全 文 ：［收稿日期］ 20110304(003)
［基金项目］ 广西教育厅自然科学基金项目(200911MS28)
［第一作者］ 黄权芳，中药师，硕士学位，从事中药鉴定及开发研究，E-mail:hqf00@ 163. com
［通讯作者］ * 林兴，副教授，从事肝炎、肝纤维化靶向诊断和治疗，Tel:0771-5358342
山芝麻抗鸭乙型肝炎病毒作用
黄权芳1，杨辉2，韦刚2，林兴3* ，张士军3，黄仁彬3
(1. 广西中医学院第一附属医院，南宁 530023;2. 广西分析测试研究中心，
南宁 530022;3. 广西医科大学，南宁 530021)
［摘要］ 目的:研究山芝麻水提物(helicteres angustifolia)体内抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus，DHBV)的作用。
方法:将 DHBV-DNA 阳性麻鸭随机分为山芝麻高、中、低剂量组(10，5，2. 5 g·kg － 1)、拉米夫定 50 mg·kg － 1组和模型组，分别给
予相应药物进行干预。用药前、用药第 7，14 天及停药第 7 天，取静脉血用实时荧光定量 PCR 法检测血清 DHBV-DNA 含量。
治疗后取肝脏组织作病理学检查。结果:拉米夫定组用药后血清 DHBV-DNA 水平迅速降低，停药后立即反跳;山芝麻高、中剂
量组用药 7，14 d 血清中的 DHBV-DNA 显著降低(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，停药后仍表现有持续的抑制作用;在给药及停药过程
中山芝麻低剂量组血清 DHBV-DNA 变化不明显。镜下观察显示山芝麻高剂量组与阳性药组鸭肝脏的病理改变有一定的改
善。结论:山芝麻在鸭体内有一定的抑制鸭乙型肝炎病毒 DNA 的作用，其作用有明显的量效和时效反应关系。
［关键词］ 鸭乙型肝炎病毒;山芝麻;麻鸭
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)20-0179-03
Experimental Study of Water Extract from Helicteres Angustifolia
on Duck Hepatitis B Virus in vivo
HUANG Quan-fang1，YANG Hui2，WEI Gang2，LIN Xing3* ，ZHANG Shi-jun3，HUANG Ren-bin3
(1. The First Affiliated Hospital Of Guangxi Traditional Chinese Medicine University，
Nanning 530023，China;2. Guangxi Research Center of Analysis and Testing，
Nanning 530022，China;3. Guangxi Medical University，Nanning 530021，China)
［Abstract］ Objective:To observe the inhibitory effect of the water extract from helicteres angustifolia on duck
hepatitis B virus(DHBV)in vivo．Method:Ducks infected with DHBV were randomly divided into five groups:three
dose groups of helicteres angustifolia(10，5，2. 5 g·kg － 1) ，lamivudine group and model group． Ducks in the lamivudine
group were administrated with lamivudine(50 mg·kg － 1)once per day． Ducks in the three-dose groups of helicteres
angustifolia were administrated with different dose of helicteres angustifolia for 14 days respectively． The serum content
of DHBV-DNA was determined by FQ-PCR method before treatment and on the 7th，14th day after treatment． The
pathological changes of liver were evaluated after the treatment． Result:Lamivudine showed a rapid inhibiting effect
on DHBV-DNA，but this effect didn’t last long，and the serum level of DHBV-DNA increased again after treatment
stopped． The serum level of DHBV-DNA dropped markedly in the high-，medium-dose groups of helicteres angustifolia
on the 7th and 14th day． And the hepatic pathological changes in the high-dose helicteres angustifolia group and
lamivudine group were slighter than those in the model group． Conclusion:Helicteres angustifolia could inhibit DHBV
DNA significantly，and its inhibitory effect was in a dose and time dependent manner．
［Key words］ duck hepatitis B virus;Helicteres angustifolia;brown spot duckling
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第 17 卷第 20 期
2011 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 20
Oct．，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.20.060
乙型肝炎为我国常见病、多发病。近年来许多
中草药抗病毒、调节免疫功能、改善肝脏炎症及纤维
化的作用受到重视［1］。山芝麻系梧桐科植物山芝麻
的根，功能清热解毒，主要用于感冒发热、肺热咳嗽、
咽喉肿痛、麻疹等［2］。本研究以 DHBV-DNA 阳性麻
鸭乙肝模型，探讨山芝麻对鸭乙型肝炎病毒的影响，
首次评价山芝麻对鸭乙型肝炎病毒 DNA 的抑制
作用。
1 材料
1. 1 试药 山芝麻经广西中医学院第一附属医院
药学部黄权芳中药师鉴定为梧桐科植物山芝麻
Helicteres angustifolia L. 的根，其水提物由广西医科
大学药理学教研室和广西医学科学实验中心自行提
取。拉米夫定，中国苏州葛兰素史克制药有限公司
产品，批号 07090016。
1. 2 动物 1 日龄广西麻鸭，雌雄不拘，体重 40 ～
50 g，购自广西畜牧良种养殖场。
1. 3 引物［3］ 上 游引物:5-AACCATTGAAGCA
ATCACTAGAC-3，下 游 引 物:5-ATCTATGGTGGC
TGCTCGAACTA-3。目的片段大小为 218 bp。由上
海基康生物技术有限公司合成。
1. 4 仪器 实时荧光定量 PCR 仪，美国 Bio-Rad
公司。
2 方法
2. 1 山芝麻水提物［4］ 山芝麻饮片1 000 g，加 10
倍量水提取 2 次，每次 1. 5 h，合并提取液，浓缩至
500 mL(即相当于生药 2 g·mL － 1)作为备用液 4 ℃
保存。
2. 2 给药方法 每次使用时分别取 5，2. 5，1. 25
mL 备用液，加蒸馏水稀释至 10 mL，得山芝麻 3 个
剂量组给药浓度，即按生药计算分别为 1，0. 5，0. 25
g·mL － 1，各组灌胃给药容积 10 mL·kg － 1。山芝麻
高、中、低剂量分别为 10，5，2. 5 g·kg － 1。
2. 3 广西麻鸭乙肝动物模型的建立［3］ 采用健康
成年的广西麻鸭产的蛋孵化的 1 日龄雏鸭，经腹腔
注射 0. 2 mL DHBV-DNA 强阳性病毒血清。接种 7
d 后，分别从胫静脉采血约 0. 2 ～ 0. 3 mL，装入一次
性 Eppendoff 管中，整个过程注意不要交叉污染。
4 000 r·min － 1离心 5 min，取血清。 － 20 ℃保存备
用。采用 PCR 法检测筛选出感染阳性鸭。
2. 4 分组及用药［3］ 经 PCR 法检测筛选出感染阳
性鸭，饲养至 13 日龄作为实验动物进行药物治疗试
验。将 50 只鸭随机分为 5 组，每组 10 只。①模型
组:ig 等量的生理盐水;②拉米夫定组:ig 拉米夫定
50 × 10 － 3 g·kg － 1·d － 1;③山芝麻高剂量组:ig 山芝麻
10 g·kg － 1·d － 1;④山芝麻中剂量组:ig 5 g·kg － 1·
d － 1;⑤山芝麻低剂量组:ig 2. 5 g·kg － 1·d － 1。各组每
天早上 8 ～ 9 点 ig 给药，1 天 1 次，连续 14 d，实验期
间动物自由取食和饮水。并于用药前 0 d，用药 7，
14 d，停药 7 d(p7)时，分别从胫静脉采血，每只 0. 5
mL 左右，分离血清，于 － 20 ℃保存备用。
2. 5 FQ-PCR 检测血清 DHBV-DNA［3］ ①DHBV-
DNA 提取:采用直接加热法。每次取血清 100 μL，
沸水浴 10 min，1 万 r·min － 1离心 5 min。②加样:2
× SYBR Premix Ex TaqTM12. 5 μL;10 μmol·L － 1上游
引物 1. 0 μL;10 μmol·L － 1下游引物 1. 0 μL;加无菌
双蒸水至 23 μL;血清提取物 2. 0 μL。③ FQ-PCR
反应条件:95 ℃变性 10 s，55 ℃退火 20 s，72 ℃延伸
30 s，共反应 45 个循环。④FQ-PCR 的结果判读:扩
增过程及数据的储存和分析均由仪器及自带的软件
自动完成。
2. 6 各组肝脏病理(HE 染色)检测 于停药 7 d 分
别剖杀各组试验动物，各取小块肝组织固定于 10%
甲醛溶液，石蜡切片，用 HE 染色，病理检查。
2. 7 统计学处理 数据以 珋x ± s 表示，统计学采用
SPSS 10. 0 软件，药物治疗组的血清 DHBV-DNA 水
平与同时间点的模型对照组比较，采用成组数据 t
检验;治疗后血清 DHBV-DNA 水平与治疗前(T0)比
较，采用配对 t 检验;P ＜ 0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 治疗前后不同时间血清 DHBV-DNA 水平变化
与模型组比较，山芝麻高、中剂量组在给药 7，14 d
和停药 7 d 鸭血清 DHBV-DNA 拷贝数有明显降低
(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ;与治疗前(t0)比较，山芝麻
各治疗组鸭血清 DHBV-DNA 水平下降程度与用药
剂量及用药时间相关，并且山芝麻高剂量组停药后
没有出现明显的反跳现象。小剂量组在治疗过程中
和停药后 DHBV-DNA 水平变化不明显。拉米夫定
组用药后，血清 DHBV-DNA 拷贝数开始明显下降，
第 14 天下降到最低值，停药 7 d 后 DHBV-DNA 拷贝
数即显著回升，病毒含量变化总体表现为用药时持
续下降、停药即出现反跳的规律。见表 1。
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第 17 卷第 20 期
2011 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 20
Oct．，2011
表 1 治疗前后鸭血清 DHBV-DNA 水平比较(珋x ± s，n = 10) × 108 copy·mL － 1
组别
剂量
/ g·kg － 1·d － 1
DHBV-DNA
t0 t7 t14 p7
模型对照 － 2. 51 ± 1. 09 2. 83 ± 1. 04 2. 76 ± 0. 98 2. 51 ± 0. 87
拉米夫定 50 × 10 － 3 2. 73 ± 1. 35 1. 16 ± 0. 812，4) 0. 67 ± 0. 322)4) 1. 72 ± 0. 83
山芝麻 2. 5 2. 68 ± 1. 26 2. 34 ± 1. 16 1. 89 ± 0. 92 1. 81 ± 0. 78
5 2. 35 ± 1. 15 1. 77 ± 0. 981) 1. 26 ± 0. 832，3) 1. 56 ± 0. 751)
10 2. 59 ± 1. 20 1. 59 ± 0. 711，3) 1. 05 ± 0. 882，4) 1. 23 ± 0. 842，4)
注:与模型组比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与同组 t0 比较
3)P ＜ 0. 05，4)P ＜ 0. 01。
3. 2 病理检查 肉眼观察各组鸭肝脏，色泽鲜嫩暗
红，表面光滑，质地柔软，未扪及结节。镜下观察，模
型组肝细胞出现炎性细胞浸润，周边部分肝脏细胞
肿胀，弥漫性重度脂变;治疗后拉米夫定组和山芝麻
高剂量组炎症有不同程度减轻，部分组织汇管区小
叶间隔可见炎症细胞浸润，结构基本完整，变性肝细
胞减少;山芝麻中、低剂量组炎症改善不明显，可见
炎症细胞浸润及桥接坏死。见图 1。
A. 模型组;B. 拉米夫定 50 × 10 － 3 g·kg － 1·d － 1组;C. 山芝麻 10 g·kg － 1·d － 1组;D. 山芝麻 5 g·kg － 1·d － 1组;E. 山芝麻 2. 5 g·kg － 1·d － 1组
图 1 山芝麻对鸭乙型肝炎肝脏组织病变的影响(HE，× 400)
4 讨论
本课题组多年来一直致力于发掘广西特色中草
药用于抗肝炎的研究，我们前期已成功建立了广西
麻鸭乙肝动物模型，实验证实该品种麻鸭易感染，其
病程较规律，病毒血症持续时间较长且较稳定，无明
显的自然转阴现象，保证了模型的稳定性和可靠性，
并先后利用该模型开展了大量的抗乙肝中药的筛查
研究工作［3，5-8］。山芝麻即是我们目前重点研究的民
族药之一，前期初筛实验发现山芝麻能保护 CCl4 所
致小鼠肝损伤，具有显著的抗脂质过氧化作用［4］，为
我们进一步研究其是否具有抗乙肝病毒作用奠定了
前期研究基础。
本次实验发现，与模型组比较，山芝麻高、中剂
量组在治疗第 7，14 天鸭血清 DHBV-DNA 即明显下
降，且停药后 DHBV-DNA 仍维持在较低的水平，提
示一定剂量的山芝麻在体内具有明显的抑制 DHBV
的作用，且疗效与用药剂量及用药时间相关。拉米
夫定抑制 DHBV 起效较早，在治疗第 14 天其病毒
DNA 拷贝数已降至较低水平，但停药后病毒含量又
立即回升。山芝麻治疗组与拉米夫定组比较，山芝
麻起效慢，但其抑制病毒复制的作用平稳而持久，提
示山芝麻体内抑制 DHBV 复制的机制不同于拉米夫
定。本实验中肝脏 HE 染色病理检查发现，山芝麻
高剂量组与阳性药组鸭肝脏炎症有不同程度减轻，
病理改变有一定程度的改善。
本实验结果证实，山芝麻在体内能够抑制
DHBV 的复制，其作用较拉米夫定弱但疗效稳定。
关于山芝麻抗病毒的作用机制尚待进一步研究。
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［责任编辑 聂淑琴］
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黄权芳，等:山芝麻抗鸭乙型肝炎病毒作用