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中图分类号： 文献标识码： 文章编号：
该文以近年来国内外的文献为依据，从提取分离纯化、药理作用及作用机制方面综述了半边旗提取物
的研究现状。
；分离纯化；药理作用；作用机制
5F
5F
R 284 A 1005-4057(2010)05-0563-04
10.3969/j.issn.1005-4057.2010.05.032DOI:
半边旗，又名半边蕨、单边旗、半边风，系凤尾蕨科植
物，为南方常用生药之一，始载于《岭南采药录》。现代文
献记载，本品有止血、生肌、解毒、消肿之功效，民间用于
治疗吐血、外伤出血、发背、疔疮、跌打损伤、目赤肿痛 。
于上世纪 年代初，以梁念慈教授为首的课题组经研究发现
半边旗的水提物和醇提物均能有效抑制肿瘤细胞的生长，对
小鼠移植瘤有明显抑制作用 。根据这一提示课题组将半边
旗干燥全草进一步分离出几种二萜类化合物 并证明至少 种
二萜具有很高的抗肿瘤活性，其中的主要抗癌活性成分为
α ，结
构如图 所示。《广东省药材标准》于 年正式将半边旗
收载。由于 有良好的抗肿瘤作用并且无明显毒性，国内外
学者对该化合物进行了多方面的研究。本文对半边旗有效成
分 的分离纯化、药理作用及作用机制的研究现状作一综
述。
经典提取法 乙醇回流提取法 半边旗全草洗净风
干，乙醇回流提取 次，提取物减压浓缩至原体积的三分之
一，上活性炭柱，以 ∶ 洗脱，其中
一流分减压浓缩后，经硅胶柱层析，从 ：
洗脱部分得到两个二萜 和 。
超临界萃取法 乙醇回流提取法存在提取效率低、共
存组份多等缺点，为了进一步提高 的提取效率。邓亦峰等
以超临界 与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二
萜类化合物 采用正交设计法优化萃取条件；建立了
联用的分析方法，以选择离子监测 方式进行
含量测定，以选择离子峰面积与总离子流峰面积的比值优选
改性剂。主要的二萜类化合物 的准分子离子为 。
采用 为选择监测离子 以色谱保留时间和选择监测离
子流峰面积定量。结果表明 以 的提取量为考察指标，改
性剂乙醇在超临界流体中的体积分数是影响萃取的主要因素
其次是萃取温度和萃取压力。正交试验得到的最佳萃取条件
为 、 ℃、超临界 与乙醇体积比为 ∶ 。同
时，通过超临界 萃取法与索氏提取法的提取效率对比发
现，超临界 萃取 的提取率已达索氏提取法的
，充分展示了超临界 萃取法的高效率 。
半边旗中二萜类化合物主要以 和 α
形式存在。 与 仅
相差一个双键，但 有抗肿瘤活性，而 则无抗肿瘤活性，
也无紫外吸收。提取物中二者难以分离。结构如下图：
半边旗中二萜类化合物的分析鉴定 半边旗二萜化合物
的分析鉴定采用 联用的方式以选择离子监
测 方式进行测定。主要的二萜类化合物 和 的准分
子离子为 ，发生源内分子离子碰撞活化解离 现
象时，出现 和 离子峰。邓亦峰等 采用
为选择监测离子，以色谱保留时间和选择监测离子
流峰面积定量，优选质谱条件和色谱条件 分析色谱柱为
， × ，流动相浓度 为 ，
[1]
[2]
[3-4]
3 2 3
3 3
[3]
[5]
2
2
2
2
2
[5]
-1
-1 -1 [6]
-1
3
90
, 3
5F(Ent- 11 -hydro xy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid)
1 2006
5F
5F
1.1 5F
1.1.1 ( )
3
EtOH, CH OH -CHCl (2 1)
CHCl -CH OH(90 2)
(4F 5F)
1.1.2
5F
CO
, HPLC-
APCI-MS (SIM)
5F [M - H]- 1
[M-H]- 1 ,
, 5F
,
25M Pa 60 CO 85 15
CO
CO 18 min
97.12% CO
1.2 5F
5F 4F [ent-11 -hydroxy-
15-oxo-kaur-16 (R) methyl-19-olic acid] 5F 4F
5F 4F
1.2.1
HPLC- APCI-MS ,
(SIM) 5F 4F
[M- H] (CID)
[M-H] [M-H2O-H]
[M- H]
(
Diamonsil ODS 416 mm 150 mm A CH CN
1 提取分离纯化
的提取
的分离纯化
第 卷第 期
年 月
28 5
2010 10
广 东 医 学 院 学 报
JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE
Vol. 28 No. 5
Oct. 2010
半边旗有效成分 的研究现状5F
吴科锋 (综述)，梁念慈 (审校)1 2 （广东医学院　 广东天然药物研究与开发重点实验室；1.
2. 524023生物化学与分子生物学研究所，广东湛江 ）
基金项目：
收稿日期： 修订日期：
作者简介：
国家自然科学基金资助项目 ；
香港创新科技署合作项目
；
吴科锋 - ，男，硕士，助理研究员。
(No. 39870900)
(GHP/022/06)
2009-09-08 2010-01-05
( 1980 )
图 结构图1 5F
图 和 的结构比较2 5F 4F
563
流动相浓度 为 · ，两者体积比为 ∶ ∶
，流速 ，进样 μ 。测定半边旗中二萜类化合
物 。结果表明，半边旗中二萜类化合物 为 · ，
线性范围为 ～ μ ，相关系数均优于 ，检出限达
。 的加标回收率为 ，保留时间为
。
含 的硅胶柱分离、纯化 兰柳波等 用少量
水溶解 后 再用丙酮稀释成 的溶液 浸泡硅胶
粒度 μ ，避光放置过夜。次日挥干丙酮及其
中的水份，装柱，并将 和 的混合物上柱，避光条件下
进行硅胶柱层析 用氯仿甲醇进行梯度洗脱 体积比从 ∶
至 ∶ 分部收集、浓缩，用薄层层析进行初步鉴定 展
开剂为体积比 ∶ 的氯仿甲醇 经重结晶后得到产品 及
。
溶剂系统法分离、纯化 龚先玲等 将 和 的混
合物以 型硅胶为填料，采用不同的溶剂系统石油醚和丙
酮的混合液，氯仿和甲醇的混合液洗脱，以薄层色谱为检测
手段，结果发现分别采用两种不同的溶剂系统洗脱硅胶柱，可
以有效地纯化 。
常压柱层析制备高纯度 吕应年等 在分离、纯化
与 混合物过程中，以 实验筛选适当的洗脱流动相，
进行常压硅胶柱层析分离纯化，产物用两相法重结晶，
及 监测分离效果及产品纯度。结果表明优选的流动相为
混合溶剂石油醚∶丙酮∶醋酸 ∶∶ 体积比 ，纯化分离
得到的 和 ，纯度分别从 和 提高到 和 。
其他 梁统等 利用反相高效液相色谱定量分析不同
部位、不同采集季节、半边旗中 的含量结果发现， 主要
分布在半边旗的叶片中，根茎含量极低，叶片中的 含量是
根茎的 倍以上。尽管半边旗是全年可采集的草药，但 的
含量在不同季节变化较大，其中以 月的含量最高。鉴于
半边旗在岭南地区广泛分布，梁统等 采用薄层扫描法对产
自广西南宁、广东湛江、广东广州的半边旗中 的含量进行
了测定，发现不同来源的半边旗中 含量变幅在 ～
之间，其中湛江产的半边旗中 含量最高，广州
的次之，广西南宁的最次。
抗肿瘤作用 实验表明， 对不同类型的肿瘤细胞均
有杀伤作用，其中对人白血病细胞 ， 作用 后，
为 μ ，对人高转移卵巢癌细胞 ，
作 用 后 ， 为 μ ， 对 人 胃 癌 细 胞
、人低分化鼻咽癌细胞 、人肺腺癌细胞
、人肝癌细胞 和 ， 作用 后，
分别为 、 、 、 、 μ 。 与
氟尿嘧啶 、顺铂 和长春新碱 联合用药，
按照金氏公式计算出来的 值介于 ～ 之间，有个别大
于 ，即提示 与 、 和 的体外抗肿瘤作用具
有相加或者是增强作用 。通过鸡胚绒毛尿囊膜 实验
发现， μ 的 与阴性对照组相比，血管细小分支
明显减少，血管密度明显减小，说明 能抑制新生血管的形
成，进而抑制肿瘤的生长 。
抗瘢痕作用 研究表明， 在 ～ 范围内具有
抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖和降低培养基中可溶性胶原含
量。当药物质量浓度为 时 在 、 和 对成
纤维细胞的抑制率分别为 、 、
，对 胶原蛋白合成的抑制率为
。同时亦有研究表明 浓度在 ～ 时，乳
酸脱氢酶 值与阴性对照组相比，显著升高 ，
具有成纤维细胞毒性作用， 在 质量浓度时可发生
细胞坏死性改变 。
另外通过研究 对体外培养翼状胬肉 细胞作用时
发现，其对 细胞的抑制作用具有时效－剂量依赖性，
为 μ 。
抗支气管气道纤维化作用 杨寿等 将不同质量浓度
、 、 作用于体外培养的支气管哮喘小鼠气道
成纤维细胞，通过噻唑蓝比色法 检测 对细胞增殖的
作用，并用逆转录聚合酶链反应 检测其对细胞中
表达水平的影响。结果发现，当药物浓度高于
时，细胞呈现抑制状态，并随药物浓度增高，其作用效
果愈明显；药物浓度在 ～ 时，与阴性对照组相
比，细胞抑制率呈显著性增加，体外培养的成纤维细胞
的表达水平下调，提示 对成纤维细胞的抑制
作用可能是通过下调 的转录来实现。
其他作用 刘文等 利用血小板悬液与不同浓度的
孵育 然后用凝血酶 作用 并用血液凝集仪
记录血小板聚集情况。结果发现，半边旗中二萜类化合物
在 ～ μ 范围内具有抑制凝血酶诱导血小板聚集
的作用 并随着 浓度的增大 对血小板聚集的抑制率从最初
的 增加到 。
抗肿瘤作用 实验表明，不同质量浓度的 注射液对
小鼠移植瘤 及 均有不同程度的抑制作用，剂量为
、 和 的 注射液对 抑瘤率分别为 、
和 ，对 的抑瘤率分别为 、 、
。提示 注射液可能对肝癌有较高的选择性 。
抗瘢痕作用 陈萍等 通过建立兔耳增生性瘢痕动物
模型 在 时瘢痕局部注射不同质量浓度 、 、
的半边旗 或生理盐水， 时观察药物对瘢痕增生指数
的影响及光镜下瘢痕变化情况。结果发现，各质量浓度组与
生理盐水对照组以及各质量浓度组之间 差异均有统计学意
义 ；其瘢痕抑制效果与半边旗 质量浓度呈剂量依
赖性关系；光镜下见 明显抑制成纤维细胞增殖及降低胶原
纤维的含量。
对细胞代谢的影响 等 用 、 和
参入的方法测定 对 细胞 、 和蛋
白质合成的影响，结果提示， 作用于细胞 后，对
、 和 参入有显著抑制作用，三者均呈明
B 2mmol L NH4Ac A B = 35
75 1.0 mL/min 5 L)
5F 5F 1.18 mg g
0.05 2.50 g 0.999
0.4 ng 5F 97.8%( = 3) 4.3
min
1.2.2 AgNO 5F
AgNO , 100 g/L ,
HF254 ( < 38 m )
5F 4F
, / ( 99.5
0.5 98 2) , (
95 5 / ) , 5F
4F
1.2.3 5F 5F 4F
H60
5F
1.2.4 5F
5F 4F TLC
TLC
MS
=7 3 0.05 ( )
4F 5F 62% 17% 96% 94%
1.2.5
5F 5F
5F
20 5F
8-11
5F
5F 0.8077
1.1898 mg/g 5F
2.1
2.1.1 5F
HL-60 5F 24 h
IC 11.4 mol/L HO-8910PM
5F 24 h IC 11.4 mol/L
MGC2803 CNE-2Z
SPC-A-1 BEL-7402 HePG2 5F 24 h
IC 10.1 12.8 14.5 14.4 24.6. mol/L 5F 5-
(5-Fu) (CDDP) (VCR)
q 0.85 1.15
1.15 5F 5Fu CDDP VCR
(CAM)
33.2 g/egg 5F
5F
2.1.2 5F 20 80 mg/L
60 mg/L , 5F 24 h 48 h 72 h
(64.23 0.13)% (84.17 0.06)%
(89.47 0.15)% FB (32.65
1.16)% 5F 80 120 mg/L
(LDH) ( < 0.01)
5F 120 mg/L
5F (HPF)
HPF 24
h IC50 32 mol/L
2.1.3
(8 32 128 mg/L)5F
(MTT) 5F
(RT-PCR)
CTGF mRNA 8
mg/L
16 128 mg/L
CTGF mRNA 5F
CTGF mRNA
2.1.4 5F
1min, (500U/L) 5min,
5F 80 500 mol/L
, 5 F ,
40% 97%
2.2
2.2.1 5F
S180 HepA
25 50 100 mg/kg 5F S180 25.6 %
27.0 % 31.8 % HepA 27.8 % 45.4 %
54.5 % 5F
2.2.2
, 21 d (20 40 80mg/L)
5F 28 d (HI)
HI
( <0.01) 5F
5F
3.1
3.1.1 Li [3H]-TdR [3H]-UTP
[3H]-Leu 5F SPC-A-1 DNA RNA
5F 24 h [3H]-
TdR [3H]-UTP [3H]-Leu
-1
-1
[6]
3
[7]
3
[8]
[9]
[10]
[11]
50
50
50
[12-13]
[14]
[15]
[16]
[17]
[18]
[19]
[20]
[21]
[22]
[23]
n
P
P
2
3
药理作用
作用机制
体外实验
动物实验
抗肿瘤作用机制
± ±
± ±
564 广 东 医 学 院 学 报 2010 28年第 卷
显的剂量依赖关系，说明 不同程度地抑制细胞 、
和蛋白质的合成但对 抑制程度大于 。 对
细胞 、 和蛋白质合成也有相似作用。
对细胞周期的影响 何太平等 应用流式细胞术
测定 对 细胞周期的影响。结果表明不同
浓度的 作用 即可使 明显阻断 细胞周期于
期，不阻断细胞于 期，并呈一定的剂量效应关系。
对拓扑异购酶活性的影响 拓扑异构酶是一种重
要的核酶，包括Ⅰ型 Ⅰ 和Ⅱ型 Ⅱ ，通过
链断裂和重接而改变 的拓扑结构，调节其空间构型
变化，在细胞生长过程中起重要作用。 可抑制 Ⅰ细
胞 拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性， 的 可完全抑制
Ⅰ和Ⅱ的活性。化合物 对 细胞 拓扑异构酶
也有较强的抑制作用 。
对蛋白激酶的影响 在化合物 作用下， 细胞
活性升高，进一步研究发现， 明显上调三种
基因 、 和 其中以 最为明
显， 和 呈代偿性增加这说明 通过
信号传导通路使 异常激活和表达，并引起转录
因子的改变和基因表达的调节，从而发挥抗肿瘤作用 。
对癌基因表达的影响 化合物 能强烈引起人结肠癌
细胞 凋亡，转染过表达 基因的 细胞可拮抗
的作用。 通过抑制转录因子 活性，从而抑制
和 的表达，促进 的表达。此外， 对人胃癌
细胞 携野生型 基因 有强烈的抑制作用，而对人
胃癌细胞 基因缺损型 作用不敏感，说明 通过
依赖 基因的线粒体途径阻止人胃癌细胞 的增殖，
其过程包括细胞中 表达增高，从线粒体释放细胞色素Ｃ
及凋亡诱导因子 到胞浆，从而引起凋亡， 抗肿瘤分子
机制与多种基因密切相关；当 作用于 细胞 后，
表达减少， 、 和 表达则增多 。
对微管蛋白的影响 半边旗提取物 在离体条件下对
猪脑微管蛋白聚合 解聚体系存在着影响。它能抑制微管蛋
白的聚合，同时又能稳定已聚合的微管蛋白使其在解聚条件
下不发生解聚 。
对癌细胞转移机制的作用 通过下调 及
血管内皮生长因子 的表达，从而抑制高转移卵巢癌细
胞的侵袭转移能力 。
蔡康荣等 应用流式细胞术 测定 对 细胞周
期的影响，结果表明不同质量浓度 作用细胞 即可使其
通过 检测 含量，在 作用下， 于
短期内有“亚 峰”出现，这是细胞凋亡的特征性表现。同
时发现， 作用时间越长， 期细胞逐渐增多， 期的细胞
减少，由此提示 诱导细胞 期凋亡，致处于 期的细胞减
少，随着用药时间的延长，坏死细胞增多，阻滞于 期时相
的细胞比例亦增多，而凋亡峰随着 期停滞细胞的增加而减
少。
陈毓东等 研究表明，不同浓度 能显著降低细胞核增
殖抗原 及细胞周期调控因子 的阳性表达率。它
们的出现明显与细胞增殖有关，说明 可抑制呈活性增殖状
态的瘢痕成纤维细胞使其 的合成明显减少，增殖受阻。
半边旗提取物 在体内外均有良好的抗肿瘤活性及消除
瘢痕的作用，且已发现其抗肿瘤作用机制主要与抑制
活性、调节 和 的比例及降低 的水平有
关。并且一整套成熟的从半边旗全草中提取、分离、纯化、
鉴定活性成分 的工艺流程已得到建立。但半边旗全草中
的含量较低，且各地区半边旗的 含量又有较大的差异，
因此提高 的产量已成为制约对半边旗开发的一个瓶颈。除
此之外，由于肿瘤的发生是多基因与多条信号传导通路失调
所导致的复杂过程，因此如何寻找对具有 特异性的癌基因
是将 开发成抗肿瘤药物的重点和难点，也是今后研究工作
的重点。
5F DNA
RNA , RNA DNA 5F HL-
60 DNA RNA
3.1.2
(FCM) 5F HO28910PM
5F 24h 5F HO-8910PM
G2 G1 /S
3.1.3 DNA
(TOPO ) (TOPO )
DNA DNA
5F SPCA-
DNA 0.01mg/L 5F
TOPO 5F HL-60 DNA
3.1.4 5F K562
MAPK 5F MAPK
(JNK MAPK-42/44 P38 MAPK), JNK
MAPK-42/44 P38 MAPK 5F
MAPK MAPK
3.1.5 5F
HT-29 Bcl-2 HT-29
5F 5F NF-kappa B
Bcl-2 Bcl-xL iNOS 5F
MKN-45( p53 )
MKN-28(p53 ) 5F
p53 MKN-45
Bax
(AIF) 5F
5F K562 24h Bcl-
2 Bax c-Fos c-Jun
3.1.6 5F
-
3.1.7 5F NF-kappa B
(VEGF)
3.2
(FCM) 5F KFB
5F 24 h
KFB FCM DNA 32mg/L 5F KFB
G1
5F G1 S
5F S S
G1
G1
5F
(PCNA) Ki-67
5F
, DNA
5F
NF-
kappa B Bax Bcl-2 VEGF
5F
5F 5F
5F
5F
5F
[24]
[25]
[26-27]
[28-30]
[31]
[32]
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抗瘢痕作用机制研究
4 结论
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566
第 卷第 期
年 月
28 5
2010 10
广 东 医 学 院 学 报
JOURNAL OF GUANGDONG M EDICAL COLLEGE
Vol. 28 No. 5
Oct. 2010
提 要：
关键词：
中图分类号： 文献标识码： 文章编号：Q 813 A 1005-4057(2010)05-0566-03
10.3969/j.issn.1005-4057.2010.05.033
利用骨组织工程技术研制人工骨修复骨缺损是近年的研究热点，对组织工程骨种子细胞尤其是血管内皮
祖细胞的研究也不断深入。该文综述了血管内皮祖细胞的来源、生物学特性、改善血管新生的机制及其在骨修复中作
用等方面的研究现状。
血管内皮祖细胞；组织工程骨；种子细胞；综述文献
DOI:
骨修复是由多种细胞和细胞外基质共同参与并受多种生
长因子和激素调控的复杂病理生理过程。近年来，骨组织工
程技术成为骨缺损修复的研究重点，其研究多集中在种子细
胞的选择与培养。血管内皮祖细胞
， 最早由 等 于 年报道， 是血管
内皮细胞的前体细胞，亦称成血管母细胞，这一发现更新了
传统意义上的出生后血管生成、血管损伤修复的理论，具有
广阔的临床应用前景。本文就血管内皮祖细胞及其在骨修复
中的作用作一综述。
多数学者认为， 与造血干细胞均起源于共同的干细
胞 血液血管母细胞 。尽管对 的定义和来
源还存在着争议，但多数研究认为： 主要来源于脐静脉
血、成人外周血、骨髓 外周血中的 起源于骨髓，而脐
血中的 起源于胎儿的肝脏 。正常情况下， 的数量
极少外周血中约为 ～ 个 ，脐血中的浓度约高 倍。在
含有血管内皮生长因子 ，
、成纤维细胞生长因子( ，
)等适合生长的培养条件下， 可以大量增殖扩增。
从脐血、外周血、骨髓等标本中获得的单个核细胞或 、
阳性选择后的单个核细胞，在体外包被有纤维连接蛋
(endothelial progenitor
cells EPCs) Asahara 1997 EPCs
EPCs
EPCs
- (heman-gioblast) EPCs
EPCs
, EPCs
EPCs EPCs
, 2 3 /mL 3.5
(vascular endothelia growth factor
VEGF) fibroblast growth factor
FGF EPCs
CD34
CD133
[1]
[2]
[3]
1 的来源
血管内皮祖细胞及其对骨修复作用的研究现状
（广东医学院附属医院骨科，广东湛江 ）524001孙 欣(综述)，曾 荣、吴浩峻(审校)
基金项目：
收稿日期： 修订日期：
作者简介： (
湛江市财政资金科技专项竞争性分配项目
湛财工
；
孙 欣 － ，男，在读硕士研究生，
主治医师。
(No. [2009163])
2009-11-06 2010-01-20
1979 )