全 文 ：高效液相色谱法测定栀子金花丸中大黄素和
大黄酚的含量
杨跃龙
【摘要】 目的 建立栀子金花丸中大黄素和大黄酚的含量测定方法 。方法 采用 RP-HPLC法进行
测定 ,色谱柱为 DikmaC18 (5μm, 250mm×4.6 mm);流动相为甲醇 -水 -冰醋酸(80∶20∶1);检测波长为
254nm:柱温:25℃,流速:1.0ml/min。结果 栀子金花丸中大黄素和大黄酚的线性范围为 3.15 ～ 31.5
μg/ml, 7.00 ～ 70.0 μg/ml, r=0.999 8, r=0.999 8 ,平均回收率为 99.20%, 99.30% , RSD值为 0.4%,
0.2%。结论 该方法简便 ,结果准确 ,重现性好 ,可作为栀子金花丸的质量控制方法 。
【关键词】 栀子金花丸;大黄素;大黄酚;高效液相
ThehighlyeffectiveliquidphasedeterminationzhizijinghuapillofEmodinandChrysophanol scontent
YANGYue-long.HunanProvinceHuaihuaCityInstituteforDrugControl, Huaihua418000 , China
【Abstract】 Objective Establisheswiththeoppositionhighlyeffectiveliquidchromatography(RP-
HPLC)determinationzhizijinghuapilofEmodinandChrysophanol scontentmethod.Methods UsesRP-
HPLCtodectect, chromatographvolumewasDikmaC18(5 μm, 250mm×4.6 mm), mobilephase:methanol-wa-
ter-glacialaceticacid(80∶20∶1);dectectwavelengthis254 nm;thetemperatureofchromatopraphvolumewas
25℃, flowrate:1.0ml/min.Results Theemodinlinearscope3.15 ～ 31.5 μg/ml(r=0.999 8), theChry-
sophanollinerscope7.00 ～ 70.0μg/ml(r=0.999 8).theaveragerecoverieswere99.20%, 99.30% andthe
RSDwere0.4%, 0.2%.Conclusion Thesemethodscanbeusedforqualitycontrolofzhizijinghuapill.
【Keywords】 Zhizijinghuapill;Emodin;Chrysophanol;HPLC
栀子金花丸由栀子 、大黄 、金银花等八味中药组成 , 具有
清热泻火 , 凉血解毒之功效。用于肺胃热盛 , 口舌生疮 , 牙龈
肿痛 [ 1] 。为有效控制本制剂质量 ,本文采用 HPLC法对大黄
素和大黄酚进行含量测定。
1 仪器与试液
1.1 仪器 LC-10ATVP高效液相仪 , 岛津 SPD-10AVP紫外
检测器 , 色谱站(浙大 N3000), 瑞士梅特勒 AB135-S电子分
析天平;湘仪 AEU-210电子分析天平 ,岛津紫外 UV-2401。
1.2 试药 栀子金花丸(宝鸡秦昆制药厂 批号 20060716,
20060829, 20060918,规格:9 g/袋 ),大黄素和大黄酚对照品
(中国药品生物制品检定所 批号:0756-200110 0796-200208
),甲醇(色谱纯 , TEDIA), 冰醋酸(色谱纯 , TEDIA), 三氯甲
烷(分析纯 ,湖南师大试剂厂), 盐酸(湖南邵阳试剂厂), 水
为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱 DikmaC18(5 μm, 250 mm×4.6
mm);流动相为甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1);检测波长为
254nm;流速:1.0ml/min;柱温:25℃;理论板数:以大黄素计
算应不低于 3 000[ 2] 。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷干燥 24h的大
黄素对照品 6.30 mg, 大黄酚对照品 14.00mg置于 100ml量
瓶中 , 加甲醇溶解并定容至刻度 , 摇匀 ,得 63.0 μg/ml、140.0
μg/ml的混合储备液。精密吸取储备液 0.5、 1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0ml分别置 10ml量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,即得。
作者单位:418000 湖南省怀化市药品检验所
2.2.2 供试品溶液 [ 3] 取重量差异项下的本品 , 研匀 , 精密
称取 1.5 g,置 50 ml锥形瓶中 , 精密加甲醇 25ml, 称定重量 ,
加热回流 60 min, 放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重
量 , 摇匀 ,滤过。精密量取续滤液 5 ml, 置烧瓶中 , 挥去溶剂 ,
加 8%盐酸溶液 10 ml,超声处理 2min,再加三氯甲烷 10 ml,
加热回流 60min,放冷 , 置分液漏斗中 ,用少量三氯甲烷洗涤
容器 , 并入分液漏斗中 ,分取三氯甲烷层 , 酸液再用三氯甲烷
提取 3次 , 每次 10 ml, 合并三氯甲烷液 ,减压回收溶剂至干 ,
残杂加甲醇使溶解 , 转移至 10 ml量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇
匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得。
2.2.3 阴性对照液 去除大黄以外的其他七味药材按处方
制备成缺大黄样品 , 再按供试品溶液方法制备。
2.3 标准曲线的制备 取对照品溶液按 2.1项下 ,进样 10
μl,记录色谱图 , 由峰面积(Y)(n=3)对响应的浓度(X)直
线回归 , 大黄素回归方程为:Y=38 651.2X-1 886.6, r=
0.999 8, 表明大黄素在 3.15 ～ 31.5 μg/ml的浓度范围内线
性相关;大黄酚回归方程为:Y=51 290.8X-1 226.3, r=
0.999 8, 表明大黄酚在 7.00 ～ 70.0 μg/ml的浓度范围内线
性相关。
2.4 系统适用性试验 分别取对照品溶液 、样品溶液 、阴性
对照液注入色谱仪 , 记录色谱图 ,从图 1中可以看出 , 大黄素
峰和大黄酚峰与其相邻峰完全分离 ,阴性对照色谱图在对应
的大黄素峰和大黄酚峰位置处无干扰峰 , 即表明其他组分对
测定无干扰。大黄素峰和大黄酚峰与其他组分峰的分离度
都 >1.5。对照品液相色谱图见图 1A, 样品液相色谱图见图
1B;阴性对照色谱图见图 1C。
·20· 中国现代药物应用 2007年 12月第 1卷第 11期 ChinJModDrugAppl, Dec2007, Vol.1, No.11DOI :10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2007.11.022
A B C
1.大黄素 2.大黄酚
图 1 系统运用性试验液相色谱图
2.5 精密度考察 取混合同一对照品溶液连续进样 6次 ,
进样量 10μl, 测定峰面积 , 计算 RSD值为 0.92%、 0.91%。
结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密度。
2.6 重复性试验 取同一批号的样品 6份 , 按 2.2.2项下
制备供试品溶液 , 分别精密吸取各供试品溶液 10 μl注入高
效液相色谱仪。 测定峰面积 , 根据线性回归方程计算含量。
结果大黄素和大黄酚含量相对标准偏差 RSD分别为
0.91%、0.88%。
2.7 稳定性试验 取同一样品溶液 , 在 0、 2、 4、6、 8、 10、 12、
24 h分别进样 10 μl, 依法测定 ,结果 6次测定的大黄素和大
黄酚峰面积 RSD分别为 1.02%、1.25%,表明样品溶液在 24
h内相对稳定。
2.8 回收率试验 [ 4] 精密量取同一批(批号:20060716)已
知含量的供试品 1.5 g平行 6份置蒸发皿中 , 分成 3组 , 每
组 2份 ,分别加入混合对照品溶液 0.8ml, 1.0 ml, 1.2ml(大
黄素 320.10 μg/ml, 大黄酚 835.55 μg/ml)将溶液蒸干 , 按
2.2.2项下制备 , 摇匀 ,按 2.1项下分别进样 10 μl,记录色谱
图 , 计算大黄素和大黄酚的回收率。结果见表 1,表 2。
表 1 大黄素回收率
样品取样量(g) 样品含量(μg) 标品加入量(μg) 测出量(μg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1.510 1 333.70 256.08 587.25 99.01
1.520 4 336.00 256.08 590.33 99.31
1.500 1 331.52 320.10 648.99 99.17 99.20 0.4
1.511 0 333.93 320.10 649.68 98.64
1.520 0 335.92 384.12 717.79 99.41
1.511 8 334.10 384.12 716.98 99.67
表 2 大黄酚回收率
样品取样量(g) 样品含量(μg) 标品加入量(μg) 测出量(μg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1.510 1 843.63 668.44 1 505.11 98.95
1.520 4 848.38 668.44 1 511.65 99.22
1.500 1 837.05 835.55 1 668.84 99.54 99.30 0.2
1.511 0 843.12 835.55 1 672.25 99.23
1.520 0 848.16 1 002.66 1 845.56 99.48
1.511 8 843.58 1 002.66 1 840.28 99.40
2.9 样品含量测定 将 3批不同批号的栀子金花丸按
2.2.2方法制备 , 进样 10 μl, 测定峰面积 , 按外标法计算含
量。结果见表 3。
表 3 样品含量测定
批号 大黄素含量(mg/g) 大黄酚含量(mg/g) RSD(%)大黄素 大黄酚
20060716 0.221 0.558
20060829 0.231 0.585 2.2 2.5
20060918 0.225 0.562
根据以上 3批样品的检测结果 , 提取回收率栀子金花丸
中大黄素和大黄酚的含量限度为不低于 0.75mg/g。
3 讨论
检测波长的选择应有空格 RP-HPLC在选择检测波长
时 , 经紫外-可见光分光光度计扫描 , 大黄素和大黄酚在 254
nm有最大吸收 ,且灵敏度高 , 故选 254 nm做为检测波长。
参考文献
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部 , 2005:382.
2 刘晋华 ,屈梅芳 ,尤光甫.RP-HPLC测定消炎止血颗粒中大黄素
和大黄酚的含量.中国药事 , 2006, 20(7):421-422.
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部 , 2005:17.
4 刘文英.药物分析.人民卫生出版社 , 1998:72-73.
·21·中国现代药物应用 2007年 12月第 1卷第 11期 ChinJModDrugAppl, Dec2007, Vol.1, No.11