全 文 ：第 32 卷第 4 期
2012 年 8 月
林 产 化 学 与 工 业
Chemistry and Industry of Forest Products
Vol． 32 No． 4
Aug． 2012
高效液相色谱法同时测定互叶白千层中的
槲皮素和山奈酚
收稿日期:2011 － 08 － 21
基金项目:广西自然科学基金资助项目(2010GXNSFB013085)
作者简介:林 霄(1981 －) ，男(壮族) ，广西南宁人，助理研究员，主要从事天然产物化学的分析鉴定及质量控制研究
* 通讯作者:刘布鸣，男，研究员，从事中药、天然药化学成分与质量标准研究;E-mail:liubuming@ yahoo． com． cn。
LIN Xiao
林 霄1，2，董晓敏1，2，陈明生1，2，黄 艳1，2，刘布鸣1，2
*
(1．广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022;
2．广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022)
摘 要: 用高效液相色谱法同时测定广西 5 地互叶白千层中槲皮素和山奈酚含量。样品用盐
酸－甲醇(体积比 5 ∶ 100)混合溶液水浴加热回流提取，C18柱色谱分离，以甲醇－乙腈－0． 4 % 磷
酸(体积比 21 ∶ 21 ∶ 58)水溶液为流动相，检测波长 370 nm，柱温为室温，流速 1 mL /min。测定了
不同产地互叶白千层中的槲皮素和山奈酚质量分数，其中邕宁南晓的槲皮素和山奈酚的质量分数最高，分别为 5． 151 和
2． 530 mg /g，邕宁的槲皮素和山奈酚的质量分数为最低，分别为 2． 386 和 1． 658 mg /g。
关键词: 互叶白千层;槲皮素;山奈酚;高效液相色谱法
中图分类号:TQ351 文献标识码:A 文章编号:0253 － 2417(2012)04 － 0113 － 04
Simultanous Determination of Quercetin and Kaempferol in Melaleuca
alternifolia (Maiden et Betehe)Chee 1 by HPLC
LIN Xiao1，2，DONG Xiao-min1，2，CHEN Ming-sheng1，2，HUANG Yan1，2，LIU Bu-ming1，2
(1． Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Stardands，Nanning 530022，China;
2． Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China)
Abstract:A high-performance liquid chromatography(HPLC)method was developed for simultaneous determination of quercetin
and kaempferol in Melaleuca alternifolia (Maiden et Betehe)Chee 1． The sample was extractd by HCl-MeOH solution(volume
ratio 5 ∶ 100)in water bath，then separated by a C18 column with CH3OH-C2H3N-0． 4% phosphoric acid solution (volume ratio
21 ∶ 21 ∶ 58)as the mobile phase solution under 370 nm wavelength． The HPLC experiment was performed at room temperature
with flow rate 1． 0 mL /min． Quercetin and kaempferol contents in M． alternifolia from different area were determined． The result
showed that quercetin and kaempferol content in Nanxiao town of Yongning was the highest and that in Yongning was the lowest．
Key words:Melaleuca alternifolia (Maiden et Betehe)Chee 1;quercetin;kaempferol;HPLC
互叶白千层系桃金娘科白千层属互叶白千层(Melaleuca alternifolia (Maiden et Betehe)Chee 1) ，原
产于澳大利亚和新西兰的部分地区［1］。我国的两广、海南、福建等地在 20 世纪 90 年代引种并形成了一
定的种植规模，如广西的钦州、邕宁等地均有种植加工基地，资源十分丰富。互叶白千层枝叶挥发油简
称茶树油，油中含多种生物活性成分，对细菌、真菌和病毒具有较强的杀灭和抑制作用，在医药领域广泛
应用;此外还应用于日用卫生品、皮肤保健品、化妆品、药品等行业［2－5］，具有较高的市场经济价值。除
了挥发油成分外，人们在互叶白千层中还提取分离得到了黄酮类、甾体、长链脂肪烃、长链脂肪酸以及三
萜皂苷类等化合物［6－9］，还研究了蒸馏时间与互叶白千层精油主要化学成分及出油率的关系［10］，然而
关于互叶白千层中黄酮类化合物的含量测定未见文献报道，本研究采用高效液相色谱法，对其中的黄酮
类化合物槲皮素和山奈酚同时进行含量测定，并测定了来源于不同产地的互叶白千层植物 5 个样品中
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槲皮素和山奈酚的含量。以期为互叶白千层植物化学成分分析提供基础理论，同时也为互叶白千层药
材的质量标准研究奠定基础和依据。
1 实 验
1． 1 样品
槲皮素对照品(批号 100081 － 200406，供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供，经面积归
一化法测定，纯度 ＞ 98 %;山奈酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110861 － 200405，供含量测
定用)纯度 ＞ 98 %。互叶白千层干燥枝叶，采集于武鸣、钦州、玉林、邕宁等地，经广西中医药研究院中
药研究所赖茂祥研究员鉴定为互叶白千层，取枝叶，粉碎，过 180 μm孔筛，备用。
1． 2 仪器与试剂
江苏昆山 KQ5200B型超声波仪(160 W，40 KHz) ，上海 TG328A型分析天平，Waters 515 高效液相
色谱仪及 2487 紫外检测器，威玛龙WM2010 型通用多媒体色谱工作站。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯
水，其他试剂均为分析纯。
1． 3 色谱条件
色谱柱:大连依利特 Sino Chrom ODS－BP(5 μm，4． 6 mm ×250 mm) ;流动相:甲醇－乙腈 － 0． 4 % 磷
酸水溶液(体积比 21 ∶ 21 ∶ 58) ;流速 1 mL /min;检测波长 370 nm;柱温室温;进样量 10 μL。
1． 4 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素和山奈酚对照品适量，加甲醇制成质量浓度为槲皮素 24 mg /L，山奈酚 15 mg /L 的
混合对照品溶液。
1． 5 供试品溶液的制备
取互叶白千层植物粉末 0． 2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入 5 % 盐酸甲醇溶液 30 mL，密塞，
称定质量，水浴回流 1 h，放冷至室温，用 5%盐酸甲醇溶液补足减失质量，摇匀，过滤，再用 0． 45 μm 微
孔滤膜滤过，舍弃前 2～5 mL滤液，取后过滤液作为供试品溶液。
1． 6 线性关系的考察
分别精密称取槲皮素和山奈酚对照品各 10 mg，分置 10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀，得含 1 g /L的槲皮素和山奈酚储备溶液。精密量取上述两种储备溶液各 2． 5 mL，分置 25 mL容量瓶
中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得含 100 mg /L 槲皮素和山奈酚对照品溶液，备用。分别精密吸取
100 mg /L的槲皮素对照品 1． 2、1． 8、2． 4、3． 0、3． 6 和 4． 2 mL于 10 mL容量瓶中，100 mg /L的山奈酚对
照品 0． 6、0． 9、1． 2、1． 5、1． 8 和 2． 1 mL至上述同一 10 mL容量瓶中，加甲醇－乙腈－0． 4%磷酸水溶液
稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，进行测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回
归，绘制标准曲线，计算回归方程。回归方程及相关系数如下:槲皮素 Y = 101 451x － 193 458，r = 0． 999 3，
图 1 槲皮素和山奈酚紫外波长扫描图
Fig． 1 The UV plots of quercetin and kaempferol
线性范围 0． 12～0． 42 mg /L;山奈酚 Y = 81 282x + 1 212． 1，
r = 0． 999 2，线性范围 0． 06～0． 21 mg /L。
2 结果与讨论
2． 1 检测波长的选择
对槲皮素和山奈酚对照品溶液进行紫外波长扫描，其
结果如图 1。由图可知，槲皮素在 371 nm处有最大吸收，山
奈酚在 365 nm处有最大吸收，故选 370 nm作为检测波长。
2． 2 对照品和样品的高效液相色谱测定
柱效按槲皮素峰计算，理论塔板数大于 5 000。槲皮素
和山奈酚的分离度均大于 1． 5，见图 2。
第 4 期 林 霄，等:高效液相色谱法同时测定互叶白千层中的槲皮素和山奈酚 115
图 2 对照品(a)和样品(b)的色谱图
Fig． 2 Chromatograms of standard (a)and sample of M． alternifolia (b)
图 3 不同提取时间得率的比较
Fig． 3 Comparison of yield at different extrac-
ting times
2． 3 提取时间的考察
对回流 30、60、90、120 min 后样品中槲皮素、山奈酚的
得率进行比较，结果发现回流 60 min 的得率显著高于
30 min，而与回流 120 min 的得率相当(见图 3) ，表明回流
60 min基本将样品中的槲皮素和山奈酚提取完全，为缩短
分析时间，选择回流时间为 60 min。
2． 4 样品含量测定
取不同来源互叶白千层植物，按照 1． 5 节方法平行制
备两份供试品溶液，分别进样，测定槲皮素和山奈酚峰面
积。用外标法计算含量，测定结果见表 1。
采用以上方法分析了不同产地互叶白千层中的槲皮素
和山奈酚质量分数。结果表明，不同产地互叶白千层中的
槲皮素和山奈酚质量分数差异明显，其中邕宁南晓的槲皮
素和山奈酚的质量分数最高，分别为 5． 151 和 2． 530 mg /g，邕宁的槲皮素和山奈酚的质量分数最低，分
别为 2． 386 和 1． 658 mg /g。
表 1 样品含量测定结果(n =2)
Table 1 The results of five samples (n =2) mg /g
产地
places
槲皮素的质量分数
quercetin content
山奈酚的质量分数
kaempferol content
武鸣高峰 Gaofeng town in Wuming 2． 756 1． 716
钦州灵山县 Linshan town in Qinzhou 3． 161 2． 024
玉林 Yulin 4． 817 2． 252
邕宁南晓 Nanxiao town in Yongning 5． 151 2． 530
邕宁 Yongning 2． 386 1． 658
2． 5 精密度试验
2． 5． 1 对照品溶液精密度试验 取含槲皮素 24 mg /L，山奈酚 15 mg /L的混合对照品溶液，在 1． 3 节条
件下连续进样 6 次，每次 10 μL，槲皮素和山奈酚峰面积的 RSD值分别为:0． 951 %，1． 06 %。
2． 5． 2 供试品溶液精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，按 1． 3 节条件连续进样 6 次，结果，槲皮素
和山奈酚峰面积的 RSD值分别为:1． 01 %、1． 37 %。
2． 6 稳定性试验
取同一供试品，照 1． 5 节方法制备供试品溶液，按 1． 3 节色谱条件，12 h内每间隔 2 h进样，测定，结
果槲皮素峰面积的 RSD为 1． 33 %;山奈酚峰面积的 RSD为 1． 76 %，结果表明，供试品溶液在 12 h内基
本稳定。
116 林 产 化 学 与 工 业 第 32 卷
2． 7 重复性试验
精密称取同一批次互叶白千层植物粉末各 6 份，按 1． 5 节和 1． 3 节方法测定峰面积并计算。结果，
槲皮素平均质量分数 3． 190 mg /g，RSD为 1． 19 %，山奈酚平均质量分数 1． 715 mg /g，RSD为 2． 77 %。
2． 8 加样回收率试验
分别取已测知含量的互叶白千层植物粉末各 0． 1 g，共 6 份，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入
100 mg /L的槲皮素 3． 2 mL，100 mg /L的山奈酚 1． 7 mL，按 1． 5 节和 1． 3 节方法测定峰面积并计算，结
果槲皮素的平均回收率 101． 3 %，RSD为 2． 00 %，山奈酚的平均回收率 99． 92 %，RSD为 2． 04 %。
3 结 论
3． 1 采用盐酸－甲醇(体积比 5 ∶ 100)混合溶液水浴加热回流的提取方法，以高效液相色谱法，C18 柱色
谱，甲醇－乙腈－0． 4%磷酸(体积比 21 ∶ 21 ∶ 58)水溶液为流动相，紫外检测，波长 370 nm，室温下测定不
同产地互叶白千层中槲皮素和山奈酚的含量。
3． 2 利用高效液相色谱分析方法简便、快速测定互叶白千层中的槲皮素和山奈酚的含量，槲皮素的线
性范围为 0． 12～0． 42 mg /L(r = 0． 999 3) ，平均回收率 101． 3 %;山奈酚的线性范围为 0． 06～0． 21 mg /L
(r = 0． 999 2) ，平均回收率 99． 92 %。该方法精密度高、稳定性好、重复性高。
3． 3 用以上实验方法测定了不同产地互叶白千层中的槲皮素和山奈酚质量分数，结果为邕宁南晓的槲
皮素和山奈酚的质量分数最高，分别为 5． 151 和 2． 530 mg /g，邕宁的槲皮素和山奈酚的质量分数最低，
分别为 2． 386 和 1． 658 mg /g。
参考文献:
［1］SHABIR G． A． Method development and validation for the GC-FID assay of p-cymene in tea tree oil formulation［J］． Journal of Pharmaceutical
and Biomedical Analysis，2005，39(3 /4) :681－684．
［2］金其璋．什么是茶树油［J］．香料香精化妆品，2001(3) :37－39，9．
［3］丁恺．茶树油的性质、应用及市场发展［J］．牙膏工业，2005(1) :44－46．
［4］张孝祺，林雄，吴玉鑾，等．广东互叶白千层茶树油产品主要成分的质量标准研究［J］．广东化工，2002(6) :12－16．
［5］刘布鸣，彭维．白千层挥发油化学成分分析［J］．分析测试学报，1999，18(6) :70－72．
［6］VIEIRA T R，BARBOSA L C A，MALTHA C R A，et al． Constituintes químicos de Melaleuca alternifolia (Myrtaceae) ［J］． Química Nova，
2004，27(4) :536－539．
［7］刘布鸣，董晓敏，黄艳，等．互叶白千层的化学成分研究［J］．中草药，2011，42(7) :1282－1284．
［8］林霄，董晓敏，黄艳，等．互叶白千层脂溶性成分的 GC－MS分析［J］．中国民族民间医药，2010，19(20) :154－154，156．
［9］张燕君，古佛政．互叶白千层精油化学成分的研究［J］．林产化学与工业，1998，18(3) :74－76．
［10］张燕君，陈利芳．蒸馏时间与互叶白千层精油主要化学成分及出油率关系的研究［J］．林产化学与工业，2002，22(3) :
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本 刊 信 息
《林产化学与工业》再次入选北大中文核心期刊
由中国林科院林产化学研究所与中国林学会林产化学化工分会主办的学术类期刊《林产化学与工
业》再次入选北大《中文核心期刊要目总览》(第六版)的核心期刊。本次核心期刊的评选，依据文献计
量学的原理和方法，采用了被索量、被摘量、被引量、他引量、被摘率、影响因子、被国内外重要检索工具
收录、基金论文比、Web下载量等 9 个评价指标，选作评价指标统计源的数据库及文摘刊物达 60 余种，
涉及期刊 14400 余种。经过定量筛选和专家定性评审，入编核心的期刊有 1982 种，分为 73 个学科。
《林产化学与工业》被收录在北大《中文核心期刊要目总览》“化学工业类(TQ35)”。