全 文 ：［收稿日期］ 20130719(007)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(30973938)
［第一作者］ 徐钢，在读硕士，从事中药炮制工艺与原理研究，Tel:0411-87586116，E-mail:526423695@ 163. com
［通讯作者］ * 贾天柱，硕士，教授，博士生导师，从事中药炮制原理研究，Tel:0411-87586499，E-mail:jiatzh@ 126. com
·化学与分析·
狗脊毛甲醇提取物 UPLC /Q-TOF-MS分析
徐钢，孙娜，赵敏杰，林桂梅，高慧，贾天柱*
(辽宁中医药大学药学院，国家中医药管理局中药炮制重点研究室，
辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:探索狗脊毛化学成分组成及其外用止血的物质基础。方法:采用超声、索氏、回流 3 种方式对狗脊毛进行
甲醇提取，通过 UPLC /Q-TOF-MS对各提取物进行定性分析，流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0 ～ 5 min，5% ～ 55% A;5 ～
7 min，55% ～85%A;7 ～ 15 min，85% ～100%A;15 ～ 20 min，100%A)，检测波长 254 nm，m / z扫描范围 100 ～ 1 000，脱溶剂气温
度 350 ℃，脱溶剂气体积流量 9 L·min －1，喷雾器压力 2. 4 × 105Pa，毛细管电压 4 000 V。结果:3 种方式共检出化合物 50 个，给
出了其中 38 个化合物的推荐分子式和名称。编号 32 ～ 39 共 8 个化合物为一系列三酰基甘油类同系物。结论:狗脊毛中化合
物包括植物油类(三酰基甘油)、有机酸类、有机酸酯类、生物碱类、黄酮类、多酚类、糖苷类等，相对分子质量集中于 200 ～ 800，
三酰基甘油可能为主要药效成分。
［关键词］ 狗脊毛;甲醇提取物;三酰基甘油;超高效液相-四级杆-飞行时间串联质谱;定性分析
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)07-0046-05
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfix． 2014070046
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 13422 / j． cnki． syfjx． 000009． html
［网络出版时间］ 2014-01-20 16:06
Analysis of Chemical Composition in Methanol Extract of Yellow Hairs from
Ｒhizome of Cibotii Ｒhizoma by UPLC /Q-TOF-MS
XU Gang，SUN Na，ZHAO Min-jie，LIN Gui-mei，GAO Hui，JIA Tian-zhu*
(School of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Key Laboratory of Chinese
Materia Medica Processing，State Administration of Traditional Chinese Medicine of the Peoples Ｒepublic of
China，Liaoning Engineering Ｒesearch Center of Chinese Materia Medica Processing，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To explore chemical composition in yellow hairs of rhizome of Cibotii Ｒhizoma and
its material basis for topical hemostatic effect． Method:Chemical composition in yellow hairs of rhizome of Cibotii
Ｒhizoma was extracted by ultrasound，Soxhlets extractor and reflux methanol extraction technologies，each extract
was determined by UPLC /Q-TOF-MS for qualitative analysis，mobile phase of acetonitrile (A)-water (B)
gradient elution (0-5 min，5% -55%A;5-7 min，55% -85% A;7-15 min，85% -100% A;15-20 min，100%
A)，detection wavelength was 254 nm，scanning range of m / z from 100 to 1 000，desolvation gas temperature at
350 ℃，volume flow of desolvation gas was 9 L·min －1，spray pressure was 2. 4 × 105 Pa，capillary voltage was
4 000 V． Ｒesult:A total of 50 compounds were checked out by these three methods，38 compounds out of them
were recommended for molecular formula and name． Eight compounds of Number 32-39 should be a series of
triacylglycerols homologues． Conclusion:Ｒelative molecular weight was concentrated within 200-800，including
vegetable oils (triacylglycerols)， organic acids， organic acid esters， alkaloids， flavonoids， polyphenols，
·64·
第 20 卷第 7 期
2014 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 7
Apr．，2014
glycosides and so on，triacylglycerols of which may be the main ingredient in yellow hairs of rhizome of Cibotii
Ｒhizoma．
［Key words］ yellow hairs of rhizome of Cibotii Ｒhizoma;methanol extract;triacylglycerols;UPLC /Q-
TOF-MS;qualitative analysis
狗脊始载于《神农本草经》，列为草部中品，具
有祛风湿、补肝肾、强腰膝的功效，常用于治疗风湿
痹痛、腰膝酸软、下肢无力等症［1］。历代本草记载
狗脊净制方法主要为去毛，以防伤肺［2］并便于制剂
和服用。据报道狗脊毛对外伤性出血具有明显止血
效果，作用较明胶海绵迅速，且能被组织逐渐吸收消
化［3］，但因其松泡，且无化学研究基础，使之应用受
限。前期红外光谱检测发现狗脊毛与狗脊比较，相
关系数仅约 0. 7，二者差异较大。不仅峰形不同，且
相同位移处的峰，其峰强比亦有较大差别［4］，提示
狗脊毛的成分更为复杂。本实验通过超声、索氏、回
流 3 种方式对狗脊毛进行甲醇提取，采用 UPLC /Q-
TOF-MS对提取物进行定性分析，探索狗脊毛化学
成分组成及外用止血的物质基础。
1 材料
1290 型 UPLC-6520 /Q-TOF-MS 液质联用仪(美
国安捷伦公司) ，FW-100 微型高速万能试样粉碎机
(北京市永光明医疗仪器厂) ，ZDHW 型调温电热套
(北京市永光明医疗仪器厂) ，FA2204B 型电子天平
(上海精密科学仪器有限公司)。10 混批生品狗脊
饮片购自安徽省亳州市安东药业，经辽宁中医药大
学翟延君教授鉴定为蚌壳蕨科植物金毛狗脊
Cibotium barometz (L．)J． Sm． 的干燥根茎;乙腈为
色谱纯，甲醇为色谱纯或分析纯，水为纯净水，其他
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 净制 取 10 批量生狗脊饮片，用小刀刮取其
茸毛，收集该狗脊毛备用。
2. 2 粉碎 取狗脊毛进行粉碎，由于狗脊毛质地极
为轻薄，故无法进行过筛处理，小心收集狗脊毛粉末
备用。
2. 3 样品的制备［5］
2. 3. 1 超声提取 取狗脊毛粉末 1. 00 g，置于
250 mL圆底烧瓶中，加入甲醇 100 mL，超声处理
1 h，静置放冷，滤过，浓缩，记为样品 A备用。
2. 3. 2 索氏提取 取狗脊毛粉末 1. 00 g，置于
250 mL索氏提取器中，加入甲醇 100 mL，索氏提取
8 h，静置放冷，滤过，浓缩，记为样品 B备用。
2. 3. 3 回流提取 取狗脊毛粉末 1. 00 g，置于
250 mL圆底烧瓶中，加入甲醇 100 mL，加热回流 1
h，静置放冷，滤过，浓缩，记为样品 C备用。
2. 4 UPLC /Q-TOF-MS检测
2. 4. 1 色谱条件 Zorbax Eclipse plus C18色谱柱
(3. 0 mm × 150 mm 1. 8 μm，P． N． 959759-302) ，流动
相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0 ～5 min，5% ～55%A;
5 ～ 7 min，55% ～85%A;7 ～ 15 min，85% ～ 100% A;
15 ～ 20 min，100% A) ，进样量 1 μL，检测波长
254 nm，柱温 50 ℃，流速 0. 5 mL·min －1。
2. 4. 2 质谱条件 采用 ESI 离子源，正离子检测，
m / z扫描范围 100 ～ 1 000，脱溶剂气温度 350 ℃，脱
溶剂气体积流量 9 L·min －1，喷雾器压力 2. 4 × 105
Pa，毛细管电压 4 000 V。
2. 5 精密度试验 精密吸取样品 A 溶液 1 μL，按
2. 4 项下方法连续进样 6 次，结果各主要色谱峰保
留时间的 ＲSD 均 ＜ 0. 3%，峰面积的 ＲSD 均 ＜
3. 0%，表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验 称取狗脊毛粉末 1. 00 g，共 18
份，按 2. 3 项下方法制备各样品 6 份，精密吸取样品
A，B，C 溶液各 1 μL，按 2. 4 项下方法检测，结果各
主要色谱峰保留时间的 ＲSD 均 ＜ 0. 3%，峰面积的
ＲSD均 ＜ 3. 0%，表明该方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 精密吸取样品 A，B，C 溶液各
1 μL，分别于 0，1，2，4，12，24 h 按 2. 4 项下方法检
测，结果各主要色谱峰保留时间的 ＲSD 均 ＜ 0. 3%，
峰面积的 ＲSD均 ＜ 3. 0%，表明样品溶液在 24 h 内
较稳定。
2. 8 样品测定 精密吸取样品 A，B，C 溶液各
1 μL，按 2. 4 项下色谱条件测定，试验结果均采用仪
器自带工作站进行分析解谱，给出精确相对分子质
量，根据最新 MassBank［6-7］在线液质数据库进行归
属，结果 3 种方式提取液中共检出化合物 50 个，给
出了其中 38 个化合物的推荐分子式和名称，见表
1 ～4。其中编号 32 ～ 39 共 8 个化合物的保留时间、
相对分子质量均呈现规律变化，见图 1，结果显示各
提取色谱图均呈现单一峰，保留时间差值在0. 113 ～
0. 210，相对分子质量差值 44. 025 2 ± 0. 000 5，编号
34，35，37 归属为三酰基甘油类化合物，综合分析推
测这些化合物为一系列三酰基甘油类同系物。
·74·
徐钢，等:狗脊毛甲醇提取物 UPLC /Q-TOF-MS分析
表 1 狗脊毛甲醇超声提取物分析
No． tＲ /min 选择离子 测定值 /m·z － 1 理论值 /m·z － 1 偏差 /ppm 分子式 化合物
1 1. 218 ［M + H］+ 267. 978 268. 074 － 357. 0 C16H12O4 芒柄花黄素
2 1. 461 ［M］+ 363. 062 363. 067 12. 9 C14H13 F4N3O2 S 氟噻草胺
3 1. 881 ［M］+ 322. 144 322. 241 － 302. 3 C22H30N2 安搏律定
4 2. 026 ［M + H］+ 369. 164 369. 158 17. 1 C21H23NO5 别隐品碱
5 2. 511 ［M + H］+ 327. 133 327. 147 － 42. 2 C19H21NO4 波尔丁
6 3. 415 ［M + H］+ 162. 035 162. 053 － 107. 4 C6H10O5 苹果酸酯
7 3. 770 ［M + H］+ 515. 199 515. 292 － 180. 3 C26H45NO7S 牛磺胆酸
8 4. 355 － 678. 501 － － － －
9 4. 465 ［M］+ 792. 584 792. 721 － 172. 9 C50H96O6 三酰基甘油
10 4. 610 － 904. 665 － － － －
11 6. 322 ［M］+ 200. 197 200. 195 4. 5 C12H24O2 月桂酸
12 7. 775 ［M］+ 228. 227 228. 163 284. 0 C15H2ON2 吲达品
13 8. 389 ［M］+ 304. 307 304. 194 372. 5 C21H24N2 奎核氮卓
14 9. 245 ［M］+ 332. 340 332. 158 548. 2 C14H24N2O7 奇放线菌素
15 10. 763 ［M］+ 360. 359 360. 355 1. 4 C21H28O5 可的松
16 12. 346 ［M］+ 784. 567 784. 461 134. 6 C41H68O14 黄芪苷 IV
17 14. 284 ［M + H］+ 390. 278 390. 278 0. 5 C23H34O5 异羟基洋地黄毒苷元
表 2 狗脊毛甲醇索式提取物分析
No． tＲ /min 选择离子 测定值 /m·z － 1 理论值 /m·z － 1 偏差 /ppm 分子式 化合物
18 1. 246 ［M］+ 268. 977 269. 118 － 524. 3 C14H20ClNO2 乙草胺
19 1. 941 ［M + H］+ 206. 081 206. 058 112. 6 C11H10O4 二甲基秦皮乙素
5 2. 764 ［M + H］+ 327. 132 327. 147 － 46. 8 C19H21NO4 波尔丁
20 3. 103 ［M］+ 325. 084 325. 078 18. 5 C18H13ClFN3 咪达唑仑
21 3. 362 ［M］+ 283. 169 283. 133 124. 0 C15H22ClNO2 甲氧毒草安
22 3. 556 ［M + H］+ 343. 221 343. 215 18. 1 C21H29NO3 羟基布托啡诺
23 3. 701 ［M + H］+ 387. 247 387. 151 248. 0 C21H23ClFN3O 氟胺安定
24 3. 846 ［M + H］+ 431. 274 － － －
25 3. 975 ［M + H］+ 475. 299 475. 196 215. 3 C24H33N3O3 S2 安乐嗪
26 4. 089 － 519. 323 － － －
27 4. 185 ［M + H］+ 563. 348 563. 259 158. 0 C26H45NO8S2 牛黄胆酸硫酸酯
28 4. 282 ［M］+ 608. 373 608. 273 163. 4 C33H40N2O9 利血平
29 7. 141 ［M］+ 272. 252 272. 235 63. 2 C16H32O3 16-OH-十六碳酸
12 7. 545 ［M］+ 228. 227 228. 163 281. 4 C15H20N2 吲达品
30 7. 803 ［M］+ 228. 227 228. 227 1. 8 C14H12O3 白藜芦醇
31 8. 449 ［M + H］+ 303. 306 303. 256 164. 5 C20H33NO 葑丙吗啉
32 16. 669 － 967. 684 － － －
33 16. 782 － 922. 659 － － －
34 16. 895 ［M + H］+ 878. 633 878. 736 － 117. 2 C57H98O6 三酰基甘油
35 17. 024 ［M + H］+ 834. 608 834. 768 － 190. 8 C53H102O6 三酰基甘油
36 17. 170 － 790. 583 － － －
37 17. 315 ［M + H］+ 746. 558 746. 642 － 113. 2 C47H86O6 三酰基甘油
38 17. 477 － 702. 532 － － －
39 17. 687 － 658. 507 － － －
·84·
第 20 卷第 7 期
2014 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 7
Apr．，2014
表 3 狗脊毛甲醇回流提取物分析
No． tＲ /min 选择离子 测定值 /m·z － 1 理论值 /m·z － 1 偏差 /ppm 分子式 化合物
18 1. 232 ［M］+ 268. 977 269. 118 － 524. 3 C14H20ClNO2 乙草胺
40 1. 894 ［M］+ 322. 143 322. 105 117. 7 C16H18O7 8-β-羟基氧络弯孢霉菌素
4 2. 056 ［M + H］+ 369. 163 369. 158 14. 9 C21H23NO5 别隐品碱
41 2. 557 ［M + H］+ 119. 078 119. 058 166. 3 C4H9NO3 同丝氨酸
42 2. 670 ［M + H］+ 327. 133 327. 147 － 44. 3 C19H21NO4 6-乙酰吗啡
20 3. 025 ［M］+ 325. 085 325. 078 21. 8 C18H13ClFN3 咪达唑仑
43 3. 606 － 531. 193 － － －
7 3. 945 ［M + H］+ 515. 198 515. 292 － 180. 3 C26H45NO7S 牛磺胆酸
9 4. 575 ［M］+ 792. 582 792. 721 － 175. 1 C50H96O6 三酰基甘油
44 4. 737 ［M + H］+ 464. 109 464. 096 29. 3 C21H20O12 樱草苷
11 6. 320 ［M］+ 200. 196 200. 195 4. 5 C12H24O2 月桂酸
45 7. 757 ［M + H］+ 505. 207 505. 225 － 34. 4 C25H35N3O6 S 安泼那韦
13 8. 419 ［M］+ 304. 308 304. 191 383. 0 C21H24N2 奎核氮卓
46 8. 823 － 497. 370 － － －
47 9. 905 ［M + H］+ 331. 338 331. 133 619. 7 C17H18 FN3O3 环丙沙星
48 10. 782 ［M + H］+ 359. 358 359. 165 537. 4 C19H22 FN3O3 恩氟沙星
16 12. 327 ［M］+ 784. 566 784. 461 134. 2 C41H68O14 黄芪苷 IV
17 14. 298 ［M + H］+ 390. 277 390. 241 92. 5 C23H34O5 异羟基洋地黄毒苷元
49 15. 912 ［M］+ 513. 402 513. 259 278. 6 C26H35N5O6 脑啡肽
50 17. 204 － 763. 502 － － －
表 4 狗脊毛 3 种甲醇提取物中共有化合物分析
No． tＲ /min 分子式 化合物 超声 索氏 回流
1 1. 2 C14H20ClNO2 乙草胺 － √ √
2 2. 0 C21H23NO5 别隐品碱 √ － √
3 2. 6 C19H21NO4 波尔丁 √ √ －
4 3. 1 C18H13ClFN3 咪达唑仑 － √ √
5 3. 8 C26H45NO7S 牛磺胆酸 √ － √
6 4. 5 C50H96O6 三酰基甘油 √ － √
7 6. 3 C12H24O2 月桂酸 √ － √
8 7. 6 C15H20N2 吲达品 √ √ －
9 8. 4 C21H24N2 奎核氮卓 √ － √
10 12. 3 C41H68O14 黄芪苷 IV √ － √
11 14. 2 C23H34O5 异羟基洋地黄毒苷元 √ － √
注:“ －”表示未检测到，“√”表示检测到。
图 1 狗脊毛提取物中化合物 32 ～ 39(从左至右)的 UPLC
3 讨论
UPLC /Q-TOF-MS分析定性能力很强，具有高分
离度、高速度、高灵敏度、精确相对分子质量等特
点［8-10］，尤其适用于中药多组分、复杂成分的分离和
定性鉴别。索氏提取法常用于粗脂肪含量的测定，
脂肪广泛存在于植物种子和果实中，而植物茸毛中
报道较少。三酰基甘油类化合物属于植物油脂类，
对人的皮肤具有较好渗透性，易于被人体吸收，本文
索氏提取物中检出较多，这些化合物相对分子质量
不同，推测为不同有机酸与甘油形成的混合甘油酯，
·94·
徐钢，等:狗脊毛甲醇提取物 UPLC /Q-TOF-MS分析
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
可能是狗脊毛中主要成分。另外，抗生素类化合物亦
检出较多，其对体外伤口有一定治疗作用。由表 4 可
知，超声与回流提取方法中共有化合物检出较多，提
示二者提取效能较为相近;而索式提取法在 3 种方法
中检出的化合物最多，说明该方法提取效率高。
［参考文献］
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典．一部［S］．北
京:中国医药科技出版社，2010:208.
［2］ 徐钢，鞠成国，于海涛，等． 中药狗脊炮制研究进展
［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(5):238.
［3］ 王本祥．现代中药药理与临床［M］． 天津:天津科技
翻译出版公司，2004:955.
［4］ 李军．中药狗脊炮制原理研究［D］．大连:辽宁中医药
大学药学院，2001.
［5］ 李洁玉，沈力，周浓，等．回流提取川楝子中川楝素工
艺的优化［J］．安徽农业科学，2011，39(8):4518.
［6］ 蓬莱尚幸，二瓶義人，西岡孝明． 質量分析スペクト
ルデータベースMassBankにおけるSOAP APIサービ
スの開発［J］． J Comput Aided Chem，2011(12) :11.
［7］ Hisayuki H，Masanori A，Shigehiko K，et al. MassBank:a
public repository for sharing mass spectral data for life
sciences［J］． J Mass Spectrom，2010，45(7) :703.
［8］ Wu H X，Yang C Y，Wang Z H，et al. Metabolism profile
of quinocetone in swine by ultra-performance liquid
chromatography quadrupole time-of-flight mass
spectrometry［J］． Eur J Drug Metab Pharmacokinet，
2012，37(2) :141.
［9］ Aznar M，Ｒodriguez-Lafuente A，Alfaro P，et al． UPLC-
Q-TOF-MS analysis of non-volatile migrants from new
active packaging materials［J］． Anal Bioanal Chem，
2012，404(6 /7) :1945.
［10］ Wong M C Y，Warren T K L，Wong J S Y，et al． An
approach towards method development for untargeted
urinary metabolite profiling in metabonomic research
using UPLC /QToF MS［J］． J Chromatogr B，2008，871
(2) :341.
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20131011(015)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(21021063，81273430，31070310) ;重点实验室(SIMM1203ZZ － 03)
［通讯作者］ * 张在龙，教授，博士生导师，从事化学研究，Tel:15153217311，E-mail:zzlyrs@ upc． edu． cn
香樟不同部位脂溶性成分的 GC-MS分析
徐晶1，2，张在龙1* ，王兵2，俞骏岚3，刘海利3，郭跃伟3
(1. 中国石油大学 理学院，山东青岛 266580;2. 潍坊生物医药创新创业服务中心，山东 潍坊 261205;
3. 中国科学院上海药物研究所新药研究国家重点实验室，上海 201203)
［摘要］ 目的:分析比较香樟树枝、树叶、树皮中脂溶性成分。方法:将香樟树枝、树叶、树皮 3 个不同部位分别用甲醇渗
漉提取后再用石油醚萃取，采用 GC-MS法分析和鉴定其脂溶性成分，并用峰面积归一化法计算各成分相对百分含量。结果:
从香樟树枝中共分离鉴定出 10 种化学成分，主要为植醇(49. 64%)、α-松油醇(7. 86%)、橙花叔醇(7. 50%);从香樟树叶中共
分离鉴定出 13 种化学成分，主要为植醇(62. 37%)、橙花叔醇(10. 98%) ;从香樟树皮中共分离鉴定出 19 种化学成分，主要为
α-松油醇(13. 45%)、植醇(8. 10%)、棕榈酸(7. 75%)、丁香酚(6. 82%)、(Z，Z，Z)-9，12，15-十八三烯酸甲酯(5. 90%)、棕榈
酸甲酯(5. 41%)。结论:为进一步探讨香樟不同部位的药理作用及合理开发利用该植物资源提供一定的科学依据。
［关键词］ 香樟;石油醚;脂溶性成分;气相色谱质谱联用
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)07-0050-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfix． 2014070050
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 13422 / j． cnki． syfjx． 000025． html
［网络出版时间］ 2014-01-21 9:29
GC-MS Analysis of Liposoluble Content from Branch，Leaf and Bark
of Cinnamomum camphora
XU Jing1，2，ZHANG Zai-long1* ，WANG Bing2，YU Jun-lan3，LIU Hai-li3，GUO Yue-wei3
·05·
第 20 卷第 7 期
2014 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 7
Apr．，2014