全 文 ：　　从表 3可见 , 四川虫草效果稍差 , 只在大剂量下表现出明显
促进刚果红吞噬的作用;西藏和青海虫草药效较好 , 其中西藏虫
草的作用更好。
3　小结
本文通过研究不同产地虫草提取物的药效学作用 ,拟比较本
省与外省(西藏 、四川)虫草在抗炎及抗疲劳 、提高吞噬功能方面
的影响 , 以确定本省虫草是否具有药效学方面的优势。
实验结果表明 , 在抗炎及抗疲劳方面 , 青海虫草表现出明显
的炎症抑制作用;提高吞噬功能作用较好。西藏虫草与青海虫草
相当 , 也有明显的抗炎作用 , 四川虫草的总体药效相对较差。实
验结果和分析表明 , 青海虫草在部分药效方面具有一定的优势 ,
其作用机制尚需进一步实验研究。
参考文献:
[ 1 ] 　徐叔云 ,卞如濂 ,陈　修 , 等.药理实验方法学 , 第 3版 [ M] .北京:
人民卫生出版社 , 2002:801.
[ 2 ] 　陈　奇.中药药理研究方法学 ,第 2版 [ M] .北京:人民卫生出版
社 , 2006:244.
[ 3 ] 　张均田.现代药理试验方法 [ M] .北京:北京医药大学中国协和医
药大学联合出版社 , 1998:1241.
收稿日期:2007-12-10;　修订日期:2008-09-30
基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目(No.5Z0505C)
作者简介:赵保发(1958-),男(汉族),河南南阳人 ,现任文山师范高等专
科学校讲师 ,学士学位 ,主要从事天然药物分析研究工作.
＊通讯作者简介:张志信(1970-), 男(汉族),云南砚山人 , 现任文山师范
高等专科学校副教授 ,硕士学位 ,主要从事天然药物研究工作.
不同采收季节瓶尔小草黄酮类化合物含量分析
赵保发 , 张志信＊ , 张仕秀 , 黄保贵 ,沐建华
(文山师范高等专科学校 ,云南 文山　663000)
摘要:目的 确定瓶尔小草的最佳采收季节。方法 对夏(8月)、秋(10月)、冬(12月)三季节采收的瓶尔小草中的总黄
酮进行了提取 , 以芦丁为对照品 , 用紫外分光光度法对其含量进行了测定。结果 不同季节采收的瓶尔小草中黄酮类化
合物的含量有着显著的差异 ,夏季(8月)其含量为 58.42(mg/gDW), 秋季(10月)为 39.32(mg/gDW), 冬季(12月)为
28.14(mg/gDW)。结论 瓶尔小草的最佳采收季节应为每年 8月。
关键词:瓶尔小草;　黄酮类化合物;　紫外分光光度法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)02-0345-02
FlavonoidsContentinOphioglossumvulgatumL.
ZHAOBao-fa, ZHANGZhi-xin＊ ,ZHANGShi-xiu,HUANGBao-gui, MUJian-hua
(DepartmentofBiochemistry, WenshanNormalColege, Wenshan, Yunnan663000, China)
Abstract:ObjectiveTostudythebestharvestseasonofOphioglossumvulgatumL..MethodsThispaperreportedtheextrac-tionandthepreliminarydeterminationofflavonoidsinOphioglossumvulgatumL.fromthesamplesofAugust, October, December
byUV-spectrophotometrywithrutinascomparisonsample.ResultsThecontentsofflavonoidshadsignificantdiferencein
OphioglossumvulgatumL.atdifferentseassons.ThehighestflavonoidcontentinOphioglossumvulgatumL.ofAugustwas58.42
(mg/gDW)andthecontentsofthesampleinJunewas39.32(mg/gDW), andthecontentofthesamplesinDecemberwas
28.14(mg/gDW).ConclusionThebestharvestseassonforOphioglossumvulgatumL.isAugust.
Keywords:OphioglossumvulgatumL.;　Flavonoids;　UV-spectrophotometry
　　瓶尔小草科植物瓶尔小草 OphioglossumvulgatumL.又称一
支箭 、一支枪 、独叶一支箭 、单枪一支箭 、一矛一盾 、矛盾草 、蛇须
草。以全草入药 , 功能清热解毒 ,消肿止痛。用于小儿肺炎 、脘腹
胀痛 、毒蛇咬伤 、疔疮肿毒;外用治急性结膜炎 、角膜云翳 、眼睑缘
炎。分布于东北 、陕西 、湖北 、云南 、贵州 、广西 、台湾及长江下游
等地 [ 1, 2] 。
黄酮类化合物广泛存在于植物中 , 生理活性作用广泛:维持
血管正常的渗透压 、防止血管脆化 , 对多种炎症 、冠心病 、心绞痛
等均有良好的疗效。同时 , 黄酮类化合物还是一种良好的活性自
由基清除剂 , 具有调整免疫和内分泌作用 , 还有抗癌 、抗炎等多种
医疗保健作用 , 是一类重要的生物活性因子。瓶尔小草的叶中主
要含 3-O-甲基槲皮素 -7-O-双葡萄糖苷 -4-O-葡萄糖
苷 , 其功效与黄酮类化合物有着密切关系。本研究探讨了瓶尔小
草中总黄酮 TotalflavonesofOphioglossumvulgatumL.(FOV)的提
取 、测定 ,分析了瓶尔小草中总黄酮随季节的变化 ,以期为充分利
用瓶尔小草资源提供实验依据。
1　器材
1.1　仪器 UV-160紫外分光光度计(日本岛津);AEL-40SM
十万分之一天平(日本岛津);干燥箱 CS-101 -2CS(重庆实验
仪器厂);微波炉 , MideaPJ21F-B(C2)。
1.2　试剂 芦丁对照品购于中国药品生物制品检定所;亚硝酸
钠 、硝酸铝 、氢氧化钠均为分析纯。
1.3　药材 瓶尔小草全株于 2006年 8, 10, 12月采集于云南文山
县杨柳井 , 经云南文山师范高等专科学校沐建华讲师鉴定 , 每次
采样 3次重复。
2　方法
2.1　标准曲线的制作 [ 3] 精密称取 120℃干燥至恒重的芦丁对
照品 10mg用 20 ml乙醇溶解后 , 转移到 100 ml容量瓶中 , 加水
至刻度 ,摇匀即得(每毫升溶液中含无水芦丁 0.1 mg)。精密吸
取芦丁标准液 0.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0, 12.0 ml。分别置于
50 ml容量瓶中 , 各加水至 12 ml, 加 5%NaNO2溶液 2 ml, 混匀 ,
放置 6 min, 加 10%Al(NO3)3溶液 2 ml,混匀 , 放置 6min,加 4%NaOH20 ml, 再加水至 50 ml,放置 15 min, 以不加芦丁对照品的
试剂作空白对照。 按分光光度法 [ 4]在 503 nm(全波长扫描 , 在
503 nm处有最大吸收)波长处测定吸光度。以所取标准液含有
的芦丁标样量 mg数和吸光度数据经回归处理 , 得到回归方程 ,
回归方为程:Y=0.219 6X-0.011 2, 相关系数 r=0.999 3。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.2 时珍国医国药 2009年第 20卷第 2期
2.2　黄酮类化合物的提取和测定方法 [ 5] 瓶尔小草粉碎(过 60
目筛),称取 5 g, 用 70%乙醇溶液为溶剂 , 浸泡 24 h, 微波提取
10 min(微波加热 2 min,间隔 1 min, 用于补充溶剂损耗), 抽滤 ,
提取液用 70%乙醇溶液定容至 200ml,取 1ml按 “ 2.1”项下方法
测定吸光度 , 根据回归方程计算出 1 ml提取液中的总黄酮的 mg
数 , 按下式计算瓶尔小草中的黄酮含量(mg/gDW)。
样品中的总黄酮含量(以芦丁计):总黄酮含量(mg/gDW)
=200CW
式中:C为 1 ml样品液含总黄酮量(mg), W为样品的质量
(g)。
2.3　回收率的测定 准确称取夏季采收的瓶尔小草样品 5 g,共
3份 ,分别加入一定量的芦丁对照品 ,按 “ 2.2”操作。 用紫外分光
光度计测定吸光度 , 得出总黄酮含量 , 根据回收率公式计算出回
收率。
回收率(%)=混合后测得总黄酮含量 -样品中总黄酮含量芦丁对照品加入量 ×100%
2.4　精密度实验 精密称取夏季瓶尔小草干粉样品 5 g, 共 6份 ,
按 “ 2.2”测定。
3　结果
3.1　提取溶剂乙醇浓度的选择 对于总黄酮的提取率与醇溶液
的浓度及黄酮类型的不同而有所差异 ,因此本实验做了乙醇浓度
对黄酮类化合物提取率的影响的实验。 取不同浓度的乙醇溶液
对不同季节的瓶尔小草干粉 ,按照 “ 2.2”项下方法分别提取和测
定。结果见表 1。
表 1　乙醇浓度对 FOV提取的影响
乙醇浓度
(%)
瓶尔小草总黄酮提取率 C/mg· (gDW)-1
夏季 　　　　　秋季　　　　　冬季
50 28.94 20.36 14.23
60 32.52 24.87 15.62
70 42.67 32.15 21.12
80 39.38 28.46 20.36
90 24.36 25.32 18.95
100 18.42 22.13 18.45
由表 1可以看出 , 乙醇浓度为 70%时 , 提取液中黄酮类化合
物的提取率最高。本实验选择 70%的乙醇为溶剂。
3.2　微波提取次数实验 将经过 “ 2.2”项下操作过滤后的残渣 ,
重复 “ 2.2”项下操作两次 , 过滤后分别收集各部滤液 , 并按照
“ 2.1”项下方法测定各部滤液的吸光度 。结果见表 2。
表 2　微波提取次数对 FOV提取的影响
提取次数 瓶尔小草提取液吸光度(A)夏季　　　　　秋季　　　　冬季
1 0.223 0.165 0.105
2 0.085 0.041 0.042
3 0.002 0.005 0.003
从表 2可以看出 , 对样品提取 2次 , 不同季节的瓶尔小草中
的黄酮类化合物提取完全。本实验选择微波提取 2次。
3.3　黄酮类化合物含量的测定 分别称取不同季节的瓶尔小草
干粉 3份 , 每份 5g, 按 “ 2.1”和 “ 2.2”项下方法进行提取和测定。
结果见表 3。
从表 3可以看出 , 夏 、秋 、冬季节的瓶尔小草中 , 以夏季瓶尔
小草中的黄酮类化合物含量最高 ,若对瓶尔小草中的黄酮类化合
物开发利用 , 应该选择夏季进行采收。
3.4　样品回收率实验 结果见表 4。由表 4可以看出本实验的
平均回收率为 99.30%,相对标准偏差(RSD%)为 2.457%。
表 3　不同季节 FOV的含量
样品名称 FOV含量C/mg· (gDW)-1
1　　　　2　　　　3
平均值 C/
mg· (gDW)-1
RSD
(%)
夏季瓶尔小草 58.14 58.75 58.36 58.42 0.529
秋季瓶尔小草 39.56 38.97 39.43 39.32 0.789
冬季瓶尔小草 28.82 27.63 27.98 28.14 2.173
　　n=3
表 4　回收率实验结果
提取液FOV含量 C/
mg· ml-1
加入芦丁量
C/mg· ml-1
总黄酮含量
C/g· ml-1
回收率
(%)
RSD
(%)
1.067 0.120 1.185 98.33
1.067 0.240 1.312 102.08 2.457
1.067 0.360 1.418 97.50
3.5　精密度实验 结果见表 5。从表 5可以看出 , 相对标准偏差
为 0.647%,结果显示重复性较好 , 精密度较高。
表 5　精密度实验结果
样品号 FOV含量C/mg·(gDW)-1 RSD(%)
1 58.14
2 58.75
3 58.36
4 57.65 0.647
5 57.98
6 58.36
　　n=6
4　讨论
4.1　瓶尔小草黄酮类化合物含量的变化 随季节的不同 ,瓶尔小
草的黄酮类化合物的含量有着显著的差异 ,夏季其含量为 58.42
mg/gDW,秋季为 39.32 mg/gDW,冬季为 28.14mg/gDW。说明
夏季是瓶尔小草黄酮类化合物含量最高时期即最佳采收期 ,这与
瓶尔小草夏末秋初采收相符。这可能因为从开春到夏季 ,随着植
物生长逐渐变得旺盛 ,其代谢活动也愈来愈旺盛 , 总黄酮含量呈
现上升趋势 , 到夏季达到高峰;到了秋 、冬季节 , 气温降低 、气候干
燥 , 其代谢受到抑制 , 瓶尔小草茎叶逐渐变黄枯萎 ,故从夏季到秋
季 , 再到冬季 ,其总黄酮含量呈下降态势 [ 6] 。
4.2　提取测定方法稳定可靠 以芦丁为标准品 ,具有简便 、稳定 、
结果可靠的优点 ,对进一步开发利用瓶尔小草中黄酮类化合物很
有实际价值。
参考文献:
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