全 文 ：而采用 MeOH-1%冰 Hac( 3∶ 97) ,得到的天麻素峰
峰形较对称 ,分离度好。阴性对照样品无干扰。
参考文献
[1 ]　陈发奎 .常用中草药有效成分含量测定 [M ] .北京:人民卫生出
版社 , 1997. 103.
[ 2 ]　国家药典委员会 . 中国药典 (一部 ) [S ] .北京:化学工业出版
社 . 2000. 44, 383, 454.
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[ 4]　王慕邹 ,陈颜亨 ,相乐和彦 ,等 .常用中草药高效液相色谱分析
[M ].北京:科学出版社 , 1999. 151.
(收稿日期 2003-06-25)
Determination of Gastrodin in Compound Tianma Capsule by HPLC
FANG Xiao-ming
( Anhui Prov incial Insti tute for Drug Contro l, Hefei230061, China)
　　 Abstract: Objective　 To determine gast rodin in Compound Tianma Capsule by HPLC. Methods　
HPLC analy sis w as ca rried out wi th Cl8column and methano l-1% acetic acid glacial ( 3∶ 97) as the mobi le
pha se. The detection waveleng th was 270 nm. Results　 The linear range was 0. 498 5～ 2. 991μg(r= 0. 999
97 ,n= 6) . The average recovery w as 96. 62% , RSD was 1. 20% . Conclusion　 The method is simple, reli-
able and sensi tiv e. It can be used in quality cont rol of Compound Tianma Capsule.
　　Key words: Compound Tianma Capsule; ga st rodin; HPLC
薄膜衣大黄栀子片的质量标准研究
刘业飞 1 ,陶良宝2
( 1.安徽省巢湖市药品检验所 ,安徽 巢湖 238000;
2.上海海虹实业 (集团 )巢湖中辰药业有限公司 ,安徽 巢湖 238000)
　　摘要:目的　对薄膜衣大黄栀子片的质量标准研究。方法　采用薄层色谱法对处方中药材进行了定性鉴
别 ,并采用分光光度法对方中总的蒽醌类化合物 ( C14H8O4 )的含量进行了测定。 结果　薄层分离效果好 ,回收
率 R SD < 3% 。 结论　该方法比较简单 ,重现性好 ,可作该制剂质量控制标准。
　　关键词:薄膜衣大黄栀子片 ;鉴别 ;总蒽醌类化合物 ( C14H8O4 ) ;质量标准
　　中图分类号: R284. 1　　　　文献标识码: A　　　　文章编号: 1004-2199( 2004) 04-0052-03
　　薄膜衣大黄栀子片主要是由大黄、栀子、黄连等
多味中药的有效部位组成的复方制剂 ,具有清热通
便 ,散风止痛的功效。 用于头晕目眩 ,暴发火眼 ,牙
痛 ,口舌生疮 ,咽喉肿痛 ,耳痛耳鸣 ,大便秘结 ,小便
短赤。为了确保药品的质量 ,我们对方中大黄、栀子、
黄连进行了薄层色谱鉴别研究 ,并采用分光光度法
对方中总的蒽醌类化合物 ( C14 H8 O4 )的含量进行了
测定 [1 ]。 该方法比较简单 ,重现性好 ,可作该制剂质
量控制标准。
1　仪器与试药
TU-1221型紫外分光光度计 北京市通用仪器
设备公司 ; GB-204电子分析天平 上海天平仪器厂 ;
M ett ler Toledo 电子分析天平上海天平仪器厂 ;
UV-8紫外光灯 上海分析仪器厂 ; CMC-Na硅胶
H、 G板 (青岛海洋化工厂 )
对照品: 1. 8-二羟基蒽醌 ( 1. 8-Dihydro xy an-
th raquinone )盐酸小檗碱 ( Berberine hydrochlo-
ridew e)、大黄素 ( Emodin)、大黄酚 ( Chry sopano l)、
—52— 现代中药研究与实践 2003年第 17卷第 4期Resear ch and Practice o f Chinese MedicinesDOI : 10. 13728 /j . 1673 -6427. 2003. 04. 022
栀子苷 ( Geniposide)对照品 (中国药品生物制品检
定所提供 ) ;薄膜衣大黄栀子片 (自制 ) ;乙醚、氢氧化
钠、氨水、硫酸、氯仿等其它试剂均为分析纯。
2　薄膜衣大黄栀子片的鉴别 [2 ]
2. 1　黄连的鉴定　取本品内容物 1. 5 g ,研细 ,加甲
醇 10 m l,置水上加热回流 15 min,滤过 ,滤液补加
甲醇使成 10 ml,作为供试品溶液 ;取盐酸小檗碱对
照品 ,加甲醇制成每 1 m l含 0. 5 mg的溶液 ,作为对
照品溶液。吸取上述二种溶液各 5μl,点于含 0. 3%
CMC-Na硅胶 G薄层板上 ( 5 cm× 10 cm、 0. 3～ 0. 5
μm厚 ) ,以苯-醋酸乙酯 -异丙醇-浓氨水 ( 6∶ 3∶ 1. 5
∶ 1. 5∶ 0. 5)为展开剂 ,置氨蒸汽饱和的层析缸内 ,
展开。取出 ,晾干 ,置紫外灯光 ( 365 nm)下观察。供
试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同
颜色荧光斑点 ,而阴性液则无。 见图 1。
2. 2　大黄的鉴定 [3 ]　取本品内容物 0. 3 g ,研细 ,加
甲醇 20 ml ,浸渍 1 h,滤过 ,取滤液 5 ml ,蒸干 ,加水
10 ml使溶解 ,再加盐酸 1 ml ,置水浴上加热 30
min,立即冷却 ,用乙醚提取 2次 ,每次 20 m l,合并
乙醚液 ,蒸干 ,残渣加氯仿 1 ml使溶解 ,作为供试品
溶液取大黄对照药材 0. 1 g ,同法制成对照药材溶
液 ,再取大黄酸对照品 ,加甲醇制成每 1 ml含 1 mg
的溶液 ,作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各 5
μl,点于含 0. 3% CMC-Na硅胶 H薄层板上 ( 5 cm×
10 cm、 0. 3～ 0. 5μm厚 ) ,以石油醚 ( 30～ 60℃ )-甲
酸乙酯 -甲酸 ( 15∶ 5∶ 1)的上层溶液为展开剂 ,展
开。取出 ,晾干 ,置紫外灯光 ( 365 nm )下观察。供试
品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同
五个荧光斑点 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相
同橙黄色荧光斑点 ,置氨气中熏后 ,斑点变为红色。
见图 2。
图 1黄连薄层色谱图 图 2大黄薄层色谱图 图 3栀子苷薄层色谱图
　 1.盐酸小檗碱对照品　 1.大黄素对照品　　 1.栀子苷对照品
　 2.供试品　　　　　　 2.供试品　　　　　 2.供试品　　　
　 3.空白　　　　　　　 3.大黄酚对照品　　 3.空白液　　　
　　　　　　　　　　　 4.空白　　　　　　　　　　　　　　　
2. 3　栀子的鉴定 [4～ 6 ]　取本品除去薄膜衣 ,研细后
称取 20 g ,加 75%的甲醇 30 m l,浸渍过夜 ,滤过 ,滤
液作为供试品溶液。 取栀子苷对照品 ,加 75%的甲
醇制成每 1 m l含 4 mg的溶液 ,作为对照品溶液。分
别吸取上述两种溶液各 5μl,点于含 0. 3% CMC-Na
硅胶 G薄层板上 ( 5 cm× 10 cm、 0. 3～ 0. 5μm厚 ) ,
以氯仿-甲醇 ( 3∶ 1)为展开剂 ,展开。 取出 ,晾干 ,喷
以 50%的硫酸乙醇溶液 ,在 110℃烘至斑点显色清
晰。 见图 3。
3　总蒽醌类化合物 ( C14 H8O4 )的含量测定
3. 1　测定波长的选择　取 1, 8-二羟基恩醌对照品
适量约 10 mg ,置 100 ml量瓶中 ,加乙醚溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,再取 4 m l至 25 ml量瓶中 ,水浴挥
去乙醚 ,加混合碱液 ( 10%氢氧化钠+ 4%氨水等体
积混合 )至刻度 ,用紫外分光光度计于 400～ 600 nm
范围内扫描 ,绘制吸收光谱图 ,结果表明 1, 8-二羟
基恩醌对照品 ,在选定的溶剂条件下 , 520 nm处具
最大吸收峰。故采用 520 nm为检测波长。
3. 2　线性关系考察　对照品溶液的制备精密称取
对照品 1, 8-二羟基蒽醌适量 ,于 105℃干燥至恒重
( 105℃ 5 h: 10. 435 1 g; 105℃ 1 h: 10. 434 9 g ) ,再
取恒重后的对照品 10. 0 mg ,置 100容量瓶中 ,加乙
醚溶解并稀释至刻度 ,摇匀。 精密吸取对照品溶液
1、 2、 3、 4、 5 ml,分别置 25 ml容量瓶中 ,于水浴上蒸
去乙醚加混合碱液 (取 10%氢氧化钠与 4%氢氧化
铵溶液等量混合 )至刻度 ,摇匀 ,室温下暗处放置 30
min,照分光光度法 (《中国药典》 2000年版一部附
录 ) ,以试剂为空白 ,在 520 nm波长处测定吸收度 ,
以吸收度为纵坐标 Y ,浓度为横坐标 X ,回归方程为
Y= 0. 031 55X+ 2. 4× 10- 3 , r= 0. 999 98,线性范围
为 4. 0～ 20. 0μg /ml。
3. 3　样品测定　取本品 10片 ,除去薄膜衣后 ,研
细 ,精密称取本品两份。共 10个批号 , 20份样品。加
硫酸溶液 ( 2. 5 mol /L ) 30 m l,直火缓缓回流 2 h ,用
滴管吸出氯仿 20 ml ,回流 30 min,吸出氯仿液 ,如
此重复回流提取 ,直至氯仿提取液无色为止 ,合并氯
仿液 ,用少量蒸馏水洗涤 ,氯仿液用混合碱液提取 5
次 ( 20、 20、 20、 15、 15 ml) ,合并碱液 ,用少量氯仿洗
涤 ,弃去洗液 ,碱液在沸水浴中加热 4 min,用水冷
却碱液至 100 m l容量瓶中 ,摇匀。 照 3. 2项下 ,自
“室温下暗处放置 30 min…”依法测定吸收度。结果
见表 1。
—53—现代中药研究与实践 2003年第 17卷第 4期Resear ch and Practice of Chinese Medicines
表 1　薄膜衣大黄栀子片中蒽醌类化合物的含量测定
批号 取样量
( g )
吸收度 浓度%
(μg· ml- 1 )
含量
( g· g- 1 ) 平均含量 R SD(% )
010112 0. 1502 0. 479 15. 1062 1. 01 1. 02 1. 38
0. 1583 0. 518 16. 3423 1. 03
010113 0. 1511 0. 489 15. 4231 1. 02 1. 02 0
0. 1537 0. 497 15. 6767 1. 02
010114 0. 1542 0. 528 16. 6592 1. 08 1. 08 0. 65
0. 1546 0. 536 16. 9128 1. 09
010115 0. 1524 0. 507 15. 9936 1. 04 1. 05 1. 35
0. 1541 0. 519 16. 3740 1. 06
010116 0. 1562 0. 530 16. 7226 1. 07 1. 05 2. 01
0. 1526 0. 506 15. 9619 1. 04
3. 4　精密度实验　取同一供试品溶液 (批号
010112) ,在选定的条件下 ,依法操作 , 重复进样测
定 5次 ,测定 1, 8-二羟基蒽醌 ( C14 H8O4 )含量 ,计算
相对标准偏差。结果 RSD= 0. 43% (n= 5)
3. 5　稳定性实验　取上述供试品溶液 (批号
010112) ,放置 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6后 ,依法测定 1, 8-二
羟基蒽醌 ( C14 H8O4 )含量 ,结果样品稳定性较好 ,
RSD= 0. 52。
3. 6　重复性实验　取同一供试品 (批号 010112) ,
按供试品溶液的制备方法制备 5份供试品溶液 ,依
法测定 ,计算含量及相对标准偏差 ,结果 RSD=
1. 61% (n= 5)。
3. 7　空白实验　以相同的处方比例 ,按正文“供试
品溶液的制备”方法制备不含大黄药材的阴性对照
品溶液。按上述色谱法测定。结果阴性对照品在 520
nm处 , 无 1, 8-二羟基蒽醌 C14 H8 O4吸收峰。
3. 8　加样回收率实验　精密称取已知含量的样品
溶液 (批号 010112,含量 1. 02% ( g /g ) ) 0. 4～ 0. 6
m l,精密加入一定的 1, 8-二羟基蒽醌 ( C14 H8O4 )对
照品含量 ,依法测定 ,计算回收率 ,见表 2, RSD=
0. 90% , < 3% ,平均回收率= 98. 77% ,故认为此方
法可用于测定总蒽醌类化合物 ( C14 H8 O4 )的含量。结
果见表 2。
3. 9　含量限度的确定 [ 7]　根据所测 10批样品中 ,
薄膜衣大黄栀子片含量最高为 1. 11% ( g /g ) ,最低
为 1. 01% (g /g ) ,考虑到工业生产因素 ,并参照中药
制剂含量限度规定的一般方法 ,暂定含量限度为本
品含大黄按 1, 8-二羟基蒽醌 ( C14 H8O4 )计算 ,应不少
于 0. 8% (g /g )。
表 2　样品 (批号 010112)加样回收率实验结果
No
样品中量*
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收量
(μg )
回收率
(% )
平均
(% )
RSD
(% )
1 1500. 0 510. 0 2004. 8 504. 7 98. 98
2 1511. 0 530. 0 2028. 2 517. 2 97. 60
3 1625. 0 640. 0 2257. 2 632. 2 98. 78 98. 77 0. 90
4 1618. 0 660. 0 2264. 1 646. 1 97. 89
5 1754. 0 710. 0 2460. 9 706. 9 99. 56
6 1748. 0 730. 0 2476. 8 728. 8 99. 83
4　结果与讨论 [8 ]
在本品的定性中 ,我们采用了薄层色谱鉴别的
方法 [9 ] ,结果在薄层色谱图上 ,大黄素、大黄酚、盐酸
小檗碱、栀子苷等斑点分离清晰 ,无杂质干扰 [10 ]。
1, 8-二羟基蒽醌 ( C14 H8O4 )的含量测定方法很
多 ,有紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱
法等。以 1, 8-二羟基蒽醌 ( C14 H8O4 )为对照品 ,应用
紫外分光光度法并结合回归法 (标准曲线法 ) ,对其
中的恩醌类衍生物的含量进行了测定 ,同时作了方
法学研究 ,结果表明 ,在选定的光谱条件下 ,复方制
剂中的其他成分不干扰其中蒽醌类衍生物的含量测
定 ,该法回收率高 ,测定结果比较准确 ,重现性好。
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(收稿日期: 2003-07-20)
—54— 现代中药研究与实践 2003年第 17卷第 4期Resear ch and Practice o f Chinese Medicines