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药
研
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毛钩藤不同采收期总生物碱与多糖含量变化研究
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★ 唐才林1 高言明1＊＊ 杨春2 林昌虎3 吴明花1 徐东升1 (1．贵阳中医学院 贵州 贵阳 550002;2．
贵州理工学院 贵州 贵阳 550003;3．贵州科学院 贵州 贵阳 550001)
摘要:目的:通过测定不同采收期毛钩藤中总生物碱和多糖含量变化情况，研究毛钩藤的最佳采收期。方法: 总生物碱和多糖
均采用紫外———可见分光光度法进行测定。结果:毛钩藤中的总生物碱和多糖含量变化与当地气温密切相关，在气温相对较
高的时段其含量较低，在气温相对较低的时段其含量较高。结论:毛钩藤药材的采收期在每年的深秋至次年的夏末，此时段
采收毛钩藤的质量相对较好。
关键词:毛钩藤;毛钩藤总生物碱; 多糖;紫外 －可见分光光度法
中图分类号:Ｒ286 文献标识码:A
中国药典 2010 版上还未收载采用有效成分含
量作为中药钩藤质量评价的标准［1］，钩藤药材的采
收期是根据民间习惯于秋、冬二季采收。钩藤在临
床上主要用于降压，其药效成分主要为生物碱类，本
实验通过考察不同采收期毛钩藤中总生物碱与多糖
含量的变化情况来研究毛钩藤的最佳采收期具有一
定的现实意义。
1 仪器与试药
紫外 －可见分光光度计(岛津 UV － 2501PC) ;
AE －240 双量程电子分析天平(梅特勒 －托利多上
海有限公司) ;pH 计(上海精密科学仪器有限公
司)。异钩藤碱对照品(批号:111927 － 201102，中
国食品药品检定研究院) ;醋酸，醋酸钠，溴甲酚绿，
葡萄糖，氨水，三氯甲烷等均为分析纯，水为蒸馏水。
药材样品采自贵州省开阳县翁昭村毛钩藤种植基地
人工种植五年生毛钩藤，采样于 2012 年 1 月 ～ 2012
年 12 月，按每月 1 ～ 10 号之内在同一毛钩藤种植区
域中采取带钩老茎枝作为样品，经贵阳中医学院付
志明鉴定为茜草科植物毛钩藤(Uncaria hirsute Hav-
il) ，药材样品在室内阴干经粉碎后于 45℃烘至恒重
并置于干燥器中备用。
2 方法与结果
2． 1 毛钩藤总生物碱含量分析［2］
2． 1． 1 溶液的制备
2． 1． 1． 1 对照品溶液和供试品溶液的制备 取异
钩藤碱对照品 10． 30mg，精密称定，置 100mL 量瓶
中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为
103． 00μg /mL的对照品溶液。精密称取钩藤样品
粉末约 0． 16g，置于 50mL 具塞的锥形瓶中，加入
1%盐酸甲醇 10mL，放入 4℃冰箱中冷浸 12h 后取
出，室温超声 45min，滤过，再加入 1% 盐酸甲醇
10mL，室温超声 45min，滤过，合并滤液于蒸发皿中，
置 60℃水浴中挥干滤液，残渣加 10mL稀氨水溶解，
使溶液呈碱性，转移至分液漏斗中，加 10mL 氯仿，
充分振摇萃取 3min，静置分层，收集氯仿层，反复萃
取 3 次，将合并的氯仿层于蒸发皿中 60℃水浴挥
干，残渣加 pH = 3． 4 的缓冲液和酸性染料各 5mL，
溶解后转移至分液漏斗中，精密加入 10mL 氯仿，充
分振摇萃取 3min，静置分层，收集氯仿层，反复萃取
3 次，合并氯仿层溶液，即为显色后的供试品溶液。
2． 1． 1． 2 醋酸 － 醋酸钠缓冲溶液的制备 配制
0. 2mol /L的醋酸钠溶液 250mL，0． 2mol /L的醋酸溶
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基金项目:贵州省重大科技专项(黔科合重大专项字［2012］6010 号) ;贵阳市科技计划项目(筑科合同［2011204］8 号)。
通信作者:高言明(1956 －) ，男，教授，硕士生导师。研究方向:中药质量控制及新药研发。E － mail:gymgym2006@ sohu． com。
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液 500mL，备用，使用之前按醋酸钠溶液约 0． 88mL
与醋酸溶液约 24． 12mL混匀，用 pH计精密调至 pH
=3． 4。
2． 1． 1． 3 溴甲酚绿酸性染料溶液的制备 称取溴
甲酚绿 0． 25g，加 0． 05mol /L 的氢氧化钠溶液 5mL
研磨，再加水配成 500mL，用三氯甲烷洗弃脂溶性杂
质至三氯甲烷层不显色，储存于 500mL 容量瓶中备
用。
2． 1． 2 测定波长的选择 分别用按 2． 1． 1． 1 项制
备并显色后的供试品和对照品溶液，同法制备空白
溶液，在紫外 －可见分光光度计 300 ～ 500nm 波长
范围内扫描，得最大吸收波长为 410nm。
2． 1． 3 显色条件的选择
2． 1． 3． 1 缓冲液 pH 值的选择 由于在显色体系
中 pH值对显色效果影响最大，因此首先配制 pH值
分别为 3． 1，3． 4，3． 6，3． 8，4． 0，4． 2，4． 4 的醋酸 －醋
酸钠缓冲溶液。精密量取 6 份异钩藤碱对照品溶液
各 5mL于蒸发皿中，60℃水浴上挥干溶剂后分别用
以上缓冲溶液各 5mL 和 5mL 溴甲酚绿酸性染料溶
解残渣，转移至分液漏斗中，再精密加入 10mL 氯
仿，充分振摇萃取 3min，静置分层，收集氯仿层，反
复萃取 3 次，合并氯仿层溶液，同法制备 7 个相应
pH值的空白溶液，于紫外 －可见分光光度计 410nm
波长处测定吸光度，结果见表 1。结果显示缓冲溶
液 pH为 3． 4 时吸光度最大，故选择之。
表 1 缓冲溶液不同 pH值试验结果
编号 1 2 3 4 5 6 7
pH 3． 1 3． 4 3． 6 3． 8 4． 0 4． 2 4． 4
吸光度 0． 160 0． 300 0． 189 0． 219 0． 277 0． 138 0． 130
2． 1． 3． 2 溴甲酚绿溶液用量的选择 精密吸取对
照品溶液共 5 份，每份 2mL，于蒸发皿中在 60℃水
浴锅上缓慢蒸干，分别加入 pH 为 3． 4 的缓冲溶液
5mL和不同体积的溴甲酚绿酸性染料溶解残渣，按
2． 1． 3． 1 项“转移至分液漏斗中”同法操作，并同法
制备 5 个相应溴甲酚绿酸性染料用量的空白溶液在
410nm波长处测定吸光度。结果见表 2，可知溴甲
酚绿酸性染料用量为 5mL时较为适宜。
表 2 溴甲酚氯染料用量选择试验结果
编号 1 2 3 4 5
染料用量 /mL 3 4 5 6 7
吸光度 0． 201 0． 249 0． 304 0． 110 0． 070
2． 1． 4 线性关系考察 分别精密吸取浓度为
103. 00μg /mL的异钩藤碱对照品 2． 0，4． 0，5． 0，
7. 0，9. 0mL于 5 个 10mL 的容量瓶中，加甲醇稀释
至刻度，摇匀，得一系列浓度梯度的对照品溶液。分
别精密吸取上述各浓度的对照品溶液 5mL 于蒸发
皿中 60℃水浴上挥干，残渣按 2． 1． 1． 1 项下“残渣
加 pH =3． 4 的缓冲液和酸性染料各 5mL”起同法操
作，以相应试剂为空白，用紫外 －可见分光光度计在
410nm波长处测定吸光度，以对照品的浓度(μg /
mL)为横坐标(X) ，吸光度为纵坐标(Y)进行回归计
算，得总生物碱的回归方程为:Y = 0． 053X +
0. 0422，r = 0． 9997。结果表明总生物碱在 3． 43 ～
15. 45μg /mL的范围内线性关系良好。
2． 1． 5 精密度试验 精密吸取按上述方法制备的
对照品溶液 5mL，显色后，分别测定 6 次吸光度，计
算 ＲSD为 2． 41%。
2． 1． 6 稳定性试验 精密吸取按“2． 1． 1． 1”项下
制备的供试品溶液，分别在 0，0． 5，1，1． 5，2，2． 5，3h
进行吸光度测定，计算 ＲSD 为 1． 38%，表明供试品
溶液在 3h内稳定性良好。
2． 1． 7 重复性试验 精密称取 3 月份采收的毛钩
藤样品粉末 6 份，每份约 0． 16g，分别置于 6 个 50mL
具塞锥形瓶中，按“2． 1． 1． 1”项下“供试品溶液的制
备”方法制备供试液，同法作试剂空白，用紫外 －可
见分光光度计在 410nm处测定吸光度，计算出该钩
藤药材的总生物碱(以异钩藤碱计)的平均含量为
0． 17%，ＲSD为 1． 81%。
2． 1． 8 加样回收率试验 精密称取已知总生物碱
平均含量为 0． 17%的毛钩藤样品粉末 6 份，每份约
0． 08g，分别置 6 个 50mL 具塞锥形瓶中，每份分别
精密加入浓度为 144． 00μg /mL 的异钩藤碱对照品
1mL，按“2． 1． 1． 1”项下“供试品溶液的制备”方法
制备供试液，同法作试剂空白，用紫外 －可见分光光
度计在 410nm处测定吸光度，计算得平均回收率为
100． 78%，ＲSD%为 2． 81。
2． 1． 9 样品含量测定 按 2． 1． 1． 1 项下制备方法，
对各毛钩藤样品进行供试溶液制备，每份样平行 3
份，同法作试剂空白，用紫外 －可见分光光度计在
410nm处测定吸光度，计算出总生物碱(以异钩藤
碱计)的含量，结果见表 1。
2． 2 毛钩藤多糖含量分析［3］
2． 2． 1 对照品溶液和供试品溶液的制备 取经
105℃干燥至恒重的无水葡萄糖 0． 0903g，精密称
定，置 100mL 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇
匀，即得浓度为 903． 00μg /mL的对照品溶液。取毛
钩藤样品粉末约 0． 4g，精密称定，置于 100mL 圆底
烧瓶中，加水 50mL，称定重量，静置 1h，加热回流
1h，取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，
摇匀，过滤。精密吸取续滤液 10mL，置 100mL 的容
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江西中医药 2014 年 9 月第 9 期总 45 卷第 381 期
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量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取 2mL，置具塞的
比色管中，精密加入 4%苯酚溶液 1mL，混匀，迅速
精密加入浓硫酸 7mL，摇匀，置 40℃水浴中保温
30min，取出，放冷至室温，即得供试品溶液。
2． 2． 2 苯酚溶液的制备 称取已重蒸馏过的苯酚
10． 00g，置于 250mL 的容量瓶中，加水溶解并稀释
至刻度，得浓度为 4%的苯酚溶液，备用。
2． 2． 3 线性关系考察 分别精密吸取浓度为 903．
00μg /mL的葡萄糖对照品溶液 2． 5，3． 5，4． 5，5． 5，
6． 5，8． 0mL，分别置于 6 个 100mL的容量瓶中，各加
水稀释至刻度，摇匀，得一系列浓度梯度的对照品溶
液。分别精密吸取上述浓度的对照品溶液 2mL，置
具塞比色管中，各精密加入 4%苯酚溶液 1mL，混
匀，迅速精密加入浓硫酸 7mL，摇匀，置 40℃水浴中
保温 30min，取出，放冷至室温，同法做试剂空白，用
紫外 －可见分光光度计在 488nm 波长处测定吸光
度，以对照品的浓度(μg /mL)为横坐标(X) ，吸光度
为纵坐标(Y)进行回归计算，得多糖的回归方程为:
Y = 0． 0545X + 0． 0015，r = 0． 9994。结果表明多糖在
4． 52 ～ 14． 45μg /mL的范围内线性关系良好。
2． 2． 4 精密度试验 精密吸取浓度为 903． 00μg /
mL的对照品溶液 5mL，置于 100mL 的量瓶中，加水
稀释至刻度，得浓度为 45． 15μg /mL的对照品溶液，
精密吸取上述对照品溶液 2mL，显色后分别进行吸
光度测定，以 6 次测得的吸光度计算 ＲSD 为
2. 49%，表明仪器精密度良好。
2． 2． 5 稳定性试验 精密吸取按“2． 2． 1”项下制
备的供试品(3 月份采收样品)溶液，分别在 0，1，
1. 5，2，2． 5，3h进行吸光度测定，以测得的吸光度计
算 ＲSD为 0． 18%，表明供试品溶液在 3h 内稳定性
良好。
2． 2． 6 重复性试验 取 6 份钩藤样品(3 月份采收
样品)粉末，每份约 0． 4g，精密称定，分别置于 6 个
100mL圆底烧瓶中，按“2． 2． 1”项下“供试品溶液的
制备”方法制备供试液，同法作试剂空白，用紫外 －
可见分光光度计在 488nm 处测定吸光度，计算出该
钩藤药材中的多糖(按葡萄糖计)的平均含量为 7．
42%，ＲSD为 2． 06%。
2． 2． 7 加样回收率试验 称取已知多糖平均含量
为 7． 42%的钩藤样品粉末 6 份，每份约 0． 2g，精密
称定，分别置于 100mL 圆底烧瓶中，每份分别精密
加入浓度为 281． 18μg /mL 的葡萄糖对照品溶液
50mL，按“2． 2． 1”项下“供试品溶液的制备”方法制
备供试液，同法作试剂空白，用紫外 －可见分光光度
计在 488nm 处测定吸光度，结果平均回收率为
98. 57%，ＲSD%为 2． 70。
2． 2． 8 含量测定 称取钩藤样品，每样各 3 份，每
份约 0． 4g，精密称定，按“2． 2． 1”项下“供试品溶液
的制备”方法制备供试液，同法作试剂空白，用紫外
－可见分光光度计在 488nm 处测定吸光度，计算出
多糖(按葡萄糖计)的含量，结果见表 3。
表 3 毛钩藤不同采收期总生物碱和多糖含量测定结果( n = 3，% )
采收
月份
总生物碱
平均含量
多糖
平均含量
采收
月份
总生物碱
平均含量
多糖
平均含量
1 0． 18 16． 29 7 0． 10 5． 50
2 0． 14 11． 06 8 0． 07 3． 69
3 0． 17 7． 42 9 0． 05 4． 85
4 0． 20 7． 69 10 0． 07 8． 89
5 0． 09 11． 81 11 0． 10 11． 84
6 0． 05 7． 59 12 0． 10 15． 89
3 讨论
多糖并非毛钩藤的药效成分，然而通过实验观
察到多糖含量与生物碱含量变化存在一定正相关
性，可为分析毛钩藤内在质量变化提供辅助信
息［4］。
毛钩藤中的总生物碱在全年通常气温相对较高
的 5 ～ 10 月份时段含量相对较低，此时段多糖含量
也呈现相应含量较低的状态，而在当年 11 月到次年
4 月份气温相对较低时段总生物碱含量相对较高，
此时段多糖含量也呈现相应含量较高的状态，说明
植物体内糖份的积累变化与生物碱的含量变化基本
一致，气温的高低是毛钩藤中总生物碱及多糖含量
有明显直接影响的因素。因此贵州开阳县翁昭村毛
钩藤种植基地种植的毛钩藤采收期应选择气温相对
较低的时段采收为宜，与中国药典 2010 版对钩藤采
收期于“秋、冬二季采收”叙述有一定差异，这或许
与特定地点的地理环境和气候有密切关系所致。
参考文献
［1］国家药典委员会．中国药典·一部［S］． 北京:化学工业出版社，
2010:240．
［2］曾常青，罗北亮．酸性染料比色法测定钩藤的总生物碱含量［J］．
中药材，2007，30(8) :1021 － 1024．
［3］国家药典委员会．中国药典·一部［S］． 北京:化学工业出版社．
2010:206．
［4］蒋品，高言明，杨玉琴，等．龙胆不同采收期龙胆苦苷和多糖含量
变化研究［J］．江西中医药，2011，42(2) :55 － 57．
( 收稿日期: 2014-05-16) 编辑:曾文雪
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