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第 1 8 卷 第 5 期
2016 年 5 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 18 No. 5
May，2016
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非洲木犀榄叶中木犀草苷、橄榄苦苷提取工艺考察
王和宇 1,2，马学盛 3，李春娜 1,4，James Campbell3，秦玲玲 1，张晶 2，徐暾海 1,4，刘铜华 1
（1.北京中医药大学中医养生学教育部重点实验室，北京 100029；2.吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118；
3.西开普大学，南非 开普敦 7535；4.北京中医药大学中药学院，北京 100102）
摘 要：目的：考察非洲木犀榄叶中木犀草苷、橄榄苦苷的最佳提取工艺。方法：采用HPLC法测定非洲木犀
榄叶中木犀草苷、橄榄苦苷的含量，使用超声波提取法进行提取，考察料液比、溶剂分数、提取时间、超声功率对含量
的影响。在单因素的基础上，结合正交试验法选取溶剂分数、料液比、提取时间考察其对提取工艺的影响，确定最佳
提取工艺。结果：非洲木犀榄叶中木犀草苷、橄榄苦苷的最适提取工艺为70%甲醇溶液，料液比为1∶40，超声功率
400 W，提取时间30 min。结论：该方法对非洲木犀榄叶中木犀草苷、橄榄苦苷的提取简单易行，方法可靠。
关键词：非洲木犀榄；高效液相色谱法；木犀草苷；橄榄苦苷；超声波提取法；正交试验；提取工艺考察
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 05- 0072- 03
收稿日期：2015-10-16
基金项目：国家国际科技合作专项项目（2012DFG31550）；北京中医药大学创新团队项目（2011-CXTD-19）
作者简介：王和宇（1989-），男，黑龙江牡丹江人，硕士研究生，研究方向：天然产物化学。
通讯作者：徐暾海（1969-），男，北京人，教授，博士研究生导师，研究方向：中药干预糖尿病及其并发症活性成分及新药研究。
E-mail:thxu@yahoo.com。
Optimum Extraction Process of Luteoloside and Oleuropein in Olea Europaea Subsp. Africana
WANG Heyu1,2，MA Xuesheng3，LI Chunna1,4，James Campbell3，QIN Lingling1，
ZHANG Jing2，XU Tunhai1,4，LIU Tonghua1
（1. Health Cultivation Laboratory of the Ministey Education，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing
100029，China；2. College of Chinese Medicine，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，Jilin，
China；3. School of Natural Medicine，University of the Western Cape，Cape Town 7535，South Africa；
4. Academy of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）
Abstract：Objective：To study the optimized method of extraction luteoloside and oleuropein from Olea
europaea L. subsp. Africana. Methods：The contents of luteoloside and oleuropein in Olea europaea L. subsp.
Africana were measured using HPLC method. The method of extraction luteoloside and oleuropein from olive
was optimized with the assistant of ultrasonic. Four factors below were tested according to the extraction
yield：the ratio of material to solvent，methyl alcohol concentration，extraction time and ultrasonic power，
the optimum extraction conditions of luteoloside and oleuropein in Olea europaea L. subsp. Africana were
determined with ort-hogonal test. Results：The optimum conditions of extracting were obtained as follow：
70% methyl alcohol as extraction solvent at 400 W of Ultrasonic energy for 30 min，and the radio of solvent
to material was 1∶40. Conclusion：The method of extraction luteoloside and oleuropein from Olea europaea
subsp. Africana is simple and good.
Keywords：Olea europaea subsp. Africana；HPLC；luteoloside；oleuropein；ultrasonic energy；
orthogonal test；method of extraction
非 洲 木 犀 榄（Olea europaea L. subsp. Africana）
为木犀科（Oleaceae）木犀榄属（Olea）常绿乔木 [1]，
广泛分布在南非，当地人称它为野生橄榄（Wild
olive）。
其原亚种油橄榄（Olea europaea Linn）被用于
榨取素有“植物油黄金”之称的橄榄油，橄榄油被誉
为最健康的植物油，拥有 4000 年之久的历史，为欧
洲文明繁衍作出重要贡献 [3]。虽然油橄榄被认为是
来源于非洲木犀榄，但在 80 年代初，非洲木犀榄还
是被定义为油橄榄的亚种 [4]。
目前为止，从非洲木犀榄中分离得到的化学成
分主要有萜类 [4]、黄酮类 [5-6]、酚类 [7]、苯丙素类 [8]、游
离醇类 [9] 等。非洲木犀榄具有良好的药理作用，如
降血糖降血压作用 [4，10]、抗氧化作用 [4]、抗动脉粥样
硬化作用 [4]、治疗腹泻作用 [2]、止血作用 [8] 等。其中
所含有的橄榄苦苷、羟基酪醇等被认为是具有良好
活性的原因。
由于非洲木犀榄果实较小不能用于榨油，故一
直未受学者重视，国内国外相关文献报道较少，其研
究远不及油橄榄深入。本实验对非洲木犀榄叶中的
木犀草苷、橄榄苦苷的提取工艺进行研究，旨在为其
进一步开发提供基础。
1 材料与仪器
非 洲 木 犀 榄（O. europaea L. subsp. Africana）
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.05.023
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1 8 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
干 燥 叶 由 南 非 University of the Western Cape 提
供，购 自 南 非 Parceval（Pty）Phamaceuticals，批
号 02000136，保 存 于 北 京 中 医 药 大 学 中 医 养 生
学教育部重点实验室；木犀草苷对照品（批号：
111720-201106，供含量测定用）由中国食品药品
检定研究院提供；橄榄苦苷对照品由北京四面体
生 物 科 技 有 限 公 司 提 供，批 号：32619-42-4，含
量 >98%，供 含 量 测 定 用；色 谱 乙 腈（美 国 Fisher
Scientific 公司）；超纯水（Millipore-Q 制超纯水）。
日本岛津 LC-15C 型高效液相色谱仪（二元泵，恒
温箱，DAD 检测器，LCsolution 工作站，岛津公司，
日本）；瑞士 BUCHI R-215 型旋转蒸发仪；久品 JP-
1000B 型高速多功能粉碎机；KQ-500DE 型数控超
声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；德国赛
多利斯 R200D 型分析天平。
2 方法
2.1 样品处理制备
将非洲木犀榄叶粉碎后过 60 目筛，未过部分
继续粉碎直至粉碎完全，得样品粉末，密封保存于
阴凉干燥处。取约 1.0 g 非洲木犀榄叶干燥粉末，
精密称定后，置于具塞锥形瓶中，加 30 mL 的 60%
甲醇，称重，超声处理 30 min，冷却至室温，补加
60% 甲醇溶剂至前次称重量，滤过，滤渣弃去，滤
液挥干，加甲醇溶解，转置 50 mL 容量瓶内，定容，
避光保存备用。
2.2 对照品制备
精密称取木犀草苷标准品 5.58 mg，橄榄苦苷标
准品 9.80 mg，分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇超
声溶解，放至室温，继续加甲醇定容至刻度，配制成
浓度分别为 558 μg·mL-1 的木犀草苷对照品溶液、
980 μg·mL-1 的橄榄苦苷对照品溶液，冷藏，避光
备用。
2.3 色谱条件
色谱柱：Thermo Syncronis C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流 动 相：乙 腈 -0.1% 磷 酸 水；梯 度 洗 脱：
0~30 min（20∶80~28∶72）；流速 1.0 mL·min-1；柱
温 30 ℃；进样量：20 μL，检测波长：240 nm。
2.4 标准曲线绘制
将“2.2”项下对照品储备液用甲醇逐级稀释
成不同浓度的对照品溶液，木犀草苷的浓度依次为
13.95、27.9、55.8、111.6、223.2、446.4、558 μg·mL-1，
橄榄苦苷的浓度依次为 24.5、49、98、196、392、784、
980 μg·mL-1，精密吸取不同浓度的对照品溶液各
20 μL，在“2.3”项色谱条件下进样测定，记录峰面
积，以对照品浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为
纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程和相关系数，
见表 1。
表 1 木犀草苷、橄榄苦苷线性回归
方程、相关系数和线性范围
成分 线性回归方程 R2 值 线性范围（μg·mL-1）
木犀草苷 Y=43668X+32046 0.9999 13.95~558
橄榄苦苷 Y=25766X-331016 0.9993 24.5~980
2.5 精密度试验
分别精密吸取一定浓度的木犀草苷、橄榄苦
苷对照品混合溶液，混合均匀，连续进样 6 次，每次
20 μL，记录各对照品峰面积，RSD 分别为 1.58%、
1.11%，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
按“2.1”项操作制备供试品溶液，常温放置，
分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样，每次 20 μL，记录峰
面积，样品中木犀草苷、橄榄苦苷不同时间测定的
峰面积 RSD 分别为 0.73%、0.50%。表明供试品溶
液在 24 h 内稳定。
2.7 重复性试验
精密称非洲木犀榄叶粉末 6 份，分别测定，计算
样品中各待测成分含量。结果木犀草苷、橄榄苦苷
含量的 RSD 分别为 0.51%、0.98%。
2.8 单因素实验
2.8.1 料液比对提取率的影响
取 5 份非洲木犀榄叶粉末每份 1 g，精密称定置
具塞锥形瓶中，分别加入不同料液比（1∶10、1∶20、
1∶30、1∶40、1∶50）体积的溶剂，其余依照“2.1”
的实验操作步骤，每份测定 3 次后结果取平均值。
料液比对提取物中木犀草苷、橄榄苦苷含量的影响
如图 1（A）所示，随着提取液用量的增加，提取率先
增加，当料液比达到 1∶30 时，含量不再增加，为了
节省试剂和降低成本，料液比以 1∶30 为宜。
2.8.2 溶剂分数对提取率的影响
取 5 份非洲木犀榄叶粉末每份 1 g，精密称定
置具塞锥形瓶中，分别加入不同浓度的甲醇溶液
（50%、60%、70%、80%、90%）各 30 mL，其 余 采 用
“2.1”的实验操作步骤，每份测定 3 次后结果取平均
值。由图 1（B）可知，木犀草苷、橄榄苦苷的提取
率随甲醇的体积分数增加呈先上升后下降的趋势。
甲醇体积分数为 80% 时提取率最高，故选用 80% 甲
醇。
2.8.3 提取时间对提取率的影响
取 5 份非洲木犀榄叶粉末每份 1 g，精密称定置
具塞锥形瓶中，分别进行 10、20、30、40、50 min 的提
取，溶剂为 80% 甲醇 30 mL，其余采用“2.1”的实验
操作步骤，每份测定 3 次后结果取平均值。由图 1
（C）可知，木犀草苷、橄榄苦苷的提取率随着时间
的延长而呈升高趋势，当提取时间长于 30 min 后，
提取率基本持平，为了节省资源和降低成本，提取
时间为 30 min 为宜。
2.8.4 超声功率对提取率的影响
取 5 份非洲木犀榄叶粉末每份 1 g，精密称定
置具塞锥形瓶中，分别采用 100 W、200 W、300 W、
400 W、500 W 功率超声进行提取，溶剂为 80% 甲
醇 30 mL，提取 30 min，其余采用“2.1”的实验操
作步骤，每份测定 3 次后结果取平均值。由图 1
（D）可知，不同超声功率对木犀草苷、橄榄苦苷的
提取率影响不大，故沿用“2.1”的实验操作步骤
中的 400W 功率。
0
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0 10 20 30 40 50 60
料液比（1:x）/ml
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
0
10
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0 10 20 30 40 50 60
料液比（1:x）/ml
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
料液比（1∶x）（mL）
A
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0
10
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50
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40 50 60 70 80 90 100
甲醇体积分数/%
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
0
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0 10 20 30 40 50 60
料液比（1:x）/ml
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
甲醇体积分数（%）
B
0
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70
80
0 10 20 30 40 50 60
时间/min
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
0
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20
30
40
50
60
70
0 10 20 30 40 50 60
料液比（1:x）/ml
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
时间（min）
C
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0 100 200 300 400 500 600
超声功率/W
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
0
10
20
30
40
50
60
70
0 10 20 30 40 50 60
料液比（1:x）/ml
含
量
（
mg
/g
）
木犀草苷
橄榄苦苷
超声功率（W）
D
图 1 料液比（A）、溶剂分数（B）、提取时间（C）、超声功率
（D）对非洲木犀榄叶中木犀草苷、橄榄苦苷含量的影响
2.9 正交试验确定最佳提取条件
为了全面考察影响因素，设计了 L9（3
4）三因
素四水平的正交试验，如表 2 所示，考察提取液料液
比、溶剂分数、提取时间对木犀草苷、橄榄苦苷含量
的影响，试验结果见表 3~ 表 4。可以看出，超声波法
对提取非洲木犀榄叶中木犀草苷和橄榄苦苷的最佳
条件为 A3B3C2，即 70% 甲醇溶液，1∶40 液料比，超声
400 W 提取 30 min。
表 2 非洲木犀榄叶中木犀草苷、橄榄
苦苷正交试验 L9（3
4）设计表
试验号 A 料液比 B 溶剂分数（%） C 提取时间（min）
1 1∶20 50 20
2 1∶30 60 30
3 1∶40 70 40
表 3 非洲木犀榄叶中木犀草苷正交试验结果
试验号 A 料液比
B 溶剂分
数（%）
C 提取时
间（min）
-
含量
（mg/g）
1 1∶20 90 20 - 6.27
2 1∶20 80 30 - 6.63
3 1∶20 70 40 - 6.79
4 1∶30 90 30 - 6.50
5 1∶30 80 40 - 6.80
6 1∶30 70 20 - 6.69
7 1∶40 90 40 - 6.57
8 1∶40 80 20 - 6.82
9 1∶40 70 30 - 7.10
T
1
值 19.70 19.34 19.78 20.18
T
2
值 19.99 20.25 20.23 19.89
T
3
值 20.49 20.58 20.16 20.11
R 值 0.79 1.24 0.45 0.29
最优方案 A3 B3 C2
表 4 非洲木犀榄叶中橄榄苦苷正交试验结果
试验号 A 料液比
B 溶剂分
数（%）
C 提取时
间（min）
-
含量
（mg/g）
1 1∶20 90 20 - 64.82
2 1∶20 80 30 - 67.32
3 1∶20 70 40 - 67.99
4 1∶30 90 30 - 65.55
5 1∶30 80 40 - 69.07
6 1∶30 70 20 - 67.99
7 1∶40 90 40 - 65.66
8 1∶40 80 20 - 67.95
9 1∶40 70 30 - 71.12
T
1
值 200.13 196.03 200.76 205.00
T
2
值 202.61 204.34 203.99 200.97
T
3
值 204.73 207.09 202.71 201.49
R 值 4.60 11.06 3.24 4.04
最优方案 A3 B3 C2
3 结果与分析
3.1 影响程度
通过单因素试验证明，对非洲木犀榄叶中木犀
草苷、橄榄苦苷提取率的影响程度大小依次是液料
比，溶剂分数，提取时间，超声功率。
3.2 流动相的选取
本实验比较了几种 HPLC 的流动相：甲醇 - 水、
乙腈 - 水、乙腈 -0.1% 磷酸水，发现乙腈 -0.1% 磷酸
水为流动相时，几种成分的分离效果较好、峰形尖
锐、对称性好，同时与其他成分达到基线分离。
3.3 结论
正交试验结果表明，非洲木犀榄叶中木犀草
苷、橄榄苦苷的最佳提取工艺参数为：提取时间
为 30 min，最佳提取料液比为 1∶40，甲醇浓度为
70%。◆
参考文献
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出版社，1992：61，123.
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