全 文 ：第 23卷　第 4期 文山学院学报 Vol.23　No.4
2010年 12月 JOURNALOFWENSHANUNIVERSITY Dec.2010
瓶尔小草黄酮类化合物的分离及紫外光谱鉴定
张志信 , 张仕秀
(文山学院 生化系 , 云南 文山 663000)
收稿日期: 2010-01-16
作者简介:张志信(1970-), 男 , 云南砚山人 , 副教授 , 硕士 , 主要从事天然药物研究;张仕秀(1968 -), 女 , 云南大
理人 , 高级实验师 , 主要从事分析化学理论及实验教学。
摘要:采用乙醇回流提取 、 聚酰胺柱层析的方法对瓶尔小草中黄酮类化合物进行提取分离纯化 , 得到黄
酮化合物的不同组分 , 通过紫外光谱 (UV)对不同组分进行分析。结果表明 , 从瓶尔小草中分离的黄酮类
化合物母核上主要有 4′-OH、 2-OH、 7-OH、 5 , 7-二 -OH结构 。
关键词:瓶尔小草;黄酮类化合物;紫外光谱
中图分类号:Q949.749　文献标识码:A　文章编号:1674-9200(2010)04-0141-03
　　瓶尔小草科植物瓶尔小草 (Ophioglosumvulga-
tumL.)又称一支箭 、一支枪 、 独叶一支箭 、 单枪
一支箭 、一矛一盾 、矛盾草 、蛇须草 。以全草入药 ,
清热解毒 , 消肿止痛。用于小儿肺炎 , 脘腹胀痛 ,
毒蛇咬伤 , 疔疮肿毒;外用治急性结膜炎 , 角膜云
翳 , 眼睑缘炎。分布东北 、 陕西 、 湖北 、云南 、 贵
州 、广西 、 台湾及长江下游等地 [ 1-2] 。
黄酮类化合物广泛存在于植物中 , 生理活性作
用广泛 , 能维持血管正常的渗透压 、 防止血管脆化 ,
对多种炎症 、 冠心病 、 心绞痛等均有良好的疗效。
同时 , 黄酮类化合物还是一种良好的活性自由基清
除剂 , 具有调整免疫和内分泌作用 , 还有抗癌 、 抗
炎等多种医疗保健作用 , 是一类重要的生物活性因
子 。据文献报道瓶尔小草中主要含 3-O-甲基槲皮
素 、 7-O-双葡萄糖苷 、 4′-O-葡萄糖苷 [ 3] 。瓶
尔小草功效与黄酮类化合物有着密切关系 , 实验通
过探讨瓶尔小草中黄酮类化合物的提取 、 紫外光谱
分析 , 从而判断瓶尔小草中黄酮类化合物的特性 ,
为充分利用瓶尔小草资源提供依据。
1　仪器 、 试剂及材料
1.1仪　器
UV-2550紫外分光光度计 (日本岛津), R-
201旋转蒸发器 (上海申顺生物科技有限公司),
DZF-6020型真空干燥箱 (上海 -恒科技有限公
司), DHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱 (上海
跃进医用光学器械厂), XA-1型高速万能植物粉
碎机 (江苏姜堰市洪林电器设备厂)。
1.2试　剂
乙醇 , 甲醇 , 盐酸 , 氯化铝 , 硅胶板 , 氢氧化
钠 , 硼酸 , 醋酸钠 , 冰乙酸 , 正丁醇 , 氯化铁均为
分析纯 。
1.3材　料
瓶尔小草 , 购于文山县中草药市场 , 经文山学
院沐建华老师鉴定为瓶尔小草科植物瓶尔小草 。
2　实验方法
2.1黄酮类化合物的提取
瓶尔小草洗净称取烘干后粉碎 , 过 60目筛 , 取
100g, 加 8倍量的 75%乙醇回流提取 1.5 h, 重复
提取 3次 , 合并 3次提取液抽滤 , 滤液浓缩至浸膏
状 , 加 1 /3倍量聚酰胺粉拌成糊状 , 60 ℃真空干燥
后研磨成细粉备用。[ 4]
2.2聚酰胺树脂的预处理
以 95%乙醇浸泡 24h后 , 4倍体积 95%乙醇洗
脱 , 控制流速 1mL/min, 再以大量蒸馏水洗至无醇
味 , 备用。
2.3分离纯化
取处理好的聚酰胺粉 , 均匀放置于聚酰胺柱顶
端 , 用蒸馏水洗至颜色极淡 , 再分别用 10%,
30%, 50%, 70%和 90%的乙醇溶液作为洗脱剂 ,
以 1 mL/min流速依次洗脱 , 分别收集各梯度洗脱
液 , 减压浓缩至干 , 重结晶。
2.4紫外光谱特性
将样品分别用甲醇溶解 , 制备成 0.04 mg/mL
的溶液 , 然后在 UV-2550紫外分光光度计上测定 ,
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第 23卷 文山学院学报 2010年　第 4期
以甲醇作参比液 , 扫描范围为 200 ～ 600 nm, 再在
提取物的甲醇溶液中加入不同的诊断剂 , 以无水甲
醇作参比进行扫描。[ 5-6]
3　结果与分析
选取各种浓度的乙醇洗脱液进行紫外光谱特性
分析 , 分别得到 10%, 30%, 50%, 70%和 90%乙
醇洗脱液的紫外特征情况 , 结果见表 1 ～ 5所示 。
表 1　10%乙醇洗脱液的紫外特征
诊断剂 紫外特征 (nm) 结构
无水甲醇 带Ⅰ (331 ～ 340), 带Ⅱ (260) 黄酮醇
三氯化铝 带 Ⅰ 红移 59 nm, 带 Ⅱ 红移
14nm A、 B环上同时有邻二酚 -OH有 6, 7-二 -OH或 7, 8-二 -OH
醋酸钠 带Ⅰ红移 5nm, 带Ⅱ红移 6 nm 橙酮有 6-OH或 4′-OH;查耳酮有 4-OH或 4′-OH、 7-OH
甲醇钠 带Ⅰ红移 53 nm, 带Ⅱ不红移 有 4′-OH或 7-OH, A环无羟基
三氯化铝 /盐酸 无明显变化
醋酸钠 /硼酸 无明显变化
表 2　30%乙醇洗脱液的紫外特征
诊断剂 紫外特征 (nm) 结构
无水甲醇 带Ⅰ (300～ 340), 带 Ⅱ (241～ 280) 黄酮
三氯化铝 带Ⅰ红移 55 nm, 带Ⅱ红移 17 nm A、 B环上同时有邻二酚OH有 6, 7-二-OH或 7, 8-二 -OH
醋酸钠 带Ⅰ红移 5nm, 带Ⅱ红移 6 nm 橙酮有 6-OH或 4′-OH;查耳酮有 4-OH或 4′-OH、 7-OH
甲醇钠 带Ⅰ红移 53 nm, 带Ⅱ红移 7 nm 有 4′-OH或 7-OH　A环无羟基
三氯化铝 /盐酸 无明显变化
醋酸钠 /硼酸 无明显变化
表 3　50%乙醇洗脱液的紫外特征
诊断剂 紫外特征 (nm) 结构
无水甲醇 带Ⅰ (331 ～ 340), 带Ⅱ (260) 黄酮醇
三氯化铝 带Ⅰ红移 59 nm, 带Ⅱ红移 14 nm A、 B环上同时有邻二酚 OH　有 6, 7-二 -OH或 7, 8-二 -OH
醋酸钠 带Ⅰ红移 5nm, 带Ⅱ红移 6 nm 橙酮有 6-OH或 4′-OH;查耳酮有 4-OH或 4′-OH有 7-OH
甲醇钠 带Ⅰ红移 53 nm, 带Ⅱ不红移 有 4′-OH或 7-OH, A环无羟基
三氯化铝 /盐酸 无明显变化
醋酸钠 /硼酸 无明显变化
表 4　70%乙醇洗脱液的紫外特征
诊断剂 紫外特征 (nm) 结构
无水甲醇 带Ⅰ (300～ 340), 带 Ⅱ (220～ 270) 黄酮醇
三氯化铝 带Ⅱ红移 49 nm 有 3-OH, 6, 7-二 -OH或 7, 8-二 -OH
醋酸钠 带Ⅰ红移 19 nm
醋酸钠 带Ⅱ红移 43 nm 5-去氧二氢黄酮
甲醇钠 带Ⅰ红移 65 nm 查耳酮有 4′-OH或 2-OH
甲醇钠 带Ⅱ红移 47 nm 有 5, 7-2OH
三氯化铝 /盐酸 带Ⅱ红移 39 nm 有 5-OH
醋酸钠 /硼酸 带Ⅰ红移 32 nm B环上有邻二酚 -OH
醋酸钠 /硼酸 带Ⅱ红移 39 nm
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张志信 , 等:瓶尔小草黄酮类化合物的分离及紫外光谱鉴定
表 5　90%乙醇洗脱液的紫外特征
诊断剂 紫外特征 (nm) 结构
无水甲醇 带Ⅰ (320 ～ 350), 带Ⅱ (220 ～ 270) 黄酮醇
三氯化铝 带Ⅱ红移 15 nm 有 6, 7-二 -OH或 7, 8-二 -OH
醋酸钠 吸收带随时间的延长而衰退 有 5, 6, 7或 5, 7, 8或 3, 3′, 4′-三 -OH
甲醇钠 带Ⅰ红移 55 nm, 带Ⅱ红移 12 nm 有 4′-OH或 7-OH
三氯化铝 /盐酸 无明显变化
醋酸钠 /硼酸 无明显变化
4　结　论
由 10%, 30%, 50%, 70%和 90%乙醇洗脱液
的紫外光谱特性分析可知 , 在无水甲醇溶液作为溶
剂的溶液中 , 其紫外特征在带 Ⅰ (300 ～ 400 nm),
带 Ⅱ (220 ～ 280 nm)处都有明显的吸收峰 , 当在
不同乙醇浓度的洗脱液的甲醇溶液中加入不同的诊
断剂后 , 其吸收峰都发生了明显的红移现象。在溶
有醋酸钠的甲醇溶液中加入硼酸后 , 因结构中邻二
酚羟基可在醋酸钠的碱性条件下与硼酸鳌合 , 引起
相应的峰带红移 , 在 70%乙醇洗脱液中此红移现象
较明显 , 可判断此提取物中的黄酮类化合物结构中
含有 B环上有邻二酚 OH。当加入甲醇钠后立即测
定 , 90%乙醇洗脱液带 Ⅰ红移 55 nm, 由此可判断
其母核上含有有 4′-OH或 7 -OH;70%乙醇洗脱
液带Ⅰ红移 65 nm, 由此可判断其母核为查耳酮则
含有 4′-OH或 2-OH, 带 Ⅱ红移 47 nm, 有 5, 7
-二 -OH;50%乙醇洗脱液带 Ⅰ红移 53 nm, 由此
可判断其母核上含有 4′-OH或 7 -OH, 30%乙醇
洗脱液带Ⅰ红移 53 nm则母核有 4′-OH或 7-OH,
带 Ⅱ红移 7nm, A环无羟基 10%乙醇洗脱液带Ⅰ红
移 53nm由此可判断其母核上有 4′-OH或 7-OH,
带 Ⅱ不红移 A环无羟基 [ 7] 。
参考文献:
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DisociationandUVSpectraIdentificationofFlavonoid
CompoundsinSerpentsTongue
ZHANGZhi-xin, ZHANGShi-xiu
(DepartmentofBiologyandChemistry, WenshanUniversity, Wenshan663000, China)
Abstract:Flavonoidcompoundsinserpentstongueareextracted, dissociatedandpurifiedbythemethodof
ethanolextractionandpolyamidecolumnchromatographyanddiferentcomponentsinflavonoidcompoundsareob-
tained.DiferentcomponentsareanalyzedwiththeUVspectrumandtheresultshowsthat4′-OH, 2-OH, 7-OH, 5,
7-=-OHstructuresaremainlycontainedinmothernucleusofflavonoidcompoundsdissociatedfromserpentstongue.
Keywords:serpentstongue;flavonoidcompounds;UVspectra
(责任编辑　张　铁)
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