全 文 ：《本草经疏》中提到“不宜专用及多用”。后世多接受典籍的记
载，而认为紫菀无毒。
文献报道［4］，紫菀中所含的皂苷类成分由于具有溶血作用，
粗制剂不宜注射用。本课题组的研究表明紫菀的水提物和醇提
物均有毒性，且随着醇浓度升高毒性增强。本文以急性毒性为指
标，对粗毒性部位即醋酸乙酯部位进行了进一步的追踪，得到了
更为精制的毒性部位。紫菀所含主要化学成分为萜类及其皂苷、
肽类、香豆素、蒽醌及黄酮类、有机酸及酚类等［5］，哪一类或哪几
类化合物是毒性成分，以及是否与其有效部位及有效成分相同，
还需深入研究。
本实验研究结果表明，紫菀毒性部位的 LD50为 0． 052 g /kg，
可见其毒性不容忽视。紫菀毒性部位采用小鼠单次灌胃给药，
LD0 剂量下可引起小鼠血清中 ALT 和 AST 升高，TBIL 值没有差
异性变化，推断低剂量下紫菀毒性部位可引起轻度肝损伤，但可
能与胆汁淤积无关。组织病理学检查结果表明，LD0 剂量下小鼠
肝细胞呈轻度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死，肝小叶及汇管区
见有炎细胞浸润;LD100剂量下小鼠肝小叶结构破坏，肝索排列紊
乱，肝细胞呈不同程度脂肪变性、细胞水肿，可见肝细胞坏死、肝
小叶及汇管区均见有炎细胞浸润。说明单次给药后，LD0 剂量下
可引起小鼠肝脏轻微损伤，与生化指标测定结果一致，LD100剂量
下可引起显著的急性肝损伤，并导致死亡。但其小剂量是否有毒
性蓄积作用以及肝损伤机制，有待进一步研究。
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收稿日期:2009-09-25; 修订日期:2010-06-10
基金项目:广西壮族自治区科学研究与技术开发计划项目(No． 0322024-5E)
作者简介:欧灿纯(1975-)，女(汉族)，湖南韶山人，现任南宁市第五人民医
院副主任药师，学士学位，主要从事抗癌药和抗精神失常药研究工作．
* 通讯作者简介:黄仁彬(1955-) ，男(汉族) ，广西灵山人，现任广西医科
大学教授，博士生导师，博士学位，主要从事抗肝炎药和抗心血管疾病药
研究工作．
复方六月雪对鸭乙型肝炎的保护作用研究
欧灿纯1，2，张士军1，付书婕1，黄建春1，黄仁彬1*
(1． 广西医科大学药学院，广西 南宁 530021; 2． 广西壮族自治区南宁市第五人民医院 530001)
摘要:目的 观察复方六月雪(CLYX)对鸭乙型肝炎所致肝损伤的保护作用，为研究和开发新的抗 HBV药物提供实验依
据。方法 采用 1 日龄雏鸭接种广西麻鸭 DHBV强阳性血清，13 d后用 PCR 法筛选出 DHBV 强阳性鸭。随机分成 5 组:
CLYX高剂量组、中剂量组、低剂量组，模型组和阳性对照组，每组 10 只，各组雏鸭均灌胃给药 14 d。于用药前(T0)、用药
7 d(T7)、14 d(T14)及停药后 3 d(P3)分别采血，检测血清的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)的
活性，并观察肝组织病理变化。结果 CLYX中、高剂量组可显著降低 ALT的活性，停药 3 d后，CLYX高剂量组没有反跳
现象;CLYX高剂量组可显著降低 AST的活性，并在停药 3 d后无反跳现象，而中、低剂量组无统计学意义。CLYX降低血
清 ALT和 AST活性的作用有明显的量效和时效关系。同时 CLYX减轻鸭肝组织病理损伤程度。结论 CLYX对鸭乙型肝
炎所致肝损伤具有保护作用。
关键词:复方六月雪; 鸭乙型肝炎病毒; 肝损伤
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2010． 10． 047
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2010)10-2528-02
乙型肝炎是由 HBV 引起的，以肝脏炎性病变为主的一种传
染性疾病。目前，中草药抗乙肝病毒已成为国内外的研究热点。
六月青系爵床科(Acanthaceae)肖鸡笼属植物肖鸡笼(顶花马兰)
Taraphochlamys affinis(Giff)Bremekhu 的干燥地上部分［1］，为广
西民间草药。它与白花蛇舌草和栀子花根等组成复方六月雪
(CLYX)。CLYX是通过长时期的民间临床观察而拟定的治疗急
慢性乙型肝炎的验方，具有清热解毒、利湿退黄和促进肝功能恢
复之功效，临床疗效显著。
实验研究发现，CLYX对四氯化碳、对乙酰氨基酚、D －半乳
糖胺等所致小鼠急性化学性肝损伤均有明显的保护作用［2］。
CLYX在体外对血清中 HBsAg，HBeAg 也有明显的抑制作用［3］。
本文以广西麻鸭为研究对象，研究 CLYX对鸭乙型肝炎所致肝损
伤的保护作用。
1 材料与仪器
1． 1 动物 广西麻鸭:1 日龄，雌雄不拘，体质量(50 ± 5)g，购自
广西畜牧良种养殖场。
1． 2 试药 CLYX:由广西医科大学药理学教研室采用全方醇水
双提的最佳工艺［4］提取;阿昔洛韦(aciclovir，ACV) :湖南迪诺制
药有限公司医药工业研究所产品，批号:20040829。ALT，AST 改
良赖式法检测试剂盒，四川省迈克科技有限责任公司产品，批号:
20051109。
1． 3 仪器 可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品，
722S。
2 方法
2． 1 广西麻鸭乙肝动物模型的建立 采用健康成年的广西麻鸭
产的蛋孵化的 1 日龄雏鸭，经腹腔注射 0． 2 ml DHBV DNA 强阳
性病毒血清。接种 1 周后，分别从胫静脉采血约 0． 2 ～ 0． 3 ml 左
右，装入一次性 Eppendoff 管中，整个过程注意不要交叉污染。
4 000 r /min离心 5 min，取血清。 － 20℃保存备用。采用 PCR 法
检测筛选出感染阳性鸭。
2． 2 实验分组及用药 经 PCR 法检测筛选出感染阳性鸭，饲养
至 13 日龄作为实验动物进行药物治疗试验。将 50 只鸭随机分
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时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL． 21 NO． 10
为 5 组，每组 10 只。①模型组:等量的生理盐水;②阳性对照组:
ACV，0． 1 mg·kg －1·d －1;③CLYXH 组:6． 6 g·kg －1·d －1;④
CLYXM组:3． 3 g·kg －1·d －1;⑤CLYXL 组:1． 7 g·kg －1·d －1。
另选 10 只健康鸭作为空白对照组。各组动物在同样条件下饲
养，均以 2 次 /d，早晚各 1 次，空腹灌胃给药 14 d(模型组、空白对
照组灌胃等量生理盐水)。于用药前(T0)、用药 1 周(T7)、用药
2 周(T14)、停药 3 d(P3)时，分别从胫静脉采血，每只 0． 5 ml 左
右，分离血清，于 － 20℃保存备用。
2． 3 血清酶活性测定 采用改良赖氏法，按试剂盒所述方法操
作，用分光光度计仪于 505 nm波长处测吸光度值。
2． 4 肝组织病理学观察 于停药后 3 d，各组取肝右叶同一部位
1 cm × 0． 5 cm大小的肝组织用酒精醋酸甲醛混合溶液(AAF液)
固定，石蜡包埋切片，HE染色光镜观察。
2． 5 统计学处理 采用 SPSS11． 0 统计软件分析数据，治疗前后比
较采用配对资料 t检验，组间比较采用方差分析，各均数两两比较。
3 结果
3． 1 CLYX对鸭乙型肝炎所致肝损伤鸭血清 ALT 活性的影响
采用改良赖氏法，检测 CLYX 治疗前后鸭血清 ALT 的活性。与
模型组比较，ACV 组与 CLYX 高、中剂量组用药 1 周(T7)后，均
可使鸭血清 ALT的活性显著降低(P ＜ 0． 01) ，且随着药物浓度和
作用时间的增加，其抑制作用逐渐增强，呈现一个明显的量效和
时效反应关系。停药 3 d(P3)后，CLYX 中、高剂量组血清 ALT
的活性没有反跳现象。结果见表 1。
表 1 CLYX对鸭乙型肝炎所致肝损伤鸭血清 ALT活性的影响(珋x ± s)
组别 T0 T7 T14 P3
模型对照 75． 80 ± 23． 85 78． 00 ± 21． 02 68． 70 ± 23． 85 69． 80 ± 22． 67
ACV 78． 55 ± 18． 62 42． 33 ± 13． 88＊＊35． 20 ± 7． 52＊＊ 49． 47 ± 8． 68＊＊
CLYXH 79． 65 ± 12． 40 52． 76 ± 9． 49＊＊ 36． 30 ± 7． 95＊＊ 29． 17 ± 7． 67＊＊
CLYXM 78． 55 ± 15． 90 57． 15 ± 15． 83＊＊47． 82 ± 15． 04＊＊58． 25 ± 13． 05
CLYXL 77． 45 ± 19． 56 66． 48 ± 17． 58 61． 54 ± 16． 57 66． 48 ± 14． 68
与模型对照组比较，* P ＜0． 05;＊＊P ＜0． 01;n =10
3． 2 CLYX对鸭乙型肝炎所致肝损伤鸭血清 AST 活性的影响
采用改良赖氏法，检测 CLYX治疗前后鸭血清 AST的活性。与模
型组比较，ACV组与 CLYX高剂量组用药 1 周(T7)后，均可使鸭
血清 AST的活性显著降低(P ＜ 0． 01) ，且随着药物浓度和作用时
间的增加，其抑制作用逐渐增强，呈现一个明显的量效和时效反
应关系。停药 3 d(P3)后，CLYX中、高剂量组血清 AST的活性没
有反跳现象。结果见表 2。
3． 3 CLYX对鸭肝脏组织病理学的影响 病毒性肝炎主要病理改
变是肝细胞变性(中、重度水变性或脂肪变性)及坏死，间质性炎。
结果显示，空白对照组肝细胞正常，结构基本完整(见图 1) ;模型
对照组肝细胞出现弥漫性重度脂变(见图 2) ;CLYX高剂量组肝病
变与 ACV组相似，正常，结构基本完整(见图 3 ～4) ，表明 CLYX有
保肝作用。实验结果提示 CLYX对肝组织无明显毒性作用。
表 2 CLYX对鸭乙型肝炎所致肝损伤鸭血清 AST活性的影响(珋x ± s)
组别 T0 T7 T14 P3
模型对照 194． 64 ±39． 62 185． 20 ±37． 88 178． 11 ±36． 19 182． 05 ±36． 43
ACV 199． 36 ±39． 27 135． 62 ±27． 46＊＊ 89． 98 ±23． 81＊＊ 132． 47 ±25． 38＊＊
CLYXH 203． 30 ±29． 86 141． 91 ±25． 70＊＊ 104． 14 ±20． 25＊＊ 99． 42 ±16． 67＊＊
CLYXM 201． 72 ±34． 24 160． 01 ±31． 27 145． 85 ±36． 58 158． 44 ±32． 86
CLYXL 206． 44 ±23． 98 177． 33 ±24． 95 173． 39 ±20． 32 174． 97 ±20． 92
与模型对照组比较，* P ＜0． 05;＊＊P ＜0． 01;n =10
4 讨论
乙型肝炎是由 HBV引起的，以肝脏炎性病变为主的一种传
染性疾病。尽管已有干扰素及核苷类等各种抗病毒药物，但其疗
效均不理想。目前中草药抗病毒已成为国内外的研究热点。乙
型肝炎抗病毒药物的开发和评价中的重要环节之一就是建立一
种方便有效的体内病毒感染模型。乙型肝炎病毒(HBV)是比较
严格的嗜肝 DNA病毒，其感染的宿主范围狭窄，具有明显的种属
特异性，很难在普通实验动物中建立疾病模型。
图 1 空白对照组鸭肝 图 2 模型对照组鸭肝组
组织(HE染色，100 ×) 织(HE染色，100 ×)
图 3 ACV组鸭肝组织 图 4 CLYX高剂量组鸭肝
病理(HE染色，100 ×) 组织病理(HE染色，100 ×)
1980 年，Mason等［5］观察到鸭乙肝病毒直径约为 40 nm，其
形态与 HBV 相似;病毒 DNA 呈环状或部分单链结构，内源性
DNA聚合酶可将其转变为双链环状，其 DNA 长度约为 3 000 bp
和 HBV一样。病毒基因不仅在肝脏内复制，而且也可在肝外脏
器，如肾、心、胰、脾等脏器中复制，这些方面均说明鸭乙肝病毒与
人乙肝病毒属于同一病毒属。由于麻鸭易于孵育、饲养，容易在
麻鸭等品种的雏鸭中获得实验感染成功和建立 DHBV 持续感染
状态，从而较易建立一个与 HBV 感染相近似的体内实验系统。
因此，鸭乙型肝炎病毒实验动物模型已被作为 HBV 感染的模型
用于实验研究［6］。现已成为申报抗乙肝病毒新药必须做的体内
实验模型。
我们应用广西 1 日龄雏鸭经腹腔感染 DHBV 的方法来建立
鸭乙型肝炎动物模型进行 CLYX 保肝降酶疗效的实验。研究结
果表明，CLYX中、高剂量组可显著降低 ALT 的活性，停药 3 d
后，CLYX高剂量组没有反跳现象(P ＜ 0． 01) ;CLYX 高剂量组可
显著降低 AST的活性，并在停药 3 d 后无反跳现象(P ＜ 0． 01) ，
而中、低剂量组无统计学意义。CLYX抵制血清 ALT和 AST的作
用有明显的量效和时效关系。同时 CLYX 减轻鸭肝组织病理损
伤程度。研究结果提示，CLYX对鸭乙型肝炎所致肝损伤具有保
护作用，这可能是其治疗慢性乙型肝炎的其中一条途径。
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