别
于 0，2，4，8，18，24 h依次进样，5 个成分峰面
积的 RSD（n=6）﹤3.0 %，表明供试品在 24 h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一批次样品 6份，制备供试品
溶液，测定 5个化合物的含量，RSD（n=6）在 0.71 %～
2.3%，表明该方法重复性良好。
2.9 加样回收率 称取已知 5个二萜含量的同一批样
品 5 份，分别加入 5个对照品适量，制备供试品溶
液，进样测定，结果见表 2。
2.10 样品测定 取 12批次溪黄草样品，制备供试品
溶液，进样测定，每批样品平行制备 3份，每份进样
3次，见表 3。
t / min
对照品
1
2
3
4
5
回归方程
Y=5246.4X+13.86
Y=4673.4X+78.09
Y=3459.4X+22.33
Y=4432.8X+14.71
Y=2434.1X+0.69
线性范围 /滋g
0.075～1.50
0.121～2.43
0.372～7.43
0.144～2.88
0.010～1.96
相关系数（r）
0.9999
0.9999
1
1
0.9999
mAU
350
300
250
200
150
100
50
0
10 20 30 40 50 60
t / min
mAU
250
200
150
100
50
0
10 20 30 40 50 60
1 2
3
4
5
A
B
5
4
3
21
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中药新药与临床药理 圆园15年 1月第 26卷第 1期
3 讨论
3.1 色谱条件优选 比较了甲醇 -水，乙腈 -水，甲
醇-0.1 %冰醋酸，甲醇-0.1 %三氯乙酸，甲醇-0.1 %
甲酸等溶剂系统，以甲醇 -0.1 %甲酸溶液进行梯度
洗脱时，各待测成分的分离度好。
3.2 供试品溶液制备方法的优选 以从溪黄草中分离
得到的 5 个对映 -贝壳杉烷型二萜类成分含量为指
标，比较了不同提取方法（超声波萃取，加热回流，
索式提取法），不同提取溶媒种类（乙醇，乙酸乙酯，
甲醇（60 %，80 %，100 %甲醇，v/v），不同提取溶
媒用量（m/v）（15，20，25，30，50倍量），提取时间
（20，30，40，50，60 min），确定了 2.3所述供试品
制备方法。
3.3 溪黄草全草、茎、叶中二萜的质量评价 本文采
用 RP-HPLC法同时测定 6批溪黄草全草中 5个二萜
的含量，结果 5个指标成分的含量范围分别为：1.59~
2.15 mg·g-1（enmein），2.32~2.86 mg·g-1（sculponeatin A），
5.67~6.81 mg·g-1（nodosin），1.18~1.47 mg·g-1（isodocarpin）
和 1.04 ~1.42 mg·g-1（lasiokaurin）。溪黄草全草中（1）~
（5）5 个二萜的平均含量分别为 1.85，2.54，6.34，
1.34，1.27 mg·g-1。可知不同产地溪黄草全草中 5个
二萜的含量有所差别但又呈现一定规律，即含量从高
到 底 依 次 为 nodosin， sculponeatin A， enmein，
isodocarpin，lasiokaurin；且 nodosin 的含量远高于其
他 4种二萜。
分别测定 3 批溪黄草叶，茎中 5 个二萜类的含
量，溪黄草叶中（1）~（5）5个二萜的平均含量分别为
1.78，3.95，9.16，1.82，1.54 mg·g-1。溪黄草茎中
（1）~（5）五个二萜的平均含量分别为 1.29，0.69，
1.68，0.36，0.41 mg·g-1。测量结果表明溪黄草叶中 5
个二萜类的含量明显高于茎中，其中 sculponeatin A，
nodosin，isodocarpin， lasiokaurin 在叶中含量约是茎
表 2 加样回收试验结果
Table 2 Recovery of the five components
化合物
1
2
3
4
5
样品量
/g
0.5000
0.5001
0.5004
0.5001
0.5002
0.5000
0.5001
0.5004
0.5001
0.5002
0.5000
0.5001
0.5004
0.5001
0.5002
0.5000
0.5001
0.5004
0.5001
0.5002
0.5000
0.5001
0.5004
0.5001
0.5002
样品中
量 /mg
0.9641
0.9618
0.9675
0.9607
0.9603
1.105
1.001
0.972
0.963
0.953
2.883
2.881
2.880
2.882
2.882
0.5930
0.5932
0.5929
0.5933
0.5932
0.5305
0.5301
0.5300
0.5302
0.5296
加入量
/mg
0.9600
0.9600
0.9600
0.9600
0.9600
1.000
1.000
1.000
1.000
1.000
2.800
2.800
2.800
2.800
2.800
0.6000
0.6000
0.6000
0.6000
0.6000
0.5000
0.5000
0.5000
0.5000
0.5000
测得值
/mg
1.920
1.924
1.920
1.912
1.911
2.083
2.030
2.003
1.946
1.967
5.675
5.690
5.689
5.665
5.711
1.201
1.190
1.192
1.190
1.201
1.031
1.023
1.021
1.025
1.029
回收率
/%
99.58
100.2
99.25
99.14
98.98
97.80
102.9
103.1
98.35
101.4
99.71
100.3
100.3
99.39
101.0
101.4
99.58
99.85
99.46
101.3
100.1
99.58
98.25
98.96
99.88
平均回收
率 /%
99.4
100.7
100.2
100.3
99.1
RSD
/%
0.48
2. 53
0.64
0.95
0.83
表 3 12批溪黄草药材中 5个成分的含量测定结果
Table 3 Contents of the five components in 12 batches of Herba Rabdosiae Serrae samples
注：（1）每个测定值代表 3份样品的平均值（n=3）；（2）*编号 1～6为溪黄草全草，7～9为溪黄草叶，10～12为溪黄草茎。
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
采集时间（地点）
广州，广东（07. 2010）
连州，广东（07. 2010）
清远，广东（07. 2010）
广州，广东（08. 2011）
连州，广东（08. 2011）
清远，广东（07. 2011）
广州，广东（07. 2010）
连州，广东（07. 2010）
清远，广东（07. 2010）
广州，广东（07. 2010）
连州，广东（07. 2010）
清远，广东（07. 2010）
enmein/mg·g-1
1.588
2.149
2.037
1.804
1.879
1.656
1.804
1.879
1.656
1.328
1.335
1.213
sculponeatinA/mg·g-1
2.856
2.486
2.541
2.323
2.497
2.516
3.930
3.997
3.916
0.581
0.682
0.798
nodosin/mg·g-1
6.810
6.493
6.793
5.667
5.829
6.470
9.167
8.829
9.470
1.367
1.698
1.995
isodocarpin/mg·g-1
1.393
1.363
1.466
1.256
1.359
1.184
1.826
1.859
1.784
0.296
0.360
0.426
lasiokaurin/mg·g-1
1.279
1.389
1.423
1.194
1.039
1.285
1.686
1.339
1.585
0.350
0.418
0.461
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栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 阅则怎早 砸藻泽藻葬则糟澡 驭 悦造蚤灶蚤糟葬造 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠，圆园15 January，灾燥造援 26 晕燥援 1
中的 5倍，enmein在叶和茎中几乎均等分布。
根据本试验可知溪黄草不同部位中 5个二萜的含
量有显著性差异，其分布情况为：叶＞全草＞茎，叶
中 5个二萜总含量约是茎中的 4倍，建议溪黄草入药
时选用叶子或全草。此外，通过对不同产地、不同部
位的溪黄草二萜含量的对比发现：nodosin含量最高，
sculponeatin A，enmein次之，isodocarpin，lasiokaurin
含量相对较小。本研究首次建立 HPLC法测定溪黄草
中 5个二萜的含量，该方法简便、准确、专属性强，
可为溪黄草药材及其制剂的质量控制标准的提高，提
供可资借鉴的基础研究资料。
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（编辑：邓响潮）
收稿日期：2014-09-09
作者简介：刘杰 ，硕士研究生 ，研究方向：中药质量评价。Email：liujietcm@163.com 。通讯作者：杨瑶珺，教授，博士，研究方向：中药质量
评价。Email：yangyaojunbucm@163.com。
基金项目：北京中医药大学“重点学科”开发课题（2013-2DXKKF-21）。
应用近红外光谱定量分析模型测定国产血竭中龙血素 A、龙血素 B含量
刘 杰，杨瑶珺，王文祎，吕晓娜，李 梦，戴 待（北京中医药大学中药学院，北京 100102）
摘要：目的 用近红外光谱技术快速测定国产血竭中龙血素 A、龙血素 B 含量。方法 根据国产血竭在
5284～4169.34 cm-1、7131.47～5943.53 cm-1、8913.37～7470.88 cm-1内的近红外吸收光谱，采用偏最小二乘法
（PLS）建立了校正模型。采用二阶导数预处理方法时能最有效地提取光谱的信息。结果 龙血素 A的校正集相
关系数为 0.9749，校正集标准偏差（RMSEC）为 0.1720，预测集相关系数为0.9857，预测集标准偏差（RMSEP）为
0.1450；龙血素 B校正集相关系数为 0.9933，校正集标准偏差（RMSEC）为 0.0526，预测集相关系数为 0.9872，
预测集标准偏差（RMSEP）为 0.0604。结论 近红外光谱技术快速简便，适合中药指标成分的快速分析。
关键词：国产血竭；龙血素 A；龙血素 B；偏最小二乘法；近红外漫反射光谱
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）01-0102-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.01.025
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